胶原蛋白的作用功效和提取过程
理学硕士学位论文：型胶原蛋白的制备、鉴定及其抗UVA氧化损伤作用的初步研究咱先介绍胶原蛋白的作用，后面在介绍胶原蛋白提取过程，有需要的可以耐心看完.胶原蛋白的功效和作用 保湿：胶原蛋白含亲水性的天然保湿因子，而且三螺旋结构能强劲锁住水分，让皮肤时刻保持湿润、水嫩的状态！ 滋养：活性胶原蛋白对皮肤的渗透性强，可透过角质层与皮肤上皮细胞结合，参与和改善皮肤细胞的代谢，使皮肤中的胶原蛋白活性加强。它能保持角质层水分及纤维结构的完整性，改善皮肤细胞生存环境和促进皮肤组织的新陈代谢，增强血液循环，达到滋润皮肤的目的。 亮肤：皮肤的光泽取决于含水量，胶原蛋白良好的保水能力使皮肤水润亮泽，散发健康的光彩。紧肤：当胶原蛋白被皮肤吸收后，填充在皮肤真皮之间，增加皮肤紧密度，产生皮肤张力，缩小毛孔，使皮肤紧绷而富有弹性！ 防皱：真皮中丰满的胶原蛋白层，将皮肤细胞撑起，结合保湿和抑制皱纹的作用，共同达到舒展粗纹，淡化细纹的功效！ 修复：活性胶原蛋白能直接渗入肌肤底层，且与周围组织的亲和性好，可协助细胞制造成胶原蛋白，促使皮肤细胞正常成长。同时，活性胶原蛋白本身还具有消炎和更新肌肤的作用。 营养：胶原蛋白对皮肤的渗透性强，可透过角质层与皮肤上皮细胞结合，参与和改善皮肤细胞的代谢，使皮肤中的胶原蛋白活性加强。它能保持角质层水分及纤维结构的完整性，改善皮肤细胞生存环境和促进皮肤组织的新陈代谢，增强血液循环，达到滋润皮肤的目的。 美乳：胶原蛋白中独有的羟脯氨酸具有收紧结缔组织的作用，能使松弛的组织紧实、承托起下垂的乳房，使乳房挺拔、丰满、富有弹性。目 录英文缩写对照表1中文摘要2英文摘要41 前言62 材料62.1 主要仪器设备62.2 实验动物72.3 样品与试剂82.4 常用工作液83 方法93.1 CP的制备93.1.1 粗提法93.1.2 高效液相色谱分离纯化 103.2 CP的理化性质鉴定 103.2.1 37 OC凝结试验 113.2.2 紫外吸收值测定 113.2.3 氨基酸组成和含量分析 113.2.4 蛋白质浓度测定 113.2.5 SDS-PAGE凝胶电泳123.2.6 RP-HPLC分析CP 123.2.7 生物安全性实验 133.3 CP防止UVA氧化损伤实验143.3.1 L929细胞的培养、冻存与复苏143.3.2 UVA对L929细胞活性的影响 143.3.3 CP对细胞UVA氧化损伤的保护作用144 结果 164.1 CP的制备 164.2 CP的理化性质鉴定 164.2.1 37 OC凝结试验 164.2.2 紫外吸收值测定 164.2.3 CP氨基酸组成和含量分析 174.2.4 蛋白质浓度测定 184.2.5 SDS-PAGE凝胶电泳194.2.6 RP-HPLC分析CP194.2.7 生物安全性试验 204.3 CP防止UVA氧化损伤实验 224.3.1 UVA对L929细胞活性的影响 224.3.2 CP对细胞UVA氧化损伤的保护作用 225、讨论255.1 CP的制备 255.1.1 提高CP得率的因素255.1.2 提高CP纯度的因素265.1.3 高效液相色谱是分离纯化CP的有效途径 275.2 CP的理化性质鉴定 275.2.1 CP在223nm处有紫外最大吸收值 275.2.2 CP氨基酸组成及含量分析 275.2.3 SDS-PAGE鉴定285.2.4 RP-HPLC分析CP 285.2.5 CP具有生物安全性 285.3 CP防止UVA氧化损伤研究 295.3.1 UVA对成纤维细胞有活性有抑制作用 295.3.2 CP能够降低UVA氧化损伤的细胞MDA活性 305.3.3 CP能够提高UVA氧化损伤细胞的GSH-px活性 30小结 31参考文献 32文献综述 胶原蛋白的研究进展 37致谢 