2019年西南大学春季[1117]《细胞工程》辅导答案

单项选择题1、原生质体融合过程中，利用两种原生质体的某些可见标志，如形态色泽上的差异等对融合产物进行鉴别，在其可辨特征消失之前，将融合的细胞从混合群体中挑选出来进行单独培养的方法是（           ）1.  抗性互补选择2.  间接选择3.  培养基选择4.  叶绿体缺失互补选择5.  机械选择  6.  激素自养型互补选择2、细胞脱分化调控机理中，细胞周期运行的动力主要来自于（    ）1.  CKI2.  CDK  3.  细胞激素4.  磷酸化5.  蛋白水解酶6.  cyclin3、TE细胞分化的第三阶段是（       ）1.  TE细胞特化阶段  2.  叶肉细胞向TE细胞的转分化阶段3.  叶肉细胞脱分化阶段4.  TE形成阶段5.  愈伤组织形成阶段6.  TE基因表达阶段4、最容易引起体细胞变异的因素是（       ）1.  空气2.  温度3.  光照4.  培养时间5.  培养基6.  继代次数  5、下列冰冻保护剂，属于非渗透型冰冻保护剂的是（          ）1.  甘油2.  二甲亚砜3.  PG4.  乙酰胺5.  聚乙二醇  6.  乙二醇6、脱毒检测的血清学方法中，在半固体的凝胶（如琼脂、明胶）中测定在其中扩散的抗原和抗体间的沉淀反应的方法是（             ）1.  F. 试管沉淀反应2.  血清鉴定3.  间接鉴定4.  核酸杂交分子鉴定5.  免疫双扩散  6.  酶联免疫吸附测定7、人工种子包被的繁殖体中，播种后最容易长成小植株的是（      ）1.  A. 茎2.  B. 蕾3.  花4.  根5.  叶6.  胚  8、水稻胚性与非胚性愈伤组织的蛋白质含量变化显示（         ）1.  醇溶性蛋白高于非胚性愈伤组织，胚性愈伤组织水溶性和盐溶性高于非胚性愈伤组织2.  胚性愈伤组织水溶性和盐溶性高于非胚性愈伤组织，醇溶性蛋白低于非胚性愈伤组织3.  醇溶性蛋白等于非胚性愈伤组织，胚性愈伤组织水溶性和盐溶性高于非胚性愈伤组织4.  胚性愈伤组织水溶性和盐溶性低于非胚性愈伤组织，醇溶性蛋白高于非胚性愈伤组织5.  胚性愈伤组织水溶性和盐溶性等于非胚性愈伤组织，醇溶性蛋白高于非胚性愈伤组织6.  胚性愈伤组织水溶性和盐溶性低于非胚性愈伤组织，醇溶性蛋白低于非胚性愈伤组织  9、动物细胞中，不能贴壁生长，呈悬浮状态生长的细胞有（           ）1.  骨髓细胞  2.  表皮细胞3.  成纤维细胞4.  肌肉细胞5.  神经细胞6.  皮肤组织细胞10、原生质体培养中，既有液体培养基又有固体培养基的方法是（    ）1.  固体平板培养2.  液体浅层 固体平板双层培养  3.  琼脂糖珠培养4.  微滴培养5.  液体浅层培养6.  悬滴培养主观题11、超低温保存参考答案：-80以下低温下，活细胞的物质代谢和生命活动几乎完全停止，而恢复到常温后，植物仍能进行正常的生命活动的离体保存方式称为超低温保存。 12、细胞培养参考答案：在离体条件下对植物单个细胞或小的细胞团进行培养增殖的技术称为细胞培养。 13、细胞工程参考答案：细胞工程是应用细胞生物学和分子生物学方法，借助工程学的实验方法和技术，在细胞水平上研究改造生物遗传特性和生物学特性，以获得特定的细胞、细胞产品或新生物体的有关理论和技术方法的学科。 14、体细胞无性系参考答案：由任何形式的细胞培养产生的植株叫体细胞无性系。 15、愈伤组织参考答案：愈伤组织（Callus）是指外植体在受伤后于其伤口表面形成的一团薄壁细胞。 