检验科血库日常操作SOP_检验科SOP_10

月亮县中医院项 目文件编号：YCXZYYJYK_SOP_10页码：第- 37 -页，共37页检验科血库日常操作SOP手册版本：第3版，第1次修订生效日期：20180101血库日常操作SOP手册目录编 号名 称页 面SOP_10-1ABO血型鉴定标准操作程序3-18SOP_10-2Rh(D)血型鉴定标准操作程序19-22SOP_10-3交叉配血试验标准操作程序23-27SOP_10-4新生儿溶血病血型血清学检查标准操程序28-31SOP_10-5血库医院感染管理制度32-34SOP_10-6KJX-IA型冰冻血浆解冻箱标准操作规程35-36文件审批者：发布日期：操作者从事本项工作前，必须认真学习并掌握本手册的内容，严格按照操作规程操作！学习者:休订书册与增补程序内容与日期：学习者：休订书册与增补程序内容与日期：学习者：SOP_10-1 ABO血型鉴定标准操作程序一、目的：确保输血安全，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报告。二、适用范围：血型鉴定。三、操作人员：检验科授权工作人员四、操作步骤：1 原理：血清中常存在反应强的抗体，而红细胞上缺乏相应的抗原。许多组织细胞上有规律地存在着A、B、H抗原，以及分泌型的分泌液中存在着A、B、H物质。红细胞上的A/B /D抗原与抗B/A /D标准血清发生凝集反应。ABO血型的分类及其与抗血清的反应：红细胞与抗血清反应表型 红细胞上抗原 血清中抗体 抗A 抗BO 无 抗A、抗B A A 抗B + B B 抗A +AB A、B 无 + +2 试剂：A、B、O标准血清；A、B、O定型红细胞；生理盐水。3 方法：3.1 样本采集：真空抽血2ml至一次性抗凝管（EDTAK2干粉）中，混匀后备用。3.2 ABO血型盐水介质鉴定（试管法）：3.2.1制备患者 35%的红细胞盐水悬液。3.2.2 正定型：抗-A 抗-B 抗-A、B标准血清(ml) 100 100 100受检者RBC悬液(ml) 50 50 503.2.3 反定型：Ac Bc Oc定型红细胞(ml) 50 50 50受检者血清(ml) 100 100 1003.2.4混匀。3.2.5 以1000r/min离心1min。3.2.6 取出试管，轻摇，使沉管底的红细胞浮起，认真观察有无溶血和/或凝集。3.3 ABO血型正反定型结果判断：分型血清+受检者红细胞 受检者血清+试剂红细胞抗-A 抗-B 抗-A、B 受检者血型 Ac Bc Oc+ + A + + + B + O + + + + + AB 3.4 正反定型不一致的原因：（1）技术和管理工作的错误 血样试管及玻片混淆 书写错误 红细胞过浓或过淡 未注意样品溶血现象 漏加试剂 未按试剂说明操作 试剂血清效价低、亲和力不强或污染/过期/失效 离心速度/温度改变（2）血清异常等其它原因 抗体：新生儿、老年人、白血病、肿瘤、免疫缺陷、骨髓移植、嵌合体双生子、异型输血交换、胎盘出血等引起的抗体改变。 红细胞抗原：亚型、血型物质过剩、类B等特殊物。 蛋白质或血浆：巨球蛋白、多发性骨髓瘤、恶质病、血浆扩容剂的应用等。 其它：缗钱状排列、多凝集现象、冷凝集、额外凝集素、细菌污染等。（3）正反定型结果不一致的解决办法如发现AB0正反定型结果不一致，首先要重复作试验1次。严格执行操作规程使用质量合格的试剂以及细心观察和解释试验结果，就可解决明显的问题，对一些疑难问题必须进一步研究。初步的检查步骤包括：1.另从受检者采取1份新鲜血液标本，这样可以纠正因污染或搞错样本造成的不符合。2.将红细胞洗涤数次，配成5%盐水细胞悬液，用抗-A、抗-B、抗-A1,抗-A+B及抗-H 做试验可以得到其它有用的信息。3.对受检红细胞作直接抗球蛋白试验，如结果呈阳性，表示红细胞已被抗体致敏。4.用A1、A2B、O红细胞及自身红细胞检查受检血清。