交叉配血试验标准操作程序
文件编号：YCXZYYJYK_SOP_10月亮县 中医院项 目页码：第- 1 -页，共 6 页 版本：第 3 版，第 1 次修订检验科血库日常操作血库日常操作 SOP 手册手册生效日期：20180101编写者：张三三审核者：李四四批准者：李四四 时 间：20180101时 间：20180101时 间：20180101SOP_10-3SOP_10-3 交叉配血试验标准操作程序交叉配血试验标准操作程序一、目的：确保输血安全，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报告。二、适用范围：交叉配血试验。三、操作人员：检验科授权工作人员四、操作步骤：随着临床输血实践的增多,输血一方面在临床治疗中特别是在对失血性患者的救治发挥了前所未有的作用;另一方面也出现了不少不良反应和致命的事故。这对输血技术的进一步发展提出新的挑战,输血医学出现了奇迹般的创新。血型学、血液免疫学和输血相关病毒学的深入发展,使输血置于更加安全的轨道。1. 原理：交叉配血试验也称配合性试验，是保证安全输血。此试验是检查不配合性，使献血员与受血者(病人)的血液间没有可测的不相配合的抗原-抗体成分。配血试验阴性，输血后患者的血清（红细胞）不会与献血员的红细胞（血清）发生反应。即使已知患者和献血员的 ABO 及 Rh(D)血型相同，配合性试验也是必要的。因为除了ABO、Rh(D)外还有其他红细胞血型系统存在。2. 试剂和材料：（1）受血者血清与 3%红细胞悬液（2）供血者血清与 3%红细胞悬液3. 操作方法：3.1 受血者配血试验的血标本必须是输血前 3 天之内的。3.2 逐项核对输血申请单、受血者和供血者血样，复查受血者和供血者 ABO 血型(正、反定型),并常规检查患者 Rh(D)血型(急诊抢救患者紧急输血时 Rh(D)检查可除外)。3.3 凡输注全血、浓缩红细胞、红细胞悬液、洗涤红细胞、冰冻红细胞、浓缩白细胞、手工分离浓缩血小板等患者,应进行交叉配血试验。机器单采浓缩血小板应 ABO 血型同型输注。3.4 交叉配血不合时；有输血史、妊娠史或短期内需要接收多次输血者必须作抗体筛选试验。3.5.交叉配血试验包括：(1)受血者血清对供血者红细胞的主侧配血。(2)受血者的红细胞对供血者血清的次侧配血。(3)受血者的红细胞对受血者血清的自身对照。3.6 盐水介质配血法本法是目前最常用的配血方法，可以发现临床上最重要的ABO不配合性。当受血者和供血者细胞经混合并离心后，如有ABO不配合问题，就会很快显示出来，所以常称为“立即离文件编号：YCXZYYJYK_SOP_10月亮县 中医院项 目页码：第- 2 -页，共 6 页 版本：第 3 版，第 1 次修订检验科血库日常操作血库日常操作 SOP 手册手册生效日期：20180101编写者：张三三审核者：李四四批准者：李四四 时 间：20180101时 间：20180101时 间：20180101心”(immediate spin)配血试验。1.抽取受血者静脉血34ml，待凝固后分离血清，并将红细胞配成3%盐水悬液。2.将供血者血样以同样方法分离血清，并配制3%红细胞悬液。3.取洁净小试管(10mm×60mm)2支，1支标明受血者血清(PS)+供血者细胞(DC)；另1支标明供血清(DS)+受血者红细胞(PC)。4.按标记主侧管放受血者血清1滴。加供血者红细胞悬液1滴。次侧管放供血者血清1滴，加受血者红细胞悬液1滴。混匀，以1 000rmin离心1min，轻轻侧动试管，观察结果。冬季室温较低，应将试管保温，以防冷凝集索引起的凝集反应。5.结果判断：ABO同型配血，主侧和次侧均无溶血及凝集表示无输血禁忌，可以输血。如急需输血但一时无同型血液，作异型配血时(批O型血输给A、B或AB型，或A、B型血输给AB型时)主侧无溶血及凝集，但次测必然有凝集或溶血。故实际上不必再做次侧交叉配血试验，如发现次侧无凝集，应进一步分析原因。