坐骨神经腓肠肌标本制备

坐骨神经-腓肠肌标本制备Preparation of Sciatic Nerve-Gastrocnemius Muscle Preparation of Sciatic Nerve-Gastrocnemius Muscle SpecimenSpecimen谈智谈智 tanzhimail.sysu.edu.cntanzhimail.sysu.edu.cn Department of PhysiologyDepartment of Physiology生理学实验课的目的生理学实验课的目的 Purpose of this CoursePurpose of this Coursen n验证和巩固生理学的验证和巩固生理学的基本理论基本理论n n了解获得生理学知识的了解获得生理学知识的科学方法科学方法n n掌握生理学实验的掌握生理学实验的基本操作技术基本操作技术n n培养严肃的培养严肃的态度态度、严格的、严格的要求要求、严密的、严密的方法方法n n培养对事物观察、分析、综合的能力，独立思考培养对事物观察、分析、综合的能力，独立思考 解决问题的能力以及创新的精神和创新的能力解决问题的能力以及创新的精神和创新的能力实验课的要求实验课的要求 Requirements of this CourseRequirements of this Coursen n实验前实验前: : 预习预习教材并积极思考教材并积极思考n n实验中：实验中：仔细仔细观察并动手观察并动手操作；操作；爱护爱护仪器器械和实验动仪器器械和实验动 物物 n n实验后：保持实验后：保持卫生卫生清洁，写好清洁，写好实验报告实验报告并可进入并可进入论坛讨论坛讨 论论实验报告的一般格式实验报告的一般格式 The Format of Experimental ReportsThe Format of Experimental Reportsn n姓名、班级、组别姓名、班级、组别 (Name, class & group)(Name, class & group)n n实验题目、日期实验题目、日期 (Title & Date)(Title & Date)n n实验目的、原理实验目的、原理 (Purpose & Principle) (Purpose & Principle) n n实验对象实验对象 (Subject)(Subject)n n实验器材和实验方法实验器材和实验方法 (Materials & Methods)(Materials & Methods)n n实验结果实验结果 (Results)(Results)n n讨论讨论 (Discussion)(Discussion)n n结论结论 (Conclusion)(Conclusion)n n撰写实验报告或在以后的科研论文中如何撰写实验报告或在以后的科研论文中如何 区分结果、讨论、结论：区分结果、讨论、结论：1 1、结果、结果: :结果是实验产生的纯客观的描述，结果是实验产生的纯客观的描述， 多以图表、数据形式进行表述。多以图表、数据形式进行表述。2 2、讨论、讨论: :对实验结果进行理论上的分析和对实验结果进行理论上的分析和 论证论证对本实验研究方法的科学性和局限对本实验研究方法的科学性和局限 性的探讨性的探讨提出可供深入研究的问题，或提出可供深入研究的问题，或 本实验尚待进一步解决的问题本实验尚待进一步解决的问题对未来研对未来研 究及如何推广研究提出建议。究及如何推广研究提出建议。3 3、结论：结论呈现的是研究中的客观事实、结论：结论呈现的是研究中的客观事实 ，应是基本肯定的，也可以是否定的，并，应是基本肯定的，也可以是否定的，并 可以在相同背景下重复出现；它是对研究可以在相同背景下重复出现；它是对研究 工作的一个小结，交代所研究的问题，所工作的一个小结，交代所研究的问题，所 获得的结论以及解决问题所达到的程度，获得的结论以及解决问题所达到的程度， 还可以对今后的研究指出方向，提出新的还可以对今后的研究指出方向，提出新的 课题。