CTGF、HIF1α和VEGF在子宫颈浸润性鳞状细胞癌癌变中的表达及意义

i 、；，#，j，目录l l ll lI III I II III I II IIIlIY 1 9 0116 3中文摘要0 10010 l英文摘要5研究论文C T G F 、H I F 1 a 和V E G F 在子宫颈浸润性鳞状细胞癌癌变中的表达及意义前言···9目U 舌”一一”一”一一材料与方法9结果·······13附图“一“一·一··“一·····16附表························2 5讨论··- ······3 0结论··················3 2参考文献3 2综述C T G F 的研究进展34致谢······························4 3个人简历4 4中文摘要C T G F 、H I F 1 a 和V E G F 在子宫颈浸润性鳞状细胞癌 癌变中的表达及意义摘要目的：子宫颈鳞状细胞癌( c e r v i c a ls q a m o u sc e l lc a r c i n o m a ，C S C C )是女性生殖系统常见的恶性肿瘤之一，在全球范围内占女性恶性肿瘤发病率的第二位。在我国，近年来子宫颈鳞状细胞癌有发病年轻化的趋势，严重影响着妇女健康。宫颈上皮瘤变( c e r v i c a li n t r a e p i t h e l i a ln e o p l a s i a ，C I N )即C S C C 的癌前病变，研究C I N 的生物学特性及其癌变机制，对早期发现、早期诊断和早期治疗C S C C 具有重要的意义。结缔组织生长因子( c o n n e c t i v et i s s u eg r o w t hf a c t o r , C T G F ) 是高度保守的即刻早期基因C C N ( C T G F ，C y r 6 1 ，N o v ) 家族中的一员。h C T G F 可在机体多种组织器官，如心、脑、肾、肺、肝及胎盘中表达。C T G F 具有刺激细胞的有丝分裂和成纤维细胞增殖、介导细胞黏附和趋化作用、促进血管生成等生物学功能，尤其在肿瘤生长和血管生成方面与多种促血管生成因子，如V E G F ( v a s c u l a re n d o t h e l i a lg r o w t hf a c t o r , V E G F ) 、H I F 1a( h y p o x i a i n d u c i b l ef a c t o r - 1 a ，H I F 1 a ) 关系密切，但内在机制尚不完全清楚。有研究结果显示，C T G F 与多种肿瘤如甲状腺癌、肝癌、浸润性胃癌、肺腺癌、食管鳞状细胞癌等的发生发展有关。国外w o n g 等【8 】应用定量逆转录多聚酶链扩增技术研究2 9 例子宫颈鳞状细胞癌标本和1 8 例对照标本中的表达结果提示，正常宫颈上皮表达高于宫颈鳞癌。国内目前，有关子宫颈鳞状细胞癌中C T G F 表达的文献报道很少，且C T G F 联合两种较强的促血管新生因子H I F 1 a 及V E G F ，研究其在子宫颈鳞状细胞癌发生发展中的作用及相互作用机制更鲜有报道。因此，本研究拟以免疫组化方法探讨正常宫颈鳞状上皮、宫颈上皮内瘤变、子宫颈浸润性鳞状细胞癌中C T G F , H I F 1 a 和V E G F 的表达情况，以进一步阐明C T G F 是否可以作为C I N 发展成癌的一个早期标志或信号，而应用于筛查和评估高危人群，以期对于宫颈癌的早发现、早诊断有一定的临床意义。方法：采用免疫组织化学( E l i V i s i o n T Mp l u s 两步法) 检测2 0 例正常中文摘要宫颈鳞状上皮、5 2 例宫颈上皮内瘤变( 包括C I NI2 2 例、C I N I I1 4 例、C I N I I l l 6 例1 和5 6 例宫颈浸润性鳞状细胞癌( 高中分化2 7 例、低分化2 9例) 中C T G F 、H I F 一1 仅、V E G F 的表达情况及其相互关系，分析其在宫颈鳞状上皮癌变及其进展中的可能意义。结果：1C T G F 的表达情况C T G F 蛋白在正常宫颈上皮、C I N 和子宫颈浸润性鳞状细胞癌组的阳性表达率分别为10 0 0 、4 4 2 3 和9 2 8 5 。子宫颈浸润性鳞状细胞癌阳性表达率和C I N 组阳性表达率均明显高于正常组( P 5 0 计3 分；着色强度以多数阳性细胞呈现的染色计分，基本不着色者计0分，着色淡着者计1 分，着色深者计2 分；将阳性细胞百分比和着色强度两者的计分相乘，O 1 分为阴性( 一) ，2 分为阳性( + ) 。2 3 2H I F 1 a 蛋白的评定标准：H I F 1 a 蛋白阳性产物主要在细胞浆和细胞核表达，在细胞浆和细胞核内呈现棕黄色颗粒。染色结果参照K r a j e w s k a 【5 】等的方法，依据组织细胞染色强度和阳性细胞的百分比率进行半定量的综合计分，分为2 级( 一，+ ) 。即随机选取5 个高倍镜视野计数阳性细胞百分比的平均数，阳性细胞 5 0 计3 分；着色强度以多数阳性细胞呈现的染色计分，基本不着色者计0 分，着色淡着者计1 分，着色深者计2 分；将阳性细胞百分比和着色强度两者的计分相乘，0 “ - - ' 1 分为阴性( 一) ，2 分为阳性( + ) 。