如因故急需进行异型输血，应检查供血者血清中抗A(B)效价，如效价<200，无溶血者，可给予少量输血。6.附注：（1）盐水介质配血法也可用玻片法进行操作。（2）如盐水介质配血结果阴性，可将原标本接着做酶法或抗球蛋白法配血。（3）只能检出ABO、MN、Lewis等IgM抗体3.7 酶技术配血法国内以木瓜酶或菠萝酶为常用。本法敏感性高，对Rh血型抗体的检出尤为显著，操作简便，试剂也容易购到，故一般实验室均应建立。1.洁净试管2支，标明主侧和次侧。主侧加受血者血清和供血者3%红细胞盐水悬液各1滴，次侧加供血者血清和受血者3%红细胞悬液各1滴，二管各加1%木瓜酶(或菠萝酶)液1滴。2.混和，置37水浴1h，轻轻侧动试管，观察结果，两管均无凝集。表示无输血禁忌。3.阳性对照：已知IgG抗 D 血清1滴加2 D 阳性红细胞悬液1滴，再加酶液1滴。阴性对照：AB型血清l滴加2% D 阳性红细胞悬液1滴，再加酶液1滴，同时进行试验。4.附注：酶活力简易测定法：取0.067molL，pH6.2磷酸盐缓冲液与牛奶（去奶油）等量混和，放在37温箱加温。吸出上述混和液1滴于玻片上，加1%酶液l滴，混和，观察结果。在1020s有絮状物出现表示酶有活力，可供应用。若在20s后出观絮状物，表示该批酶活力差。若作试验时。则延长观察结果时间，若酶活力减低50%，是此酶液不能应用。3.8 抗球蛋白配血法检查不完全抗体最可靠的方法。但试剂供应较少，价格较贵，操怍较繁，适用于特殊需文件编号：YCXZYYJYK_SOP_10月亮县 中医院项 目页码：第- 3 -页，共 6 页 版本：第 3 版，第 1 次修订检验科血库日常操作血库日常操作 SOP 手册手册生效日期：20180101编写者：张三三审核者：李四四批准者：李四四 时 间：20180101时 间：20180101时 间：20180101要。1.取试管2支，分别注明主侧和次侧，主侧管加受血者血清2滴和供血者3%细胞盐水悬液l滴；次侧管加供血者血清2滴和受血者3%红细胞悬液l滴。2.混和。置37水浴致敏1min，取出后用盐水离心洗涤红细胞3次，倾去上清液。3.加最适稀释度抗菌素球蛋白血清1滴，混匀，1000r/min离心1min，观察结果。4.阳性对照：3%不完全抗D致敏的Rh阳性红细胞悬液1滴，加抗球蛋白血清1滴；阴性对照：3% O型红细胞悬液1滴，加抗球蛋白血清1滴；盐水对照：1管供血者3%红细胞悬液1滴加等渗盐水1滴，另1管受血者3%红细胞悬液1滴加等渗盐水1滴。5.结果判断：阳性对照管凝集，阴性对照管、盐水对照管、主/次侧配血管都不凝集，表示无输血禁忌。3.9 聚凝胺配血（试管法）1.制备受血者与供血者的红细胞盐水悬液并分别在主、次管内加血清、RBC。2.各管加低离子介质 3 滴，混匀，静置 30s3.加促进剂 1 滴混匀，3000r /min 离心 15s 。4.取出试管，扣摇，应有明显凝集，加假凝集清除液 1 滴，轻摇，观察凝集的消失情况。5.结果判断：加假凝集清除液后，凝集 1min 内消失呈均匀混悬液者为阴性，不消除为阳性。最适宜温度为 20 37，注意冷凝集的干扰。3.10 冷抗体的吸收方法冷自身抗体是较常见的一种自身抗体，通常是 IgM 型抗体，在盐水介质中和自身红细胞反应。理论上指 37与自身红细胞不反应，只有在低于 37环境下才和自身红细胞反应的抗体均称为“冷自身抗体”。实际上冷自身抗体大多数只能在很低的温度下(4)才与自身细胞反应。因此，尽管大多数人的血清中都存在冷自身抗体，但在体内温度下不会和自身细胞发生反应，也不会造成任何不良影响。1.将温育 10min 以上的抗凝血，用 37生理盐水洗涤 3 次，分 3 个试管中，每管约 1ml；2.将 2ml 待检血清加入其中 1 管混匀，置 4冰箱，孵育 30-60min，其间摇动数次,使其充分吸收，若吸收不完全，可在第 2、第 3 管重复吸收试验，立即分离血清待用。3.11 交叉试验不合的原因：1.