临床基因扩增检验实验室的技术验收

临床基因扩增检验实验室的设置 及其技术验收,卫生部临床检验中心 李金明,临床基因扩增检验实验室的设置,设置依据：卫生部颁发的临床基因扩增检验实验室管理暂行办法（卫医发200210号）中对临床基因扩增检验实验室的分区及设备配置作了明确规定,临床标本的接收,应在四个测定区域之外的地方或区域内接收 接收的标本应收集在原始容器中，不能接收从其它检测如生化、免疫检验等分出来的标本 在核酸提取时，由基因扩增检验实验室人员将标本带入至标本制备区。,什么样的临床基因扩增检验实验室是最标准的？,试剂准备区,问题：使用所有试剂都已准备好备用的商品试剂盒时还需要试剂准备区吗？ 试剂准备区的仪器设备主要有加样器、天平和离心机等，除了要专用外，还应有定期校准。 试剂制备好以后应有质检，质检包括两个方面，一是看是否有污染，即是否有假阳性存在；二是使用弱阳性质控物检测试剂的扩增检测效果。,标本制备区,标本制备的全过程中都应戴一次性手套，并经常更换。 实验时所使用的加样器吸头必须带滤塞 。 温育既可在加热模块也可在水浴中进行。加热模块和水浴应在每次使用时，都要对所设置的温度使用已经校准的温度计进行校准。 标本制备区内的生物安全柜、超净台、加样器、离心机及其它设备都应使用10%次氯酸钠溶液消毒，然后用蒸馏水或70%乙醇洗涤去除残留的次氯酸钠，,扩增区,扩增反应体系的配制和提取核酸的加入可在标本制备区也可在本区内进行，关键是要防止产物的污染。 加样时，先加提取的核酸模板样本，每加完一个即盖好盖子，然后加阳性质控核酸模板，再就是标本制备阴性质控和仅含按样本一样稀释的主反应混合液的扩增阴性质控 扩增区的主要仪器就是核酸扩增热循环仪。,产物分析区,本区长是唯一能打开扩增后反应管的地方。由于本工作区应设置为负压状态，空气流向为由外向内，以防止扩增产物气溶胶流出，故本区可无缓冲间。 本区所使用的仪器设备可能有酶标仪、洗板机、加样器和水浴箱等，酶标仪应定期校准，洗板机每次使用完都应进行清洗，其它如加样器和水浴箱可按有关方法进行校准。,实验室的日常工作管理,工 作 项 目 核 查 点 水浴箱、微量恒温器（加热模块） 校准及记录温度 次氯酸钠溶液 新鲜配制 生物安全柜 先起动运行30分钟后再开始工作 室内质控弱阳性质控（定性） 有低、中、高浓度质控（定量） 有阴性质控：原样本 有经历提取过程的空管 有仅含扩增反应混合液管 有 实验台面 使用后用次氯酸钠溶液消毒，再用70%乙醇清洁紫外照射 加样器、离心机 使用后用次氯酸钠溶液消毒，再用70%乙醇清洁 实验室各区 遵循单一工作流向紫外照射,技术验收依据,临床检验扩增检验实验室管理暂行办法 卫医发200210号临床基因扩增检验实验室工作规范 卫检字2002第8号,技术验收内容,实验室设置和设备 设施和环境 人员 设备管理和质控物 检测方法 标本管理 记录 报告 质量控制 抱怨 等十章共四十条,实验室设置和设备,本章共七条。 实验室分区：单一流向、明确的识别标记 各区仪器设备物品配备的充分性和科学性,实验室设置和设备：？,“使用全自动扩增检测仪,区域可适当合并 ”的问题？ 如果不在扩增区内加样，或能保证所使用的扩增检验方法（如荧光定量PCR）不需在“扩增区”内加样，是否扩增区内列出的微量加样器可以不要？ “可移动紫外灯”？,设施和环境,本章包括五条； 实验室设施、工作区域、能源、照明等； 环境和实验条件控制设施：温湿度计、稳压电源等； 实验室进出的限制和控制； 实验室“内务管理”（如人员流动、清洁等）制度； 化学试剂管理、废弃血清处理、生物防护等措施,设施和环境：？