课题。坐骨神经-腓肠肌标本制备 Preparation of Sciatic Nerve - Preparation of Sciatic Nerve - Gastrocnemius Muscle Gastrocnemius Muscle SpecimenSpecimen1 1、熟悉并掌握蟾蜍或蛙坐骨神经腓肠肌标本、熟悉并掌握蟾蜍或蛙坐骨神经腓肠肌标本 的制备方法的制备方法 2 2、熟悉并掌握生理学实验常用器械的使用和、熟悉并掌握生理学实验常用器械的使用和 基本操作技术基本操作技术实验目的实验目的 (Purpose)(Purpose)实验原理实验原理 (Principle)(Principle)为什么要做这个实验？为什么要做这个实验？n n在生理学实验中常利用蛙的坐骨神经在生理学实验中常利用蛙的坐骨神经- -腓肠腓肠 肌标本研究神经、肌肉的兴奋、兴奋性；肌标本研究神经、肌肉的兴奋、兴奋性； 刺激与反应的规律和肌肉收缩的特征等，刺激与反应的规律和肌肉收缩的特征等， 制备坐骨神经腓肠肌标本是生理学实验的制备坐骨神经腓肠肌标本是生理学实验的 一项基本操作技术。一项基本操作技术。为什么实验动物选蟾蜍？为什么实验动物选蟾蜍？n n两栖动物一些基本生命活动和生理机能与两栖动物一些基本生命活动和生理机能与 温血动物近似，而其离体组织、器官保持温血动物近似，而其离体组织、器官保持 活性所需的条件比较简单，易于控制和掌活性所需的条件比较简单，易于控制和掌 握，所以生理实验中常选择蟾蜍或青蛙的握，所以生理实验中常选择蟾蜍或青蛙的 离体组织或器官作为实验标本。离体组织或器官作为实验标本。怎样保持离体器官的活性？怎样保持离体器官的活性？任氏液是任氏液是种比较接近两栖动物内环境的液种比较接近两栖动物内环境的液 体，可以用来延长青蛙心脏在体外跳动时体，可以用来延长青蛙心脏在体外跳动时 间、保持两栖类其他离体组织器官生理活间、保持两栖类其他离体组织器官生理活 性等性等 实验对象实验对象 (Subject):(Subject):蟾蜍或蛙蟾蜍或蛙Toad or Frog Toad or Frog 实验药品实验药品(Drug):(Drug): 任氏液任氏液(Ringer's solution)(Ringer's solution)原原 液液 成成 分分 : : 20%NaCl(ml) 32.520%NaCl(ml) 32.510%KCl(ml) 1.4 10%KCl(ml) 1.410%CaCl2(ml) 1.2 10%CaCl2(ml) 1.2 5%NaHCO3(ml) 4.05%NaHCO3(ml) 4.01% NaH2PO4(ml) 1.0 1% NaH2PO4(ml) 1.0C6H12O6(g) 2.0 (C6H12O6(g) 2.0 (可不加可不加, ,为什么？为什么？) ) H2O H2O加至加至(ml) 1000(ml) 1000实验器械实验器械 (Tools)(Tools)n n毁髓针：用于破坏蛙的脑和脊髓，怎么破坏？毁髓针：用于破坏蛙的脑和脊髓，怎么破坏？- -视频视频n n剪刀：普通剪刀用于剪皮肤、肌肉和骨等粗硬组织剪刀：普通剪刀用于剪皮肤、肌肉和骨等粗硬组织 ；细剪刀或眼科剪刀用于剪神经血管和心包膜等细；细剪刀或眼科剪刀用于剪神经血管和心包膜等细 软组织；软组织；禁用眼科剪刀剪皮肤、肌肉或其他粗硬物禁用眼科剪刀剪皮肤、肌肉或其他粗硬物n n镊子：圆头镊子对组织损伤较小，用于夹捏组织和镊子：圆头镊子对组织损伤较小，用于夹捏组织和 牵提切口；有齿镊子用于夹捏骨头和剥脱蛙皮；眼牵提切口；有齿镊子用于夹捏骨头和剥脱蛙皮；眼 科镊子有直弯两种，用于分离神经、血管和夹捏细科镊子有直弯两种，用于分离神经、血管和夹捏细 软组织，软组织，切不可用镊子直接夹捏或牵提神经血管，切不可用镊子直接夹捏或牵提神经血管， 为什么？