药物分析:药物的含量测定
药物的含量测定,2018/12/10,2,本章要求,熟悉药物及其制剂的含量限度表示方法 掌握容量分析法的特点、原理与含量计算方法 掌握UV法测定药物含量的原理、测定方法与计算 掌握HPLC法和GC法的系统适用性试验、含量计算 熟悉常用HPLC、GC色谱柱、检测器、条件的选择 熟悉药物含量测定分析方法的验证实验 了解荧光分光光度法和原子吸收分光光度法的应用,2018/12/10,3,评价药品质量的三种分析手段: 鉴别(identification) 检查(test for purity) 含量测定(assay),准确测定有效成分的含量,优劣度,第一节 概述,含量测定(assay)理化方法测定 效价测定(assay of potency)生物学方法或 酶学方法测定,原料药:强调方法的精密度、准确度 制剂:偏重方法的选择性,2018/12/10,4,含量限度的表示方法,原料药:以百分含量表示(一般以干燥品计),地塞米松磷酸钠 按干燥品计算,含C22H28FNaO8P应为96.0%-102.0%。 硫酸庆大霉素 按无水物计算,每1mg的效价不得少于590庆大霉素单位。 阿司匹林含C9H6O4不得少于99.5% 氢氧化铝含氢氧化铝按Al2O3计算,不得少于48.0。,例子,101.0%,干燥失重测定,水分测定,2018/12/10,5,以标示量%表示 直接用%含量规定范围 以重量规定含量范围,标示量=规格量=处方量 例:维生素B1注射液含维生素B1 应为标示量的95.0%105.0%,例:复方碘溶液 含 I 应为4.50% 5.50% 含 KI 应为9.5% 10.5%,例:复方磺胺甲噁唑片 磺胺甲噁唑 0.3600.440g /片 甲氧苄氨嘧啶72.088.0mg /片,制剂:按标示量计算(一般以干燥品计),2018/12/10,6,常用含量测定方法(2005年版ChP),2018/12/10,7,特点:操作简便、快速、实验条件易实现,但是灵敏度低,专属性差 通常用于高含量和中含量的原料药物 (只要求准确度和精密度) 滴定方式:,直接滴定法 剩余滴定法 置换滴定法,7,第二节 容量分析法(滴定),2018/12/10,8,滴定类型: 关键问题:滴定终点的把握 被测物与滴定液定量关系 滴定液消耗的体积,酸碱滴定法 非水滴定法 氧化还原滴定法(碘量法) 溴量法,反应的化学计量点,指示剂显示的滴定终点,2018/12/10,9,直接滴定法 含量,含量的计算,2018/12/10,10,定量关系: aA bB 被测药物 滴定液,化学计量关系 nA/ anB/ b WA/ aMAWB/ bMB,2018/12/10,11,滴定度:1mL某物质的量浓度的滴定液相当于被测药物的重量,中国药典用mg表示。 滴定度的计算:,T滴定度(mg/ml) c滴定液浓度(mol/L) M被测物质分子量,2018/12/10,12,以I2(0.05mol/l)计,反应摩尔比 11,例子,2018/12/10,13,浓度校正因子F:实际工作中配制的滴定液浓度与药典中的规定浓度不一致,须对滴定液浓度校正 含量计算公式,含量 ×100,F,含量,2018/12/10,14,剩余滴定法 加入滴定液A 与被测药物完全反应,再以滴定液B 回滴剩余的滴定液 A 滴定液A 与滴定液B 的浓度是相当的,根据消耗回滴的滴定液体积进行计算 本法需进行空白试验校正,含量 ×100,2018/12/10,15,称取异烟肼约0.25g,置100mL容量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀。精密量取25mL,加水50 mL与盐酸20 mL,加甲基橙指示液1滴,用溴酸钾滴定液(0.01667mol/L)缓缓滴定至粉红色消失。 