,临床基因扩增检验实验室每个区到底需要多大面积？,人 员,本章包括三条。 人员数量足够；必须经过培训，取得上岗证； 有培训计划和措施； 人员资格、培训、技能、业绩（论文、科研成果）档案。,人 员：？,是不是每一个人都要有上岗证？ 业绩档案？,设备管理和质控物（1）,本章包括三条。 所有设备应得到正确维护，应有设备维护程序文件； 加样器、温度计、扩增仪和酶标仪等设备应有明显标识表明其校准状态； 实验室应保存每一台仪器设备的档案材料，对档案材料的具体内容作了详细规定。,设备和质控物（2）,每一台设备的档案内容包括： （a）设备名称；（b）制造商名称、型号、序号等；（c）接收日期和启用日期；（d）目前放置地点；（e）接收时的状态；（f）仪器使用说明书有复印件；（g）校准和/或检定的日期和结果及下次校准和/或检定的日期；（h）迄今所进行的维护和今后维护计划的细节；（i）损坏、故障、改装或修理的历史。,检 测 方 法,本章包括三条。 标准操作程序（SOP）：仪器设备操作、维护和校准程序；标本收集处理程序；扩增检测工作程序；仪器试剂的选购和质检程序；消耗性材料的购买、验收和贮存程序。 SOP应现行有效及便于使用。 对计算和数据换算应进行适当的校核。,标准操作程序（SOP）?,是否具备申请表中列出的有关程序就可以了？是否实验室应准备的程序的名称必须与申请表中列出的程序完全一致？,怎样编写SOP？,标 本 管 理,本章包括五条。 建立唯一编号识别系统，避免标本混淆； 标本接收时的状态记录； 标本的适用性和充分性； 标本贮存的标准操作程序及贮存温度控制措施; 标本接收及安全处置程序； 维护实验室诚实性的必要措施。,记 录,本章包括三条。 有记录管理制度：适合自身实际情况，符合现行规章制度； 原始记录、计算和导出数据应归档并保存； 校准和检测记录的重现性； 记录应有有关人员的签字； 所有记录和报告都要妥善保管并保密。,报 告,检测结果的报告应准确、清晰和客观； 定性测定报告“阴性”或“阳性”；定量测定则以拷贝数/ml或IU/ ml报告；避免二者之间的混淆； 每份报告应包括以下信息：标题、唯一标识、检测标本说明、标本特性和状态、标本接收日期和检测日期、检测方法、检测和校核人员签字及发出日期、参考结果或范围； 如对报告有效性有疑问，实验室应立即通知临床相关科室予以改正； 用电话、传真、电子邮件报告结果时的保密原则。,报 告？,通常报告存在的问题：唯一标识、标本特性和状态、标本接收日期、检测方法、校核人员签字,质 量 控 制,实验室应有室内质量控制标准操作程序；实验室应参加室间质量评价。,室内质量控制？,质量控制对于保证临床基因扩增检验质量来说是一项很重要的工作，为何规定这么简单？其实条目少并不等于简单。室内质控是一个内涵非常丰富的工作，质控方法并不是一个确定的模式，多种多样，并且仍在不断发展，作为一个具体的实验室来说，应根据自己实验室的具体情况，制定一个室内质控程序文件，并按其进行室内质控,抱 怨,实验室应制定抱怨及其处理的SOP； 有关资料要归档； 如抱怨涉及到工作是否符合现行程序，或是否符合管理办法和工作规范，或对实验室校准及检测质量有疑问时，则实验室应立即对这些范围的工作和有关职责进行审核。,其它有关技术验收表格,验收评审意见汇总表整改要求需要说明的其它问题,技术验收的其它内容,就有关实验室质量管理方面与具体工作有关的内容进行口试和/或笔试；已知HBV DNA和/或HCV RNA血清盘的实际检测和结果报告。,谢谢！,