圣愈汤及其拆方对血虚小鼠红细胞生成素影响的实验研究

圣愈汤及其拆方对血虚小鼠红细胞生成素影响的实验研究【摘要】 探讨圣愈汤补血的作用机理与配伍机制。方法采用60Co射线照射诱发的放射损伤性血虚小鼠模型，观察比较圣愈汤及其拆方对造血功能损伤的修复作用以及调控EPO对造血功能的影响。结果圣愈汤及各拆方组能明显提高血虚小鼠血中EPO水平，熟地黄、白芍药在通过促进血虚小鼠EPO分泌，调控造血的环节上有与全方相似的作用，体现了益精补血药在补血剂中促进红系细胞生成的主导作用。当归、川芎能增强熟地、白芍提高血虚小鼠EPO水平。人参、黄芪似有抑制熟地、白芍组合以及熟地、白芍与川芎、当归组合升高血中EPO水平的作用。结论圣愈汤调控血虚小鼠血液中EPO水平，是其有效改善血虚小鼠贫血状况，促进造血功能修复的重要环节，其补气益精生血组合，体现了既相互协同又相制为用的整体效应特点。 【关键词】 圣愈汤；组方配伍；造血调控；红细胞生成素 Experimental Study on Effect of Shengyu Decoction and Its Decomposition on Rats Red Cell EPO Shandong University of TCM,Ji'nan(250014)Abstract:ObjectiveTo explore the functional mechanism and compatibility of Shengyu Decoction notifying blood.Method Take60Coy ray radiation to induce blood deficiency mice model of radioactive injury,observe and compare the effect of the decoction and its decomposition on recovery of hemopoiesis injury and regulating EPO level,embodying the main function of drugs of reinforcing essence and notifying blood EPO level of mice in blood deficiency is the effective link of improving anemia and promoting recovery of hemopoiesis;its combination of notifying Qi,essence and producing blood embodies the whole efficacy of mutual coordination and control.Key words:Shengyu Decoction;compound and compatibility;hemopoiesis regulation;EPO 圣愈汤是中医补益气血的经典名方，源于元朱丹溪脉因证治，临床常用于血虚证的治疗。为探讨该方补血的配伍机制和作用机理，采用60Co射线照射诱发的放射损伤性血虚小鼠模型，观察比较圣愈汤及其拆方对造血功能损伤的修复作用以及对红细胞生成素调控造血功能的影响，为临床应用乃至阐明补血类方剂的配伍机制提供实验依据。1 实验材料与方法1.1 实验材料1.1.1 实验动物健康Balb/c小鼠（SPF级）210只，雌雄各半，体重(18.0±1.0)g，购自山东大学医学实验动物中心（动物质量合格证：鲁动质字D20021239号）1.1.2 实验药品及试剂熟地黄、白芍药、人参、黄芪、当归、川芎一次同批购自济南建联中药有限公司总店，并经山东中医药大学中药鉴定教研室鉴定。促红细胞生成素（EPO）放免试剂盒，购自海军放射免疫中心。1.1.3 主要仪器Sysmex F820自动血球计数仪，日本希森美康公司；FJ2021型放射免疫计数器，西安国营二六二厂；LGR16W型医用高速低温离心机，北京医用冷冻离心机厂。1.2 实验方法1.2.1 实验分组将实验动物随机分为7组，每组30只，雌雄各半。分别为正常组、拆方1为益精补血组(熟地20g、白芍15g)、拆方2为补气生血组(人参15g、黄芪12g)、拆方3为益精补气生血组(熟地20g、白芍15g、人参15g、黄芪12g)、拆方4为补血和血组(熟地20g、白芍15g、当归12g、川芎9g)、圣愈汤即全方组(熟地20g、白芍15g、当归12g、川芎9g、人参15g、黄芪12g)和模型组。其中拆方4即四物汤，既是拆方的一个组合，又作为本研究的阳性对照药。1.2.2 动物模型制备参照文献12采用60Co照射制作放射损伤性血虚证模型。Balb/c小鼠适应性饲养1周后，除正常组（假照射）外，其余各组进行60Co射线3.5G一次全身照射制成血虚证模型。小鼠吸收剂量率为1.27Gy/min，照射时间为165sec，照射距离为4m。1.2.3 药物制备各实验组药物加蒸馏水浸泡30min，煎煮2次，分别煮沸60min和45min，合并2次药液，4层纱布过滤，水浴蒸发浓缩，配制成100%药液（即浓度调至每ml药液含生药1g），置4冰箱保存备用。1.2.4 给药方法模型制作后，连续灌胃21d，每天1次，每次0.125ml10g（拆方1组、拆方2组、拆方3组、拆方4组及全方组分别按5.3gkg、4.1g/kg、9.3g/kg、8.4g/kg、12.5g/kg给药，剂量相当于成人临床有效剂量的9倍）。