已知:异烟肼取样0.2545g , 消耗溴酸钾滴定液(F=1.005) 18.30mL,每1mL溴酸钾滴定液(0.01667 mol/L)相当于3.429mg异烟肼。,百分含量%=V ×T×F/ W×100%,例子,2018/12/10,16,取阿司匹林约0.3g,精密称定(0.2908g),加中性乙醇20ml溶解后,精密加入0.1mol/L NaOH40ml,置水浴中加热煮沸15分钟,放冷,用0.05mol/L H2SO4滴定至终点,同时用空白试验进行校正。每1ml 0.1mol/L NaOH相当于18.02mg阿司匹林。,已知:供试品消耗硫酸滴定液(0.05015mol/L) 23.84ml,空白试验消耗硫酸滴定液(0.05015mol/L) 39.88ml。,百分含量%=(V0-V) ×T×F/ W×100%,例子,2018/12/10,17,原料药百分含量 制剂标示量百分含量,片剂:每片含量相当于标示量的%,每g实际含量,区分,每mL实际含量,注射剂:每mL含量相当于标示量的%,片粉重,注射液体积,2018/12/10,18,取阿司匹林片10片,称总重,研细后称取适量,精密称定,加中性乙醇20ml后,迅速用0.1mol/L NaOH滴定至终点 。精密加入0.1mol/L NaOH40ml,置水浴中加热煮沸15分钟,放冷,用0.05mol/L H2SO4滴定至终点,同时用空白试验进行校正。每1ml 0.1mol/L NaOH相当于18.02mg阿司匹林。,例子,已知:10片重3.0840g,取片粉0.2908g,供试品及空白试验分别消耗硫酸滴定液(0.05015mol/L) 23.84ml、 39.88ml,规格0.3g/片,标示量 ×100,2018/12/10,19,利用物质的光谱特性进行定量 (吸光度、发光强度与浓度成正比关系),紫外可见分光光度法 荧光分光光度法 原子吸收,紫外吸收光谱图,第三节 光谱分析法,2018/12/10,20,波长范围200760nm 定量分析基本原理:朗伯-比尔定律 A=ECL 特点:灵敏度高(10-410-7 g/mL); 准确度高; 仪器便宜;易操作 专属性稍差,紫外可见分光光度法,2018/12/10,21,(一)对溶剂的要求 列出名称、A尽量小,(二)溶剂空白试验 校零,(四)测定波长确证 ±2nm,(三)供试液的浓度 A=0.30.7,吸收度的测定要求,2018/12/10,22,测定方法 对照品比较法:配制供试品溶液和对照品溶液, 相同条件下测定吸收度 C供试C对照× 要求:对照品与供试品溶液中的被测成分浓度应一致(标示量的 ±10%),含量 ×100,=,标准曲线法(多点对照) 绘制对照液浓度吸光度标准曲线(至少5点) 拟合回归方程,求出供试液浓度,标准曲线,吸收系数法(不需要对照品) 测定处吸收度,以该品种在规定条件下的吸收系数计算(E值小于100的一般不宜采用),含量 ×100,=,2018/12/10,25,例子,2018/12/10,26,制剂标示量百分含量,片剂:g/片,区分,注射剂:g/mL,V注射,2018/12/10,27,维生素B12注射液规格为0.1mgm1,含量测定如下:精密量取本品7.5m1,置25ml量瓶中,加蒸馏水稀释至刻度,混匀,置lcm石英池中,以蒸馏水为空白,在361±1nm波长处吸收度为0.593,按 为207计算维生素B12按标示量计算的百分含量为,例子,2018/12/10,28,计算分光光度法 多波长校正计算分光光度法,双波长分光光度法(复方磺胺类药物的测定) 三波长分光光度法(维生素A的测定) 导数光谱法 解联立方程法,2018/12/10,29,比色法 加入适当显色剂显色后可见波长处测定,酸性染料比色法 (硫酸阿托品片) 四氮唑比色法、异烟肼比色法 Kober反应法 (甾体激素类药物) 蛋白质的双缩脲反应 (硫酸软骨素的测定) 总黄酮、总生物碱的测定(中药制剂),2018/12/10,30,测定的是物质分子的发射光谱 定量分析:物质的低溶液浓度 荧光(发射光)强度 特点:灵敏度高(10-1010-12 g/mL); 专属性好 适于低浓度溶液分析(自熄灭) 干扰因素多(空白试验) 衍生后测定(利血平),荧光分光光度法,正比关系,2018/12/10,31,药物的浓度与相应的荧光读数之间的线性范围较窄,故(RxRxb)/(RrRrb)应在0.52,测定方法 对照品对照法:配制供试品溶液和对照品溶液, 相同条件下测定两者及其空白的荧光强度,测定前,常用基准溶液(硫酸奎宁、蓝色荧光)校正仪器灵敏度,2018/12/10,32,测定呈原子状态的金属元素和部分非金属元素 定量分析:测定该特征谱线辐射光强度减弱的程度,求出供试品中待测元素的含量 特点:灵敏度高、专属性好 测定方法:标准曲线法、标准加入法,原子吸收分光光度法,2018/12/10,33,特点:高灵敏度、高专属性、分析速度快 适用于药物制剂或复杂样品 高效液相色谱法(HPLC) 气相色谱法(GC),第四节 色谱分析法,分离分析方法,2018/12/10,34,绝大部分药物,2018/12/10,35,固定相、流动相及检测器的选择 常用系统(反相体系RP-HPLC) 固定相:非极性色谱柱 流动相:极性溶剂 检测器:紫外吸收检测器 适用于中等极性、弱极性的药物,高效液相色谱法,2018/12/10,36,应用情况,HPLC法是药物制剂、多组分样品分析的首选方法,是各国药典收载的方法中应用最广的方法 在原料药的含量测定中,HPLC法主要用于多组分抗生素或生化药品,或因所含杂质干扰测定的化学品种。如: 庆大霉素的组分测定,-内酰胺类、大环内酯类、四环素类等抗生素 甾体激素类药物,2018/12/10,37,色谱柱:十八烷基及其他化学键合硅胶结构示意图,蒲 公 英 图,37,2018/12/10,38,分析型色谱柱,最常用:C18/ODS、C8,内径:4.6mm 长度:15mm、25mm 柱填料粒度:210m pH:28,2018/12/10,39,流动相:极性溶剂,过滤脱气 多元体系,2018/12/10,40,流动相选择,调洗脱力强弱:四氢呋喃乙腈甲醇水 用过缓冲盐或酸碱流动相后,色谱柱必须用低浓度甲醇溶液冲洗,再用甲醇冲洗,例如,×,乙腈(30),乙腈-水(15:15),乙腈-四氢呋喃(15:15),2018/12/10,41,灯 室,流通池,检测器 紫外检测器(UVD 最常用)、二极管阵列(DVD)、以及荧光、电化学、示差折光、蒸发光散射(ELSD)和质谱检测器(MS),紫外检测器外观图,2018/12/10,42,系统适用性试验,理论板数(n) 分离度(R) 重复性(RSD) 拖尾因子(T),用规定的对照品对仪器进行试验和调整,2018/12/10,43,1)色谱柱的理论板数(n) n值越大柱效越高,应高于规定的最小理论板数,tR 保留时间,Wh/2 半高峰宽,2018/12/10,44,2)分离度(R) R值越大分离效果越好 在规定的条件下,注入对照液或供试液,记录色谱图,计算待测峰(定量峰)与相邻峰的分离度,应大于1.5。,2018/12/10,45,3)重复性 考察测量的精密度 在规定条件下,取一定量的对照液,连续进样35次,其峰面积测量值的相对标准偏差(RSD)应不大于2.0。,系统的精密度: 每次开机后,首先要做的日常工作,不能作为分析方法学研究中的精密度试验,2018/12/10,46,例题 取某对照品溶液10l,连续进样5次,记录各次色谱峰峰面积如下,试判断色谱系统重复性是否符合规定。,X=19898.1 S=586.789 RSD=2.9% 不符合规定,