流式细胞术简介及应用进展讲座

流式细胞术在临床及科研中的应用1、流式细胞术的基本原理2、流式细胞术在临床及科研中的应用3、流式细胞术临床应用的新进展Main contents:Main contents:一、流式细胞术的基本原理一、流式细胞术的基本原理Ø定义：以流式细胞仪为主要工具，对处在快速直线流动状态中的细胞或生物颗粒细胞的各种成分进行多参数、快速的定量分析和分选的技术。 ØFCM是诸如生物学、生物技术、计算机科学、流体力学、激光技术、高等数学、临床医学、分子生物学、有机化学和生物物理学等到学科知识综合运用的结晶。Ø现代流式细胞术，更是由于结合了单克隆抗体技术、定量细胞化学和定量荧光细胞化学的应用，使其在生物学、临床医学、药物学等等众多研究领域的应用有了更加突飞猛进的发展 1、流式细胞术（FCM）的概述临床型小型，科研与临床结合型科研型大型，基础研究和加速分 选型FCM主要分两种类型 ：流式细胞仪Flow cytomter,FCM流式细胞术Flow cytometry,FCM激发荧光细胞分选仪Fluorescence activated cell sorter,FACS（BD公司）电子程序化单细胞分选仪Electronically programmable individual cell sorter, EPICS (Coulter公司）BD FACSCaliburBD FACSCalibur型型 FCMFCM（单单L L，3F3F）Coulter EPICS XL/XL-MCL （单L，4F）BD FACSVantage SE （14F， four-way sorting）Coulter EPICS ALTRA （空/水冷L， 6F）BD LSR （3L，6F） Coulter: FC 500BD FACSCountCD348 专为HIV监测设计的经济普及型流式细胞仪BD FACSAriaBD FACSCanto 2L 6CBD FACS Calibur 1L 4C三、流式细胞术应用的新进展§高速度：分析细胞数：1000个/s60000个/s §高灵敏度：荧光分子数/细胞：3000100个FITC； §高准确度：区分两个细胞：参数：相差5% 1%； §高精度：CV值：7% < 1%; §多参数：荧光：1个 12个参数； §高纯度：分选细胞：80-90% 99.9%; §其 它：荧光信号：线性检测对数检测 光谱重叠：补偿修饰剔除联体细胞及碎片1、 Quantitative FCM (QFCM)定量流式细胞术（Quantitative FCM, QFCM）是用流式细胞仪对特定细胞表面抗原进行绝对定量。其基本原理是采用某种标准物质获得一条标准曲线或线性方程，然后获得待测抗原绝对分子数。2、cytometric bead array (CBA)微球流式芯片技术(CBA)是一种微球多参数检测分析技术，它用一系列的微球组合来捕获并结合流式细胞术检测溶液中被检测物质的量，其采用夹心法分析策略。用已知的标准品和对照标准曲线就可得出被测样品的浓度。这种检测方法，既不受样品量的限制，也可同时检测多项指标参数；客观、省时、人为因素影响小。Principle of CBA :微粒体 探针分子 待测分子 报告分子CBA反应微球探针复合体结构模式图(如可溶性血清蛋白分子的CBA检测）Thanks for your Thanks for your attention!attention!