如果怀疑是抗-1，用O型(或ABO相合的)脐血红细胞检查。5.如试验未见凝集，应将细胞及血清试验至少在室温和4放置30min，用镜检核实。6.如疑为A抗原或B抗原减弱，则可将受检红细胞与抗-A或抗-B血清作吸收及放散试验以及受检者唾液作A、B、H血型物质测定。后者只对80%HAB分泌型的人有用。7.如试验结果红细胞呈缗钱状排列，加等渗盐水1滴，混和，往往可使缗钱现象消失。应注意不应先加盐水1滴于受检者血清中而后和红细胞作试验，以免血清中抗体被稀释。8.如受检者为A型血而疑为有类B抗原时，可用下列方法进行鉴别：(1) 观察细胞与抗-A及抗-B的凝集强度，与抗-A的反应要比与抗-B的反应强。这种区别用玻片法作试验更为明显。(2) 用受检者红细胞与自身血清作试验，血清中抗-B不凝集自身红细胞上的类B抗原。(3) 检查唾液中是否有A、B物质，如果是分泌型，可检出A物质而无B物质。(4) 核对患者的诊断，类B抗原的形成与结肠癌、直肠癌、革兰阴性杆菌感染有关。9.如发现多凝集现象，应考虑由遗传产生的Cad抗原活性；被细菌酶激活的T或TK受体；或产生机制不太明了的Tn受体所引起。多凝集红细胞具有以下特点：(1) 能被人和许多家兔的血清凝集，(2) 能与大多数成年人的血清凝集,不管有无相应的同种抗体。(3) 不被脐带血清凝集。(4) 通常不与自身的血清凝集。(5) 如有条件可用外源凝集素加以鉴别。3.5 A1和A2亚型鉴定（1）原理：根据ABO血型的血清学特点，A型和AB型可分为A1、A2、A1B和A2B 4种亚型。抗-A(B型)血清中含有抗-A和抗A，两种抗体，抗A可以凝集所有A型和AB型红细胞，而抗A1只能与一部分A型和AB型红细胞反应。据此凡与抗-A1反应者被指定为A1或A1B型；不与抗A1反应、而与抗-A反应者被指定为A2或A2B型。（2）试剂与材料1.抗A1分型血清；2.受检者5%红细胞盐水悬液；3.已知A1和A2型5%红细胞盐水悬液。（3）方法1.取洁净玻片两张，一张供测定受检者红细胞用另一张供对照用。后者标明A1和A2 。2.将抗A1分型血清分别滴在受检者玻片上和对照的A1和A2部分各1滴。3.分别将受检者红细胞悬液以及对照用A1和A2红细胞悬液1滴滴在上述抗A1血清上用玻棒将血清和红细胞悬液混匀。4.徐徐转动玻片，在室温下反应10min后观察结果。5 如A1对照红细胞凝集而A2对照红细胞不凝，则受检者红细胞凝集者为A1,不凝者为A2。6. 试管法：受检者RBC A1RBC A2RBCRBC(ml) 50 50 50抗-A1(ml) 100 100 100*A抗原或B抗原减弱，则受检RBC做吸收放散试验吸收试验：受检者压积RBC与抗-A或抗-B等量混合，41小时，测抗血清吸收前后效价变化：A亚型红细胞吸收强度A1>A2>A3>Ax>Am放散试验（热放散法）：取吸收后的压积RBC与1/2容积的生理盐水混合，置56水浴10分钟，离心得到的上清液即为放散液，将放散液用2%A型和B型RBC鉴定抗体。3.6 其他A亚型鉴定（1）原理：A型红细胞除A1和A2外，有时可见一些与抗A呈弱反应、甚至不反应的“弱A”变异体，一般也称为A亚型。国内报告的有A3、Ax及Am。受控于一些罕见的等位基因，其频率在几千分之一到几万分之一。A3、Ax和Am的鉴定，主要根据各自的特点，相互比较，尚无特定的抗血清加以区别。（2）方法红细胞与血清的反应 血清中 分泌型唾液 吸收能力 放散能力亚型 抗A 抗Al 抗A+B 含抗A1 含血型物质A1 4+ 3+ 4+ - A、H 强 弱A2 2+ - 3+ 一、+ A、H <A1 >A1A3 MF - MF -、+ A、H <A1 >A1Ax 一 一 十 常为+ A*、H <A2 >A1Am 一 一 一 一 A、H 弱 强注：MF=混合凝集外观；*极少量A物质。3.7 B亚型鉴定：目前已检出的B亚型较A亚型少，B亚型的命名一般和A亚型命名相互平行，比如血清学特点类似于A3的B亚型称为