46英文缩写对照表英文缩写英文名称中文名称CPCollagen protein型胶原蛋白A Absorbance吸光值BPBBromophenol blue溴酚蓝ddH2O Double distilled water双蒸水PBS Phosphate buffered saline磷酸盐缓冲液SDS-PAGESDS-polyacrylamidegel electrophoresis聚丙烯酰胺凝胶电泳SDSSodium dodecyl sulfate十二烷基磺酸钠TrisTris(hydroxymethyl)aminomethane 三（羟甲基）氨基甲烷TEMEDN,N,NN-tetra methylethylene diamineN,N,NN-四甲基乙二胺DMSODimethyl sulphoxide 二甲基亚砜CBBCoomassie Brillant Blue考马斯亮蓝MTT 3-(4,5-dimethyl thiazol-2-yl)-2,5 -diphenyl tetrazolium bromide噻唑蓝HPLCHigh performance liquid chromatography高效液相色谱UVAUltraviolet radiation A长波紫外线MDAMalondialdehyde丙二醛GSH-pxGlutathione peroxidase谷胱甘肽过氧化物酶 型胶原蛋白的制备、鉴定及其抗UVA氧化损伤作用的初步研究学科专业：动 物 学 研究方向：生化制药 指导教师：魏泓 教授 研 究 生：王 琳（2001345） 内 容 摘 要本文围绕型胶原蛋白（CP）的制备及其理化性质进行研究，同时在其防止长波紫外线（UVA）对细胞的氧化损伤方面进行了初步探索，为CP的进一步研发提供理论基础和科学依据。以猪皮为材料，比较酸溶法、酶解法、中性盐溶液法三种粗提方法，选择得率和纯度都较高的酶解法为最佳粗提法，结合高效液相色谱进行CP的分离纯化。CP理化性质鉴定结果表明：样品在223 nm处有紫外最大吸收值；含有十八种氨基酸，氨基酸总量在90%以上；样品的蛋白质浓度为1.03mg/ml；SDS-PAGE测定CP由、三条链组成；色谱分析纯度约为100%。通过小鼠急性毒性试验、豚鼠致敏试验、细胞毒性试验对自制CP进行整体水平和细胞水平的生物安全性评价，观察期内，小鼠未见异常毒性反应；豚鼠注射点无红斑及水肿情况；细胞毒性小于级，结果证明本方法制备的CP无毒副作用。评价CP对UVA氧化损伤的L929细胞的保护作用。结果表明：随着UVA照射时间的延长，细胞的活性明显降低，说明UVA对细胞的氧化损伤是明显的，其中表现为MDA的含量升高、GSH-px的含量降低。加入不同浓度的CP后照射同样的时间，MDA的含量有所下降、GSH-px的含量有所升高，其中50%CP组的效果极为显著（P0.01）。提示该物质有防止UVA氧化损伤的作用。综上所述，利用酶解和高效液相色谱制备相结合的方法可以从猪皮中分离纯化CP，该方法具有高效性，高选择性和易放大性；理化性质鉴定及生物安全性试验表明，该物质为纯活性胶原蛋白，无毒副作用；同时对体外细胞的UVA氧化损伤具有较好的保护作用。关键词：型胶原蛋白；高效液相色谱；制备；鉴定；氧化损伤Studies on the preparation，identification of CPand its protective effect on cells damaged by UVAMajor : Biology Speciality : Zoology Tutor : Prof. Wei Hong Author : Wang Lin（2001345）AbstractIn this paper,how to prepare CPand identif
