动物病理组织制片过程的体会

动物学杂志Ch ines eJour nal富,核呈圆形或卵圆形,深 染,染 色质疏松,分布不均,可见l一2个核仁。癌巢中央 的癌细胞角化,有的形成明显 的角化株。右 腋窝淋巴结内发现大片的鳞状 癌细胞 组织(见图3),系转移 所致。各内脏器官的 组织切 片未见异常。2 .3诊 断皮 肤鳞状细胞 癌及右腋窝淋巴结转移。3讨论据已有的报道,树她 的预期 寿 命是8一1 4岁,而在家养条件 下,其 自发性 肿瘤的发病年龄多在,一1 1岁之间,且 以7一9岁者居多。可见 树池 的自发性肿瘤多发生于 中老 龄时期,而本病例的发病年龄仅2岁1 0个 月,说明年轻树地 亦有自发性 肿瘤发 生。Hofma n n切观察到树她 的 自发 性肿瘤只发生于进口的动物中,而他 们 自繁自养的千 余只of20。一09,19 9呼 2,(6)树鲍 中则无一发 生。进口树鲍(即 野生的)自发性肿瘤发 生的原因是 否与其年龄或生活 环境等因素有关,尚无充分的依据予 以回答。本病例系自繁自养的 年轻树 勉,完全脱离了野 生环境,表明野 生和家养树跑中均有自发 性肿瘤发 生,诱 发原因尚待 进一步探讨。参考文献E lliot0.5.,M.W.El liot,时间过长,影响染片质量。如制片后 组织着色 淡,细胞模糊不清。由于组织块 没有及时 固定组 织发 生 自溶,或组 织较 大而容器太小、固定液不足和 浓度不够所致(固定液的量应为 组织 块的,一1 0倍)。3水洗流水冲洗1 2一2 4小时。把 固定液清洗出来,防止固定剂 沉淀于组织 中影响切片。如 胃肠粘膜脱落,骨髓流失等组 织缺少某一部分结构,由于过度流水冲洗而引起的。4脱水组织 经固定水洗后,内含大量水分,这 些水分必须 除尽才利于透 明、浸蜡。最常用的脱水剂是酒精。采用逐级提高酒精浓度,以防组织 过度收 缩、变脆或 脱水不 完全而影 响制片效果。脱水一般在室 温下进行,由5 0多、7 0 外、80外、90务和 9 5外酒精各2小时;10 0外酒精分为I、1 1两种各放 人1.5小 时。我室常把组 织块在 9 5务酒精中过夜,这样处理 组织都能将水分脱净,且不会有过硬过 脆现象;但组 织 块在1 0 0多酒精中容易变硬,时间不宜过长。如切片后 的 蜡块 中央呈 灰白粗糙而 不 透亮,放置一天 后蜡 块中央出现一陷 窝,这 表明组织脱水不 彻底,以后水分蒸 发,蜡 块 中央收缩形 成 陷窝,严重时 难 以切出完 整切 片。要注 意各级酒精浓度应尽量精确,定时更换新 的脱 水剂。5透明采用二 甲苯在室 温 下进 行透 明组 织块。一般过 程是10 0多酒精十二 甲苯(l:1)2 0 分钟、二甲苯分为I、H两种各放人巧分钟。组 织在二 甲苯中贮留时间必 须严格掌握,时间稍长,则 使 组织脆 硬易碎;时 间过 短,石 蜡又 不易渗透进去。6浸蜡此步 骤是在温箱 内进行的,温度应 调至 5 8 左右,使它恰好熔化石 蜡。浸蜡过程一般是 二 甲苯十石蜡(1:l)30分钟、石蜡 分为I、1 1两种各放入2一3小时。一定要保 持温 箱的温度恒定严格 掌握浸蜡时 间。在组 织过度固缩,镜 下见细胞和纤 维都 比正常小,排列致 密,核深染,染 色质不 清楚成团块状。由于组 织在浸蜡 时温箱内温度过高,时间过长所致,要检查温箱的恒温性 能,使维持在6 0以下。7包埋包埋方 法是 把热的 包埋框放平,将温箱中熔化好 的石 蜡倒进 包埋框内,迅 速用热 镊子轻 轻将组 织放人包 埋框 内,将要切 的面朝 下摆正位置,等到石 蜡表 面凝 固之后,将包埋框轻轻放人冷 水内,经3 0分钟后取出,拆开 包埋框,取出蜡块,把组 织蜡 块的上 下两端应修平,但需留有余蜡,否 则石蜡 切片 弯曲而 不挺直,或 无法连成 带状。蜡 块左右 两端应不 留余蜡,否则 切片容易皱折,不易摊 平。如组 织边 缘部 分凹陷 形似溃疡灶,但周 围无炎症和肉芽组织。由于在包埋 时先 把镊子放在 酒精灯 火焰上加温 过度,然后 去镊取组织所致。注 意不要 把镊子 加温过 热。8切片切片过程 是将烧热 的解剖刀平烙 蜡块 底面,迅速 粘贴在 木块上,固 定在切片机上。装上锋利的切片刀(刀的斜度为1 5度)调整蜡块切面使之 与 刀口平行。