气相色谱法测定川芎油中阿魏酸的含量
气相色谱法测定川芎油中阿魏酸的含量 作者：李秋怡， 干国平， 王光忠， 刘焱文【摘要】 目的建立川芎油中阿魏酸的含量测定方法。方法采用内标法，以香荆芥酚为内标物，测定川芎油中阿魏酸的含量。结果阿魏酸在0.4026.432 mg·ml-1范围内具有良好线性关系，平均加样回收率为101.5%，RSD=1.66%。结论方法简单、重现性好，可作为川芎油中阿魏酸的含量测定方法。 【关键词】 川芎油； 阿魏酸； GC内标法Abstract：ObjectiveA method was established for the determination of ferulic acid in the Ligusticum chuanxiong Hort. oil by GC. MethodsCarvacrol was used as internal standard in order to determine the content of ferulic acid in the Ligusticum chuanxiong Hort. oil. ResultsThe calibration curve was linear within the range of 0.4026.432 mg·ml-1 of ferulic acid.The result showed that the recoveries and RSD were 101.5% and 1.66%,respectively. ConclusionThis method is simple and of good repeatability,and can be used to determine the content of ferulic acid in the Ligusticum chuanxiong Hort. oil.Key words：Ligusticum chuanxiong Hort. oil; Ferulic acid; Internal standard method of GC 川芎为伞形科植物Ligusticum Chuanxiong Hort.的干燥根茎。川芎油为川芎药材经超临界CO2流体萃取制得，主要含有苯酞内酯类、阿魏酸、川芎嗪等成分13，在国内许多药物研究单位已将其作为研发新药的原料。为了控制其质量，本实验以阿魏酸为定量指标，采用GC内标法对川芎油进行了含量测定。1 仪器与试药 SHIMADZU GC14C气相色谱仪；FID检测器；CLASS-GC10色谱工作站；HA-221-40-11-C型超临界萃取装置（江苏南通华安公司生产）。 对照品：阿魏酸（批号0733-9910，中国药品生物制品检定所提供，含量测定用），香荆芥酚（美国Sigma公司提供），归一法测定含量为99%，其它试剂均为分析纯。 川芎药材分别购自蕲春药材市场，北京同仁堂，桂林腾龙堂，上海童涵春堂，新乡佐今明大药房，临沂仁和堂，杭州大红鹰宝丰医药公司，经湖北中医学院鉴定教研室吴和珍博士鉴定均为伞形科植物Ligusticum chuanxiong Hort.的干燥根茎。 川芎油：自制（称取川芎饮片300 g，粉碎，过20目筛，置超临界CO2萃取装置中萃取，萃取温度50，萃取压力35MPa，萃取时间2 h，分离温度40，压力5.5 MPa，CO2流量为20 L·h-1。提取物经乙醚萃取，无水硫酸钠脱水后挥去溶剂，得澄明的棕黄色川芎油）。2 方法与结果2.1 色谱条件色谱柱为DB-17石英毛细管柱（30 mm×0.25 mm，0.25 m）；载气为氮气，分流比201；柱前压100 kpa；柱温为起始温度80，以5·min-1速率升至210；气化温度240；检测器温度240；进样量1 l。2.2 对照品溶液和内标物溶液的制备2.2.1 对照品溶液的制备精密称取阿魏酸对照品210 mg，以醋酸乙酯定容至25 ml量瓶中，制得浓度为8.04 mg·ml-1对照品贮备液。2.2.2 内标物溶液的制备精密称取香荆芥酚221.2 mg，以醋酸乙酯定容至50 ml量瓶中，制得浓度为4.424 mg·ml-1的内标物溶液。2.3 方法学考察2.3.1 标准曲线的制备分别精密吸取阿魏酸对照品贮备液0.5，1，2，4，8 ml置10 ml量瓶中，各精密加入内标物溶液1 ml，醋酸乙酯定容至刻度，摇匀。分别吸取1 l，注入气相色谱仪，按色谱条件进行测定，以对照品浓度为横坐标，对照品与内标物峰面积比值为纵坐标，绘制标准曲线，进行回归分析，得回归方程Y=1.067 5X-0.354 3，r=0.999 6，表明阿魏酸在0.4026.432 mg·ml-1范围内具有良好线性关系。2.3.2 校正因子的测定 取阿魏酸对照品约8，10，12 mg（相当于80%，100%，120%），精密称定，置10 ml量瓶中，精密加入内标溶液1 ml,醋酸乙酯稀释至刻度，摇匀，取1 l，注入气相色谱仪，连续进样3次，按平均峰面积计算校正因子，结果3种不同浓度的溶液所测校正因子的平均值为1.9151，RSD=0.84%。2.3.3 精密度实验 取0.804 mg·ml-1含内标物的对照品溶液，重复进样6次，结果RSD=1.47%，表明精密度良好。2.3.4 重现性实验 取同一批供试品溶液6份，按供试品测定方法测定，计算阿魏酸含量，结果RSD=1.21%，表明重现性良好。2.3.5 稳定性实验 取上述供试品溶液，分别于0，2，4，6，8，10，12，24 h进样，依法测定，结果RSD=1.49%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。2.3.6 加样回收率实验 分别精密称取已测定含量的同一批川芎油6份，各约0.25 g，加入阿魏酸对照品适量，精密加入内标物溶液0.5 ml于5 ml量瓶中，醋酸乙酯定容至刻度，摇匀。分别吸取1l注入气相色谱仪中，记录色谱，结果阿魏酸平均加样回收率为101.5%，RSD=1.66%。结果见表1。表1 回收率测定结果（略）2.3.7 样品的测定称取川芎油约0.5 g置于5 ml棕色量瓶中，精密加入内标物溶液0.5 ml，醋酸乙酯稀释至刻度，摇匀，吸取1l注入气相色谱仪，以内标法计算阿魏酸含量。结果见表2。色谱图见图1。（香荆芥酚TR 19.91 min， 阿魏酸TR 22.39 min）图1 阿魏酸对照品（a）与川芎油（b）气相色谱图（略）表2 样品含量测定结果（略）3 讨论 由于GC法进样量少，采用内标法可减少进样误差。本文采用GC法对川芎油中阿魏酸含量进行了测定。结果表明，本方法简便、准确、重现性好，可为川芎油及其制剂的质量控制方法提供参考。 实验中曾分别对麝香草酚、香荆芥酚、苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯作为内标物进行选择，结果香荆芥酚不与川芎油中其它峰重叠，并与阿魏酸完全分离。 实验中曾对DB-1，ZB-5和DB-WAX色谱柱进行了试验比较，结果以DB-17色谱柱分析效果好。 本项目在湖北省中药资源与中药化学重点实验室完成。【参考文献】 1 李 慧，王一涛.不同方法提取川芎挥发油的比较分析J.中国中药杂志，2003，28（4）：379.2 张 虹，柳正良，王洪泉.超临界萃取法提取川芎中有效成分的研究J.中草药，2001，32（12）：1077.3 刘 本.法多索溶剂和超临界流体提取川芎中的川芎嗪J.中国医药工业杂志，1999，30（5）：196.