为什么？n n玻璃分针：用于分离血管神经等组织，不玻璃分针：用于分离血管神经等组织，不可用力过猛以防折断可用力过猛以防折断n n蛙板：用于固定蛙类，以便进行解剖和实蛙板：用于固定蛙类，以便进行解剖和实验验n n锌铜弓：用于对标本施加刺激，以检查其锌铜弓：用于对标本施加刺激，以检查其兴奋性，锌铜弓的原理？兴奋性，锌铜弓的原理？实验器械实验器械 (Tools)(Tools)n n锌铜弓用金属锌和铜铆接而成，锌铜弓在极性锌铜弓用金属锌和铜铆接而成，锌铜弓在极性 溶液中形成回路时，锌与铜两极产生约溶液中形成回路时，锌与铜两极产生约 0.50.7V0.50.7V的直流电压，因此可用来刺激神经和的直流电压，因此可用来刺激神经和 肌肉，使神经或肌肉兴奋。这种刺激仅在锌铜肌肉，使神经或肌肉兴奋。这种刺激仅在锌铜 弓与神经或肌肉接触瞬间产生，弓与神经或肌肉接触瞬间产生，持续接触不能持续接触不能 使神经或肌肉兴奋使神经或肌肉兴奋, ,为什么？为什么？锌铜弓原理简介：锌铜弓原理简介：n n金属与溶液之间便产生了电金属与溶液之间便产生了电 位差位差电极电位。如果将电极电位。如果将 ZnZn和和CuCu一端接触，则在接触一端接触，则在接触 部位电流由部位电流由CuCu向向ZnZn方向流动方向流动 ；而在溶液中则相反，由；而在溶液中则相反，由ZnZn 向向CuCu流动。当锌铜弓接触组流动。当锌铜弓接触组 织时（注意：表面必须湿润织时（注意：表面必须湿润 ），电流便沿），电流便沿ZnZn可兴奋组可兴奋组 织织CuCu方向流动，而产生流方向流动，而产生流 动作用。这样，锌铜弓好像动作用。这样，锌铜弓好像 一个电池，一个电池，ZnZn如同其阳极，如同其阳极， CuCu好像阴极而发挥作用。神好像阴极而发挥作用。神 经或肌肉的电刺激阈值非常经或肌肉的电刺激阈值非常 小，所以仅用锌铜弓接触，小，所以仅用锌铜弓接触， 即可构成刺激，以便检验组即可构成刺激，以便检验组 织的机能活性。织的机能活性。Cu和Zn外部电子分布可以由上页第 一段解释，内部怎么理解？实验方法实验方法 (Methods)(Methods)视频视频n n捣毁蟾蜍脑、脊髓捣毁蟾蜍脑、脊髓小心毒液，双毁髓时应注意使蟾蜍头部 前俯，防止耳后腺分泌物射入实验者眼 内，如被射入，应立即用生理盐水冲洗 眼睛。n n剪除蟾蜍躯干上部、内脏剪除蟾蜍躯干上部、内脏n n剥皮剥皮剥皮后蛙的后肢：剥皮后蛙的后肢：分离两腿，制作坐骨神经腓肠肌标本分离两腿，制作坐骨神经腓肠肌标本 1 1、 分离两腿分离两腿 (separate the two legs)(separate the two legs)2 2、 游离结扎腓肠肌游离结扎腓肠肌 (dissociate & ligature(dissociate & ligature the the Gastrocnemius)Gastrocnemius)3 3、 游离坐骨神经游离坐骨神经 (dissociate the sciatic nerve)(dissociate the sciatic nerve)4 4、 游离、剪断股骨游离、剪断股骨 (free & cut the thigh bone)(free & cut the thigh bone)5 5、 剪断膝关节剪断膝关节 (cut the knee joint)(cut the knee joint)n n完成制作完成制作, , 用锌铜弓检查标本兴奋性用锌铜弓检查标本兴奋性 Check the excitability of the specimenCheck the excitability of the specimen注意事项（