抗氧化活性实验方法

抗氧化活性实验方法(体外实验)1、清除DPPH自由基能力的测定称取一定量的DPPH,用无水乙醇配制成mL的DPPH溶液。分别取2mL不 同浓度(2, 4, 6, 8mg/mL)的溶液，加入2mL DPPH溶液，混合均匀，室温 放置30min后，5000r/min离心lOmin。取上清液于517nm处测吸光值。用Vc 作为阳性对照。样品对DPPH自山基的清除率用以下公式计算：DPPH清除率=1(八乜)xlOO%4A0-2mL无水乙醇+ 2mL DPPH溶液的吸光值；Ai-2mL样品溶液+ 2mL DPPH溶液的吸光值；A2-2mL样品溶液+ 2mL无水乙醇的吸光值。2、总还原能力的测定在10mL离心管中分别加入L pH的磷酸缓冲液和不同浓度(2, 4, 6, 8mg/mL)的溶液ImL,加入mL 1%铁氛化钾，混合均匀后于5O°C反应20min。 取出后加入10%三氯乙酸终止反应，5000r/min离心lOmino取上清液，加入蒸 憎水和FeCb,混匀后静置lOmin,在700nm处检测吸光值。Vc作为阳性对 照。3、对血2+离子螯合能力的测定分别取ImL不同浓度(2, 4, 6, 8mg/mL)的溶液和蒸僻水，加入 2mmol/L的FeCg溶液和5mmol/L的菲洛嗪溶液,25°C水浴lOmin,于562nm 处测吸光值。EDTA为阳性对照。样品对Fe2+的螯合率计算公式如下：Fe2+螯合率=1-(儿一儿)xl00%4Ao-lmL蒸憎水代替反应体系中样品溶液后的吸光值；Ai样品溶液反应后的吸光值；A2的蒸憾水代替反应体系中FeCb溶液后的吸光值。4、超氧自由基(O2 )清除率的测定采用邻苯三酚自氧化法测定。取50mmol/LTris-HCl缓冲液()，置25°C水 浴中保温20min,分别加入ImL样品溶液和25mmol/L邻苯三酚溶液，混匀后 于25°C水浴中反应5min,加入ImL 8mmol/L HCI终止反应，于299nm处测定 吸光度(AJ ,空白对照组以相同体积蒸镭水代替样品。按下式计算02-清除 率：02-清除率=xlOO%&Ao空口对照液吸光度；民一样品溶液吸光度。5、轻自由基(OH)清除率的测定利用H2O2与Fe2+混合产生0H,在体系中加入水杨酸捕捉0H并产生有色物 质，该物质在510nm下有最大吸收。反应体系中含L H2O2 ImLs 9mmol/L FeSCU ImL、9mmol/L水杨酸-乙醇溶液ImL,不同浓度的样品溶液ImL。最后加H2O2 启动反应，37°C反应30min,以蒸镭水为参比，在510nm下测定各浓度的吸光 度。考虑到样品本身的吸光值，以9mmol/L FeSO4 lmL 9mmol/L水杨酸-乙醇 溶液ImL,不同浓度的样品溶液ImL和ImL蒸镭水作为样品的本底吸收值。按 下式计算?0H清除率：(A -A 0H清除率=1 一丄“空xlOO%I 4Ao空口对照液的吸光度；Ax加入样品溶液后的吸光度；Axo不加显色剂H2O2样品溶液本底的吸光度。#