粪便基因组DNA提取试剂盒说明书加强版
磁珠法粪便基因组DNA提取试剂盒（加强版）MagBeads Faeces DNA Extraction Kit (Advanced Version)【目 录 号】FDE-5005、FDE-5030【运输条件】225；【保存条件】磁珠悬浮液、裂解液2 28，蛋白酶K-20，其它组分室温；【试剂盒组成】Kit Component试剂盒组成FDE-5005（50T）FDE-5030（300T） FDE Magnetic Beads磁珠悬浮液5mL25mL FDE Buffer 1裂解液150mL300mLFDE Buffer 2裂解液212.5mL75mL Decolor Buffer脱色缓冲液1mL3mL Wash Buffer清洗液30mL180mL Elute Buffer洗脱液5mL30mL【注意事项】1. 磁珠悬浮液严禁反复冻融和离心，以免磁珠受到损害，使用前务必充分混匀；2. 使用前请检查裂解液1/2/3中是否出现结晶，如有结晶请将置于于37环境中重新溶解；3. 本操作指南经本公司反复验证，使用前请仔细阅读，并且按照操作指南建议操作。【产品简介】本试剂盒适用于从各种固态或液态粪便样本中分离纯化基因组DNA，尤其针对使用常规方法提取粪便样本所得DNA产物颜色较重的样本。试剂盒采用具有独特分离作用的纳米磁珠和缓冲液体系，特殊技术包埋的磁珠在特定条件下对核酸具有极强的富集能力，当条件改变时，磁珠会释放所吸附的核酸，从而达到快速分离纯化核酸的目的。方法简便、快捷、质量稳定。提取所得基因组DNA产物，纯度优良，可应用于酶切、PCR、荧光定量PCR、文库构建、Sputhem杂交、芯片检测和高通量测序等各种下游分子生物学实验。本试剂盒可手动法在EP管中进行操作，亦可配合核酸提取仪实现自动化操作。【试剂盒说明】样本类型样本量DNA提取范围固态粪便200mg540g液态粪便200L120g【自备试剂】“酚/氯仿/异戊醇”试剂、异丙醇、80%乙醇、RNase A溶液(100mg/mL，分散液10mM Tris-HCl, 1mM EDTA, pH值8.0)。【自备仪器&耗材】仪器自动版：涡旋混合仪、高速离心机、金属浴或水浴锅、96孔方孔圆底板、英芮诚ETP-300核酸提取仪、磁棒套。手动版：涡旋混合仪、高速离心机、EP管、EP管用磁力架。【仪器自动版操作步骤】以英芮诚ETP-300型全自动核酸提取仪为例，可同步完成32个样本的提取工作。1 96孔板加液样本位1、72、83、94、105、116、12试剂磁珠悬浮液 75L异丙醇400L清洗液600L80%乙醇600L80%乙醇600L洗脱液100L参照下表用量向96孔板中分别加入相应试剂。注：1）每次吸取磁珠悬浮液前尽量摇晃均匀；2）为提高效率建议使用排枪进行加液操作。2 样本裂解1) 取约200mg固态粪便样本或约200L液态粪便样本，置于EP管中，加入1mL裂解液1，涡旋振荡1min（须将管底粪便充分振荡起来），70裂解5min，期间颠倒混匀一次；注：1）若欲提取较难裂解菌体的DNA（如革兰氏阳性菌），则于95孵育5min；2）如需去除RNA，请额外加入5L RNase A溶液。2) 加入500L酚/氯仿/异戊醇，震荡混匀。12000rpm离心10min， 转移400uL上清至新离心管。3) 加入10L脱色缓冲液，颠倒混匀。4) 加入250L裂解液2，涡旋混匀，12,000rpm离心5min后待用。3 上机提取从步骤2裂解完毕样本中吸取450L上清液至加液完毕的96孔板第2/8列孔位中，将96孔板置于ETP-300型核酸提取仪中，并插入磁棒套，运行仪器操作软件，调用“粪便核酸提取”程序并执行。“粪便核酸提取”程序参数设置如下，如仪器程序参数与说明书不一致，请以说明书为准：步骤编号孔位运行类型振荡时间(秒)分离时间(秒)挥发时间(秒)振荡幅度振荡强度一组温度()二组温度()三组温度()四组温度()11磁珠转移11002弱000022DNA结合120004强000032DNA结合4001504弱000043清洗12501005强000054清洗22801005强000065清洗2240103005强000076洗脱5002002强6060606083弃磁珠15005强00004 核酸转移程序运行完毕，取下96孔板，将洗脱液转移至干净的EP管或者PCR板中，提取过程完毕，此时可弃去96孔板。【手动版操作步骤】1 样本裂解参照【仪器自动版操作步骤】中步骤2进行操作。2 核酸结合向裂解完毕的EP管中按照等体积加入异丙醇和75L磁珠悬浮液，颠倒混匀后高速涡旋振荡10min，然后静置2min。3 磁性分离将EP管置于磁力架上静置20s至磁珠吸附完全，如果EP管内盖有液体，可保持EP管在磁力架上，整体上下颠倒23次，使磁珠完全被磁力架吸附。保持EP管固定于磁力架上，用移液枪完全弃去上清液，期间避免接触磁珠。4 清洗1) 向EP管中加入600L清洗液，将EP管从磁力架上取下，剧烈摇动使磁珠充分分散，涡旋震荡1min后，参照步骤3进行磁性分离。2) 使用600L 80%乙醇，参照上述步骤4(2)操作2次。5 除醇将除尽上清液后的EP管置于磁力架上，连同磁力架一起放入45真空干燥箱中，干燥约10min至无明显乙醇味。注：若无真空干燥箱，亦可在保持通风橱通风或电风扇的状态下静置约10min，具体时间根据气温变化可能需要适当调整，以磁珠干燥完全为原则。6 核酸洗脱取出EP管，加入100L洗脱液（或去离子水），移液枪吹打使磁珠与洗脱液充分混匀，将EP管置于65环境中加热洗脱5min，然后涡旋洗脱2min。7 核酸转移将EP管置于磁力架上静置30s至磁珠吸附完全，用移液枪将洗脱液转移至另一干净EP管中，操作过程完成，此时可以弃去磁珠。版权声明：© 英芮诚生化科技（上海）有限公司保留本使用指南所有权利。版本：V201703.081
