菌种保藏

菌种保藏,一、菌种保藏目的,保证菌种生命的延续 保持遗传性状稳定/保持活力的稳定 保证纯种 方便研究、使用、交换,不死亡,不变异,不污染,二、菌种保藏原理,根据微生物生命活动必需的各种条件（营养、环境）采取相应的措施，使其新陈代谢减缓或停止，生长繁殖受到抑制而处于（半）休眠状态。 措施： 缺乏营养 干燥 低温 缺氧 避光,三、菌种保藏方法,各种微生物由于遗传特性不同，因此适合采用的保藏方法也不一样。一种良好有效的保藏方法，首先应能保持原菌种的优良性状长期不变，同时还须考虑方法的通用性、操作的简便性和设备的普及性。,三、菌种保藏方法,常见的菌种保藏方法： 斜面/半固体低温保藏法 石蜡油封藏法 砂土管包藏法 冷冻真空干燥保藏法 液氮超低温保藏法,1.斜面/半固体低温保藏法,将菌种接种在适宜的斜面培养基上，待菌种生长完全后，置于4左右的冰箱中保藏，每隔一定时间（保藏期）再转接至新的斜面培养基上，生长后继续保藏，如此连续不断。,实验室常用保藏法,此法广泛适用于各大类微生物菌种的短期保藏; 此法的主要保藏措施是低温。一般可保存16个月左右。 优点是简便易行，容易推广，存活率高；缺点是菌株仍有一定程度的代谢活动能力，保藏期短，传代次数多，菌种较容易发生变异和被污染。,2.石蜡油封藏法,此法广泛适用于各大类微生物菌种的中期保藏不适用于保藏某些能分解烃类的菌种。 主要保藏措施是低温、阻氧。一般可保存12年左右。 制作简单，不需经常移种。但必须直立放置，不便携带。,将灭菌后的液体石蜡倒入培养成熟的菌种斜面（或半固体穿刺培养物）上，石蜡油层高出斜面顶端1cm，使培养物与空气隔绝，加胶塞并用固体石蜡封口后，垂直放在室温或4冰箱内保藏。,3.砂土管包藏法,一种常用的长期保藏菌种的方法，适用于产孢子的微生物及形成芽孢的细菌。 砂土管法兼具低温、干燥、隔氧和无营养物等诸条件，故保藏期较长、效果较好，且微生物移接方便，经济简便。它的保藏期约110年。,将砂与土分别洗净、烘干、过筛，按一定比例分装于小试管中，高度约1cm，121蒸汽灭菌11.5h，间歇灭菌3次。将待保藏的菌株制成菌悬液或孢子悬液滴入砂土管中，放线菌和霉菌也可直接刮下孢子与载体混匀，而后置于干燥器中抽真空约24h，用火焰熔封管口(或用石蜡封口)，置于干燥器中，在室温或4冰箱内保藏。,4.冷冻真空干燥保藏法,此法适用于各大类微生物。 主要保藏措施是低温、干燥、缺氧，保藏期一般长达515年，存活率高， 变异率低，是目前被广泛采用的一种较理想的保藏方法。 该法操作比较烦琐，技术要求较高，且需要冻干机等设备。,简称冻干法，它通常是用保护剂制备拟保藏菌种的细胞悬液或孢子悬液于安瓿管中，再在低温下快速将含菌样冻结，并减压抽真空，使水升华将样品脱水干燥，形成完全干燥的固体菌块。并在真空条件下立即熔封，造成无氧真空环境，最后置于4低温下，使微生物处于休眠状态，而得以长期保藏。,5.液氮超低温保藏法,此法适用于各种微生物菌种的保藏。 主要保藏措施是超低温，保藏期一般可达到15年以上，是目前公认的最有效的菌种长期保藏技术之一。 优点是操作简便、高效，且可使用各种培养形式的微生物进行保藏。其缺点是需购置超低温液氮设备，且液氮消耗较多，操作费用较高。,以甘油、二甲基亚砜等作为保护剂，在196液氮中超低温保藏的方法。其主要原理是菌种细胞从常温过渡到低温，并在降到低温之前，使细胞内的自由水通过细胞膜外渗出来，以免膜内因自由水凝结成冰晶而使细胞损伤。,