交叉配血试验中,离心力不当,造成了假阴性和假阳性。2.红细胞不正确的洗涤和悬浮,使抗球蛋白实验出现假阴性。3.未检明的同种抗体的存在（抗体筛选试验阴性和交叉配血结果阳性） 。4.有自身抗体（冷凝集、抗球蛋白试验阳性） 。文件编号：YCXZYYJYK_SOP_10月亮县 中医院项 目页码：第- 4 -页，共 6 页 版本：第 3 版，第 1 次修订检验科血库日常操作血库日常操作 SOP 手册手册生效日期：20180101编写者：张三三审核者：李四四批准者：李四四 时 间：20180101时 间：20180101时 间：201801015.血清中如含有溶血性抗体，则相应红细胞被溶解而不是凝集,交叉配血结果应作阳性。6.血清中存在补体而溶血，血清应灭活后再作试验。7.血清中存在特异性抗体,应选择不含相应抗原的供者血液进行交叉或者取多人份的供者血液筛选。8.钱串状的形成，血清在室温和 37中,使红细胞出现了假凝集,造成配血错误。常见于多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、何杰金病,以及其他表现为血沉加速的一些病例中。4.输血：4.1 输血前的实验室检查：输血前的检查包括:丙氨酸氨基移换酶；乙型肝炎两对半；丙型肝炎抗体； 爱滋病抗体1/2；梅毒抗体。检测方法见生化分析标标准操作程序 酶标分析标准操作程序 。4.2 血液入库、核对、贮存：4.2.1 全血、血液成份入库前要认真核对运输条件、物理外观、血袋封闭及包装；标签填写（供血机构、许可证号、姓名或条形码编号、血型、品种、容量、采血日期、血液成分的制备日期及时间，有效期及时间、血袋的编号/条形码，储存条件）后验收入库。4.2.2 按不同血型、成分分别贮存于血库专用冰箱的不同层次或不同的专用（低温）冰箱内，并有明显标识。4.3 发血4.3.1 严格遵守国家卫生部的临床输血技术规范要求，在输血前临床应填写输血治疗同意书、输血申请单、输血记录单、不良反应回报单。4.3.2 临床输血申请单由经治医生逐项填写，由主治医师核准签字，连同受血者的血样送血库。4.3.3 输血工作严谨，认真做好“三查七对”，复查受/供血者血型，无误后行交叉配/发血及登记。4.4 RH 阴性病人的输血 因为 D 抗原的抗原性极强，给 Rh 阴性病人输入阳性血液，将导致其免疫产生抗体，而使得在以后的输血中该病人不能再输入 Rh 阳性血液。对于育龄女性产生的抗体将导致其后代的新生儿溶血病。已经产生抗体的受血者，输入阳性血将导致其产生输血反应，甚至危及生命 4.4.1 输血前的检查（1）错误的 Rh 血型鉴定很难在交叉配血中发现，因此在输血前正确的定型是非常重要的 （2）在为血清中含有相当微弱的 RH 抗体的受血者选择血液时,用试剂抗血清筛出抗原阴性的红细胞要比仅靠交叉配合试验检出者更可靠，同时检查受血者的红细胞抗原（Rh 表型），可以证实其抗体特异性，并提示可能发生的其它 RH 抗体而得以避免。 文件编号：YCXZYYJYK_SOP_10月亮县 中医院项 目页码：第- 5 -页，共 6 页 版本：第 3 版，第 1 次修订检验科血库日常操作血库日常操作 SOP 手册手册生效日期：20180101编写者：张三三审核者：李四四批准者：李四四 时 间：20180101时 间：20180101时 间：201801014.4.2 Rh 异型输血：尽量寻找合适的血源，对于在育龄的女性和已经产生抗体的病人尤其重要 （1）给 Rh 阴性病人输阳性血液了解该病人的输血史、妊娠史用灵敏的方法做抗体筛查实验（聚凝胺、PEG 抗球蛋白试验）若为阴性，尽量为其选择 D 抗原较弱的血液。输注阳性血后观察一至两周，无输血反应则在一段时间内（一般为一个月内）可以安全输注阳性血液。若为阴性且已知经过免疫的病人，可能在数天后发生迟发型血管外溶血，但一般不发生生命危险，在这段时间内可以做 Rh 阴性血的准备工作。若抗体筛选为抗 D 抗体阳性，则严禁输注。