把 厚度调节器 调在4微米左右。左手平持毛 笔,右手旋 动切片机把,切片带 出来之后,用毛 笔轻 轻托起,切片切取一定长度之 后,用毛笔 或镊 子轻 轻取出至纸盘上 准备贴片。如镜检细胞互相重叠组织 密集,核 深染,由于切片过厚。切片有直 线缺痕,宽狭不 一,主要是切片刀有大小不 等 的缺口应磨刀。切片有皱褶,由于切片刀不 够锋 利或刀的 斜度太 大所致,应磨刀并调整刀的角度。切片厚薄不均,染色后 深浅不一,由于刀夹或 蜡块松驰,应拧紧切片机 的每一个螺 旋。9贴片将一个盛水的恒温水 箱,加温 到4 0一4 5 ,将切片光 泽面 向下铺于温水上。等切片展 开后用清洁的载玻片从 水 中捞出,拨正位置,把贴 好切片的载玻片放在染色架 上 竖 立排水,然后 立即烤片。如切片有泡状褶迹、着色不 良。由于 贴片时水 中有 小气泡上 升附于切片下面,或放 片时动物学杂志c h ine s oJournal切片人水角度不 当,烘干时气泡逸出,形成一个泡状褶迹。应在切片人水前 用玻璃棒在水底搅动,赶走水底的气泡,注意贴片人水角度,尽量不用粘贴剂,展片所用温水应 先煮沸冷却至所需温度为好,避免撞动产生气泡。10烤片把贴有切片的载玻片直 立放在 染片架上 立即送人 4 5 左右的温箱 中烘 烤2一4小时,直到 蜡片成半透明状。U染色H、E染 色的程 序 是将切片浸人二甲苯分为I、n两种各巧分钟(应完全透 明)、二甲苯+100多酒精(1:1)、10 0关酒精分为I、11两种、9,务、90务、5 0多、70多和50外酒精、蒸馏水各2分钟,苏木精染液1 0分钟,自来水、1务氨水、自来水、5 0关、7 0务、8 0肠、90多和9 5肠酒精各2分钟,1多伊红 酒精染 液,分钟,9 5沁酒精、100沁酒精分为I、1 1两种、10 0务酒精十二 甲 苯(1:l )、二 甲苯分为I、H两种各2分钟。如切片染 色不 均匀,部分组 织染色 良好,部分呈地图形不 着染。由于脱蜡 不彻 底,常见于冬季室温低,脱蜡用的二甲苯使用时 间太久所致。在冬季应 把二甲苯适 当加温至 3 0一3 5 脱蜡,或 更换新 的二 甲苯。切片有污染,在一 处或多处 出现棕褐色或污蓝色不规则的 污斑。由于染液有沉淀所致,应 经常把染 液 过滤。切片呈现片块状裂隙如 龟裂状,由于在染色时使 切片干 燥所致,所以在染 色的每个步骤都不要使切片干一固。 切片模糊、呈云雾状,由于10 0 肠 酒精已含有水分,应定时 更换新 的脱水剂。ofzo ology一 , 呜 29(6)1 2封片由二甲苯中取出切片,注意 正反 面,用纱 布迅速擦净组织 周 围多余 的二 甲苯,组织上滴一滴树胶,盖上 盖片即可。如盖 片下有气泡是由于在封片前用玻璃棒搅动 树胶产生气泡,或放盖片角度不 当所致。应经常检查树胶 的浓度,事先 稀释才能使用,放盖片时先将盖片的一边放在切片上,然后慢 慢地降 下盖片,或置 4 0 温箱 中烘烤,促 使气 泡排出。13镜检完成染色封片后,放 在显微镜下检查,细胞 核呈蓝紫 色,细胞质、胶 原纤维、肌纤维呈粉红 色,效果良好。病理 组 织制片是 难度较大 的技术,失当的现象是多种多样的。以上仅是 我室 多年来 摸索的一点 经验 和见 到的一些问题。每 制 出一张理想 的 病理切片标本,需要在操作 过程中认真注意 每一环节,就 能防止 和避 免在制 片过程 中由于 处理失当而 出现 的缺 点,为教学、科研 和病理诊断作出高质量 的切片标本。参考文献麦兆煌编著。病理组织标本制作技术。人民卫生出版社 出版,1 乡63,C.F.A,卡林著,孔庆雷译,组织病理学与组织化学技 术 手册。科学出版社出版,19 82。杜卓民 主编。实用组织学技术。人民卫生 出版社出版,198 2,曾小鲁主编,实用生物学制片技术。高等教育出版 社出 版,19 890虎斑游蛇毒器的解剖及离体达氏腺的产毒量牛青山(中国刑警学院三 系法医沈阳1100 3,)刘明玉季达明(辽宁大学生物系)摘要本文通过对辽宁产虎斑游蛇毒器的解剖,描述了其毒器的形态、大小和 着生位置,并测 定了离体达 氏腺(Duv erno了·5g land)的产毒量。关链词游蛇科,虎斑游蛇,毒器,产毒量