正常组和模型组则给予等体积的生理盐水。1.3 检测指标1.3.1 外周血液成分分别于给药后第1d及连续给药第7、13、18d末次给药24h后，随机取各组小鼠8只，断尾静脉取血，用玻璃毛细吸管取血20l，用血球计数仪自动检测RBC、WBC、HGB、PLT。1.3.2 血清红细胞生成素水平血清来源于实验1.3.1中的各组小鼠，0.5%乌拉坦腹腔注射麻醉(50mgkg)，打开腹腔，分离下腔静脉，抽取静脉血2ml，4条件下3000rpm离心10min，分离血清，注入聚苯乙烯试管中，采用非平衡法，在放射免疫计数仪上测定沉淀cpm值，用仪器配备的软件6.4（DOS）处理分析后打印出有关参数、标准曲线及样品浓度。1.4 统计学处理采用SPSS10.0统计软件进行统计学处理。2 结果2.1 圣愈汤及其拆方对外周血液成分的影响见表14。表1 圣愈汤及其拆方对外周血WBC的影响（略）与正常组比较，*P<0.05，*P<0.01；与模型组比较，P<0.05，P<0.01；与全方组比较，P<0.01表2 圣愈汤及其拆方对外周血RBC的影响（略）与正常组比较，*P<0.05，*P<0.01；与模型组比较，P<0.05，P<0.01；与全方组比较，P<0.05，P<0.01；与拆方1组比较，P<0.05，P<0.01；与拆方4组比较，P<0.05，P<0.01表3 圣愈汤及其拆方对外周血HGB的影响（略）与正常组比较，*P<0.05，*P<0.01；与模型组比较，P<0.05，P<0.01；与全方组比较，P<0.05，P<0.01；与拆方1组比较，P<0.05，P<0.01；与拆方4组比较，P<0.05，P<0.01表4 圣愈汤及其拆方对外周血PLT的影响（略）与正常组比较，*P<0.05，*P<0.01；与模型组比较，P<0.05，P<0.01；与全方组比较，P<0.05，P<0.01；与拆方1组比较，P<0.05，P<0.01；与拆方4组比较，P<0.05，P<0.01 如表14所示，圣愈汤有明显升高血虚小鼠外周血中WBC、RBC、HGB、PLTR作用（P<0.05或0.01），其升高RBC和HGB的作用不如四物汤，但从总体疗效综合分析，圣愈汤的作用较为全面。益精补血药在方中起主导作用，配伍补气健脾药、调血和血药对增加WBC、PLT可起协同增效作用，对增加RBC和HGB则与当归、川芎配伍效果更佳。2.2 圣愈汤及其拆方对血清红细胞生成素水平的影响 如表5（表5 圣愈汤及其拆方对小鼠血清EPO水平的影响（略）与正常组比较，*P<0.05，*P<0.01；各组与模型组比较，P<0.05，P<0.01；拆方2组与各给药组比较，P<0.05，P<0.01；拆方4组与各给药组比较，*P<0.05，*，P<0.01）所示，圣愈汤及各拆方组能明显提高血虚小鼠血中EPO水平(P<0.05或0.01)，提示该方药能有效改善由60Co照射所诱发的贫血。熟地黄、白芍药在促进血虚小鼠EPO分泌来调控造血的环节上有与全方相似的作用。拆方4明显优于拆方1（P<0.05），说明当归、川芎能增强熟地、白芍促进血虚小鼠EPO分泌的作用。而含有人参、黄芪的拆方3组及全方组，均有减抑无人参、黄芪的拆方1组及拆方4组作用的趋势，提示人参、黄芪似有抑制熟地、白芍组合以及熟地、白芍与川芎、当归组合升高血中EPO水平的作用。3 讨论 小鼠受60Co照射13天后，模型组与正常组相比，小鼠全血HGB明显低于正常组，而血清红细胞生成素（EPO）高于正常组，推测可能是60Co照射诱发了小鼠贫血，贫血促进了EPO的合成所致。提示60Co照射抑制了骨髓红系细胞生长，诱发了小鼠贫血。圣愈汤及各拆方组能明显提高血虚小鼠血中EPO水平，熟地黄、白芍药在通过促进血虚小鼠EPO分泌来调控造血的环节上有与全方相似的作用，体现了益精补血药在补血剂中促进红系细胞生成的主导作用。当归、川芎能增强熟地、白芍提高血虚小鼠EPO水平。人参、黄芪似有抑制熟地、白芍组合及其与川芎、当归组合升高血中EPO水平的作用。拆方4组（即四物汤）HGB浓度与正常组无显著性差异，EPO却明显高于模型组和正常组，提示四物汤改善60Co射线诱发的贫血的机理之一，可能是通过刺激肾脏合成EPO，并减轻骨髓的抑制作用而实现的34。而人参、黄芪对四物汤诱导机体分泌EPO作用呈现出的抑制效应，表明圣愈汤在调控EPO分泌、促进红系造血作用方面，体现了其组方相制为用的特点。EPO有升高血压等副作用，圣愈汤既能促进EPO分泌，又不致使其水平过于升高，从而抑制EPO对血压的影响5。因此，就圣愈汤通过调控EPO促进造血的作用环节而言，其组方要比四物汤更为合理，体现了既补气生血、又相制为用的整体效应。 本研究结果显示，圣愈汤全方及其各拆方组均有提高血虚小鼠全血WBC、RBC、HGB和PLT数量的作用。补气健脾的人参、黄芪对提升血虚小鼠血液中的白细胞数量具有重要作用，初步佐证了中医“补气生血”的科学内涵；人参、黄芪与益精补血药及补血调血药相配，能够相互协同，增强疗效。提示补血剂中的益精补血药对升高红细胞发挥主导作用，补气健脾药及调血和血药可增强益精补血药的“补血”作用。促进机体分泌促红细胞生成素或增强其活性，进而通过EPO的生物学效能，刺激红系细胞的产生、成熟与释放，补充破坏和死亡的红细胞，维持血细胞的相对稳定，可能是圣愈汤提升血液中红细