2 3 3V E G F 蛋白的评定标准：V E G F 蛋白阳性表达产物主要为细胞浆内有棕黄色颗粒。染色结果参照K i mY B 【6 】等的方法并稍加改进，依据染色强度和阳性细胞百分比率进行半定量的综合计分，分为2 级( 一，+ ) 。即随机选取5 个高倍镜视野计数阳性细胞百分比的平均数，无阳性细胞计0分， 3 c m 者2 4 例，< 3c m 者3 2 例；按分化程度分，其中低分化2 9 例，中分化2 4 例，高分化3 例( F i g 5 - 7 ) ；临床分期I a I b 期4 3 例，I I a I I b 期13 例；有淋巴结转移者8 例，无淋巴结转移者4 8 例。2 免疫组织化学化学染色结果2 1C T G F 在各组病例细胞中的表达情况C T G F 蛋白在正常宫颈上皮、C I N 和宫颈浸润性鳞状细胞癌组的阳性表达率分别为1 0 O O 、4 4 2 3 和9 2 8 6 。宫颈浸润性鳞状细胞癌和C I N组阳性表达率明显高于正常组( P < O 0 5 ) ，宫颈浸润性鳞状细胞癌组的阳性表达率也高于C I N 组( P < O 0 5 ) ( T a b l e1 ) 。从正常宫颈上皮、C I N 到宫颈浸润性鳞状细胞癌C T G F 的表达呈不断增高的趋势。进一步研究表明，C T G F 在C I N 中的阳性表达率也随C I N 级别的升高而增高，C I NI ( F i g 8 ) 、C I N I I ( F i g 9 ) 和C I N I I I ( F i g 1 0 ) 组中C T G F 的阳性表达率分别为3 1 8 2 、5 0 o o 和8 0 7 7 ( f = 1 0 1 1 8 ，P < 0 0 5 ) ，高级别c I N 组( C I N I I I ) 中C T G F 蛋白的阳性表达率均高于低级别C I N 组( C I NI 、C I N I I ) ( P <0 0 5 ) ( T a b l e2 ) 。在宫颈浸润性鳞状细胞癌病例中，C T G F 表达与肿瘤分化程度密切相关，随宫颈浸润性鳞状细胞癌分化程度降低，C T G F 表达率呈升高趋势，C T G F 在高中分化宫颈鳞状细胞癌( F i g 11 ，1 2 ) 中的表达明显低于低分化组( F i g 1 3 ) ( 8 5 1 6 v s l 0 0 ，# = 4 51 3 ，P < 0 0 5 ) 。2 2H I F 1 0 t 在各组病例细胞中的表达情况研究论文2 0 例正常宫颈上皮、5 2 例C I N 矛D5 6 例宫颈浸润性鳞状细胞癌( F i g 1 5 )组织中H I F 1 a 蛋白的阳性表达率分别为1 5 0 0 、4 4 2 3 和8 2 1 4 ，从正常宫颈上皮、C I N 到宫颈浸润性鳞状细胞癌H I F 1 a 表达呈不断增高的趋势。宫颈浸润性鳞状细胞癌组的H I F 1 a 蛋白的阳性表达率明显高于正常和C I N 组( P < 0 0 5 ) ( T a b l e3 ) 。H I F 1 a 在C I N 中的阳性表达率也随C I N 级别的升高而增高，C I NI 级、C I N I I 级( F i g 1 4 ) 、C I N I I I 级H I F 1 ( x蛋白的阳性表达率分别为31 8 2 ，5 0 0 0 、8 0 7 7 ( = 10 7 6 3 ，P < o 0 5 ) 。其中高级别C I N 组( C I N I I I ) 的H I F 1 a 蛋白的阳性表达率均明显高于低级别C I N 组( C I NI 和C I N I I ，P < 0 0 5 ) ( T a b l e4 ) 。2 3V E G F 在各组病例细胞中的表达情况正常宫颈上皮、C I N 和宫颈浸润性鳞状细胞癌( F i g 1 7 ) 中V E G F 的阳性表达率分别为1 0 0 0 、5 3 8 5 和8 0 3 6 。从正常宫颈上皮、C I N 到宫颈浸润性鳞状细胞癌V E G F 表达呈不断增高的趋势。宫颈浸润性鳞状细胞癌和C I N 组V E G F 的阳性表达率明显高于正常组( P < O 0 5 ) ，宫颈浸润性鳞状细胞癌组的阳性表达率也高于C I N 组( P < O 0 5 ) ( T a b l e5 ) 。在不同级别的C I N 组织中V E G F 蛋白的阳性表达率随C I N 级别的升高而增高，C I NI 、C I NI I 、C I N I I I ( F i g 1 6 ) 组中V E G F 的阳性表达率分别为3 6 3 6 、4 2 8 6 和8 1 2 5 ( x j ! = 1 9 9 6 7 ，P < 0 0 5 ) 。高级别C I N 组( C I N I I I ) V E G F蛋白的阳性表达率均明显高于低级别C I N 组( C I NI 和C I NI I ，P < 0 0 5 )( T a b l e6 ) 。2 4C T G F 与H I F 1 a 及V E G F 表达的相关关系在C T G F 呈阳性表达的7 7 例正常、C I N 及宫颈浸润性鳞状细胞癌病例中有5 7 例呈H I F 1 a 阳性表达，2 0 例呈H I F 1 a 阴性表达；C T G F 呈阴性表达的5 1 例中有1 5 例呈H I F 1 a 阳性表达，3 6 例呈H I F 1 a 阴性表达。统计学分析结果表明，本实验各组中C T G F 与H I F 1 a 不存在相关关系( #