16、植物转化受体系统参考答案：植物转化受体系统是指用于转化的外植体通过组织培养途径或其它非组织培养途径，能高效、稳定地再生无性系，并能接受外源基因的整合，用于转化选择的抗生素敏感的再生系统。 17、种质保存参考答案：通过离体的方法把遗传物质从上一代保存到下一代称为种质保存。 18、人工种子参考答案：任何一种繁殖体，无论是在涂膜胶囊中包裹的、裸露的或经过干燥的，只要能够发育成完整的植株，均可称之为人工种子。 19、细胞脱分化参考答案：通常认为，培养条件下使一个已分化的细胞回复到原始无分化状态或分生细胞状态的过程叫细胞脱分化。 20、植物离体培养的环境条件有哪些，是如何调控的？参考答案：通常所说的培养条件主要包括光照、温度、培养基pH和培养环境的空气流通程度等。（1）光照（离体培养的光照调节包括光照强度、时间和光质的控制等。光照调节通常是分阶段进行的。培养初期，对于大多数培养类型来讲只需要散射光或弱光照，当外植体细胞启动分裂后或进入分化培养阶段，则需要根据植物类型增强光照。在器官分化阶段，高强度的光照是必要的。光照的控制还与培养目的有关，有些培养类型，如特殊器官诱导等，常常需要合适的光周期和适宜的光源。光照强度的调节大多通过增减单位培养面积的灯管数进行。光照时间的调节则可通过自动定时装置实现自动控制。光质对于离体培养的影响目前资料很少。光质对于器官发生的影响还可能与植物种类、器官类型等有关，因为，在有些植物中，红光及远红光有促进器官形成的功能，光质对于器官形成的影响可能受光敏色素所调节。（2）温度在组织培养中，温度不仅影响细胞的增殖和分化，同时在一些特殊培养中常常还需要采用不同的温度处理。温度的调节还与培养类型有关。一般来讲，组织、器官的培养温度控制可粗放一些，而细胞、原生质体培养温度的控制则要精细。值得注意的是，在可以忍耐的温度范围内，高温对培养物的影响比低温要严重得多。（3）培养基pH在培养过程中，由于培养物对各种成分的吸收并不是同步和相同的，另外培养物本身的代谢产物亦会不断释放到培养基中，这些均会使培养基的pH发生改变。另一个引起pH变化的原因就是高温灭菌。经过高温灭菌后，培养基的pH一般要下降02个单位左右。由于复合培养基成分具有一定的缓冲调节能力，一般培养基高压灭菌后经过l2 d的贮存pH会有一定程度的回复。综合考虑各种因素，在培养基的配制时，一般将培养基的pH调整为5660，具体则应根据培养物对pH的要求而定，但大多数植物以调整为58比较适中。对于某些培养类型来讲，要使用一些缓冲剂。（4）气体调节培养室的透气程度和培养容器的封闭程度均会影响培养过程中的气体交换，进而影响培养物的生长状态。培养物的生长需要氧气，在进行固体培养时，如果组织完全浸入培养基中，与空气隔绝，生长就会停止。培养器皿的封闭性主要与封口方式和材料有关。在进行液体培养时，振荡培养是常用的改善通气条件的培养方式。对于大多数的实验室，培养室一般是全封闭性的。在实验中通常可以观察到，当培养室定期通风，保持有新鲜清洁空气进入培养室时，其培养物生长势强，生长速度快。而封闭性好，没有空气流通的培养室，其培养物生长往往较弱，试管苗叶片变小变薄。21、影响花粉雄核发育的因素有哪些？参考答案：影响雄核发育的因素有：（1）供体植物的基因型；（2）供体植株的生理状态；（3）花粉发育的时期；（4）预处理；（5）培养基成分；（6）活性炭；（7）花药壁因子；（8）温度和光照。 22、目前体细胞杂交技术需要解决的问题有哪些？