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微生物学实验指导-微生物对不含氮有机物和含氮化合物的转化作用

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微生物学实验指导-微生物对不含氮有机物和含氮化合物的转化作用

实验二十二,微生物对不含氮有机物和含氮化合物的转化作用,微生物对不含氮有机物和含氮化合物的转化作用,目的要求 实验程序 思考题,目的要求,了解几种物质的转化作用及其检查方法,实验程序,中温性纤维素分解微生物对纤维素的分解(好气性、厌气性) 蛋白质的氨化作用 硝化作用 反硝化作用,实验程序1 (中温性纤维素分解微生物对纤维素的分解),材料: 维素分解细菌琼脂培养基和深层培养液。 菜园土、镊子、无菌培养皿、直径9cm的无菌滤纸、尼龙绳、橡皮圈、染色液等。 好气性纤维素分解菌对纤维素的分解 厌气性纤维素分解菌对纤维素的分解,实验程序2 (好气性纤维素分解菌对纤维素的分解),方法:土粒法 取已融化的纤维素分解细菌琼脂培养基1管,倒入无菌培养皿中,制成平板。 用镊子取无菌滤纸1张,放入已凝固的琼脂平板上,使之紧贴,以使滤纸表面湿润。 用镊子取肥沃菜园土10余粒,均匀放在滤纸表面,进行接种(见图)。 放入28300C条件下培养710d。 结果检查:先观察土粒周围有无黄色、桔黄色、棕色等色斑出现。土粒周围滤纸有无破碎变薄现象。而后挑取少许菌体进行涂片、固定、染色,干燥后,油镜观察并绘图。,实验程序3 (好气性纤维素分解菌对纤维素的分解),实验程序4 (厌气性纤维素分解菌对纤维素的分解),以接种匙取水稻土少量,接种在装有滤纸条纤维素深层培养液中,套上试管套,再用尼龙纸及橡皮筋将管口扎紧. 放入35370C条件下培养1015d。 取出试管,观察培养液中滤纸条有无被分解而透空的地方,如有空洞或滤纸边缘有破碎现象,表示厌氧纤维素分解细菌已大量繁殖,否则继续培养。 用接种环自发酵液滤纸破碎处取菌液一环在载玻片上涂片、固定、染色、镜检并绘图表示观察到的细菌形态。,实验程序5 (蛋白质的氨化作用),材料: 1.牛肉膏蛋白胨培养液一管(5mL)。 2.石蕊试纸(红色)、土壤样品、比色碟、奈氏(Nessler)试剂。 方法: 1.放1小匙土粒于牛肉膏蛋白胨培养液的试管中。 2.在管口内壁悬挂湿红色石蕊试纸1条(见图),然后塞好棉塞,放入28300C的温箱中培养23d。,实验程序6 (蛋白质的氨化作用),实验程序7 (蛋白质的氨化作用),检查结果: 1.观察试纸颜色有无变化,培养液是否浑浊或产膜。如试纸变蓝,说明有氨生成;如培养液浑浊或产膜,则说明有大量氨化细菌聚集。 2.取培养液两滴于比色碟中,加入奈氏试剂1滴,如有棕色或黄棕褐色出现,也说明有氨生成。 3.取培养液1环,制成涂片、染色,油镜下观察氨化细菌的形态,并绘图。,实验程序8 (硝化作用),材料: 1. 100mL三角瓶,内装硝化细菌培养液30mL,硝化作用培养基。 2. 格利斯(Griess)试剂、,二苯胺试剂,土壤等。 方法: 1.取菜园土1g左右接种于盛有铵盐培养液的三角瓶中。 2.放入28300C培养714d。,实验程序9 (硝化作用),检查结果: 取培养液两滴于比色碟中,加格利斯试剂及各1滴,如出现绛红色,则证明硝化作用第一阶段正在进行,即有HNO2产生。另取培养液2滴于比色碟中,加二苯胺试剂12滴,观察有无蓝色出现,如有蓝色出现,说明硝化作用第二阶段也正在进行,即有硝酸存在。以上结果表明硝化作用的两个阶段都在进行中,若只有红色出现,说明只有硝化作用第一阶段存在,若有蓝色出现,则说明硝化作用已彻底完成。,实验程序10(反硝化作用),材料: 1.内有杜氏小管的反硝化作用培养基。 2.格利斯试剂及,水稻土、比色碟等。 方法: 取反硝化作用培养基1管,放入土壤少许,塞上棉塞,于28300C培养1周。 检查结果: 1.分子态氮:在培养过程中如有氮气产生,则培养液表面有气泡层,或小支管中有气体聚集。 2.取培养液两滴于比色碟中,加格利斯试剂及各1滴,如出现红色则证明有反硝化作用产生的亚硝酸。,思 考 题,纤维素培养基中加滤纸的作用是什么? 土壤中主要的蛋白质分解细菌有那几种? 硝化细菌培养基中为什么不加有机成分?硝化细菌从那里获得碳素营养? 进行反硝化作用的必要条件是什么?,实验二十二,结 束,

注意事项

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