实验11——食品中游离氨基酸的测定

实验十一：食品中游离氨基酸的测定 （茚三酮法）,1实验原理 凡含有自由氨基的化合物，如蛋白质、多肽、氨基酸（脯氨酸除外）在碱性溶液中与水合茚三酮共热时，产生紫色化合物，最大吸收波长在570nm处，在一定浓度范围内，颜色深浅与氨基酸含量成正比，可用比色法进行测定。,氨基酸与茚三酮的反应分两个步骤：,2. 实验材料、仪器与试剂 材料：酱油 仪器：可见分光光度计，分析天平，容量瓶，移液管，具塞刻度试管。 试剂：茚三酮、氯化亚锡、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、标准氨基酸（异亮氨酸）。,试剂配制：（P64） （1）2%茚三酮溶液 （2）pH8.04的磷酸缓冲液 （3）氨基酸标准溶液：200g/mL异亮氨酸标准溶液。,3. 实验步骤 （1）样品的处理：准确吸取0.5mL酱油于100mL烧杯中，加入5g活性炭和50mL蒸馏水，置于80水浴锅中，保持半小时后过滤，用蒸馏水将滤渣清洗数遍，收集滤液于100mL容量瓶中，定容至刻线，摇匀备用。,（2）标准曲线的绘制,各种试剂加到比色管后混匀，于电炉上沸水浴15min，取出冷却至室温后加水至10mL刻度线，静置15min后，在570nm处测定吸光度，以氨基酸含量(g)为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。,（3）样品测定,按上表加样后混匀，按标准曲线的步骤进行实验，在相同条件下测定样品的吸光度，并在标准曲线上查出氨基酸含量微克数。,4.结果计算,式中： C从标准曲线上查得的氨基酸含量，g K稀释倍数 V测定时取样量，mL,5. 注意事项 （1）脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应呈黄色，最大吸收波长在440nm处。 （2）有颜色的样品必需经脱色处理至无色后方可使用。,