参考答案：体细胞杂交技术需要解决的问题有：（1）原生质体再生程序效率极低，重复性较差，并且具有基因型的依赖性，需要更加深入地研究植物细胞的分化、脱分化和再分化等发育（2）目前获得的体细胞杂种植株仍限于少数物种；（3）由于难以控制供体和受体基因组有丝分裂和减数分裂中的重组行为，转移期望基因和性状的概率较小。（4）大多数种间体细胞杂种不育，或育性较低，或花粉活力较低。23、体细胞杂交技术的应用在那些方面？参考答案：体细胞杂交技术的应用有：（1）通过体细胞杂交合成新物种；（2）通过体细胞杂交培育作物新种质和新品种；（3）通过体细胞杂交转移细胞质基因控制的性状。 24、体细胞杂交中杂种细胞的选择方法有那些？参考答案：体细胞杂交中杂种细胞的选择方法有：（1）互补选择法：两个具有不同生理或遗传特性的亲本，在形成杂种细胞时能产生互补作用，根据这一特性进行杂种细胞选择的方法称为互补选择法。  激素自养型互补选择；叶绿体缺失互补选择；营养缺陷型互补选择；抗性互补选择；抗光性互补选择。（2）机械选择法：利用两种原生质体的某些可见标志，如形态色泽上的差异等对融合产物进行鉴别，在其可辨特征消失之前，将融合的细胞从混合群体中挑选出来进行单独培养，这一方法称为机械选择法。利用天然颜色标记分离杂种细胞；利用荧光素标记分离杂种细胞；应用荧光激活细胞分选仪自动分离杂种细胞；应用流式细胞仪分离杂种细胞。（3）组织培养筛选法：植物细胞对培养基成分和培养条件的要求与反应不同也可作为选择杂种细胞的依据。因此，可以利用这种特性，或人为地造成杂种细胞生长和分化能力的差异进行杂种细胞的选择。研究发现，融合细胞与未融合细胞对组织培养的反应不同，主张用组织培养筛选法结合形态学观察去鉴别和筛选杂种。25、生物反应器的类型及特点有哪些？参考答案：（1）搅拌式生物反应器搅拌式生物反应器具有混合程度高、适应性广、反应器内温度、pH、溶氧及营养液浓度较易控制等优点，因而在大规模培养中被广泛使用。（2）气动式生物反应器它具有剪切力小、结构简单、避免污染等优点，因而被认为是适宜于植物细胞培养的一类反应器。气动式生物反应器主要有鼓泡式(bubble column bioreactor)和气升式(airlift bioreactor)两种类型。鼓泡式生物反应器其主要优点是没有运动部件，操作不易污染，放大容易，适宜于对剪切力敏感的细胞培养。此外，混合不均匀，液体流动与传质性能检测困难也是该反应器的不足。气升式生物反应器它通过空气循环搅拌培养液，不仅可以保证良好的液体流动性，同时还具有较高的氧传递效果、反应器结构和操作也相对比较简单等特点，因而近年来已在植物细胞规模化培养中广泛使用。（3）固定化细胞生物反应器植物细胞固定化生物反应器有3种类型。一是填充床生物反应器(fixed-bed bioreactor )。由于颗粒问的挤压，常容易造成颗粒破碎使填充床阻塞。同时，混合不均匀、床内氧传递速率低等也是该反应器的主要缺点。（1分）二是流化床生物反应器(fluid-bed bioreactor )。反应器中利用流质的能量使支持物颗粒处于悬浮状态，混合效果较好。但流体的切变力和颗粒的碰撞常造成颗粒破损使细胞外流，同时流体力学的复杂性也使其放大较困难。三是膜生物反应器(membrane bioreactor)。具有容易控制、易于放大、产物易分离、简化下游工艺等优点。但由于膜材料的限制，构建膜生物反应器的成本较高。（4）光照生物反应器植物独特的光合作用功能，使得植物细胞内的多种酶需要光照的刺激和诱导才能合成或表现较高的生理活性。目前人们主要采用在生物反应器的内部设置光照系统，一般是在搅拌或者气升式生物反应器基础上进行改造。（5）转鼓式生物反应器