食源性疾实验室检测技术要点

食源性疾病实验室检测技术要点温州市CDC 李小春概述食物中毒应急处理与现场调查食源性疾病/食源性致病菌监测预警现场调查中的实验室支持概述食源性疾病指由摄取食物而进入人体内各种致病因素引起 的通常为感染或中毒的一类疾病（WHO）食物中毒摄入了含有生物性、化学性有毒有害物质的食 品或者把有毒有害物质当作食品摄入后出现非传染 性(不属于传染性)的急性、亚急性疾病.GB14938- 94食源性疾病有暴发和散发两种形式，食物中毒是食源性疾 病的暴发形式突发公共卫生事件 是指突然发生或者可能发生，直接影响到公众健康和 社会安全,需要紧急应对的公共卫生事件突发公共卫 生事件应急条例 1、生物病原体所致疾病 2、食物中毒 3、不明原因群体性疾病 4、有毒有害因素污染造成的群体中毒 5、职业中毒 6、自然灾害、事故灾难、突发社会安全事件引发的健康 问题 7、三恐事件 8、其它严重影响公众健康事件“食物恐怖”的定义为：以化学性、生物性、 放射性等有害物质，蓄意污染食品，导致人群 伤害或死亡，破坏社会经济或政局稳定的行动 或危险。2002年，世界卫生组织召开专家会议，制定了 “建立与强化预防和应急反应体系的导则”。世卫组织警告，人畜共患疾病、食品恐怖主义 、食品污染和食源性疾病等正在威胁全球的食 品安全。 食物恐怖食源性疾病的特点分布广泛，对发展中国家和发达国 家都存在严重威胁 WHO资料显示： Ø 工业化国家，每年患病率达30。 Ø 发展中国家的流行状况难以估计 Ø 2000年210万人死于腹泻病 Ø 腹泻还是造成婴幼儿和儿童营养不良的 主要原因食源性疾病的特点对经济发展存在重大威胁医疗护理、爆发调查、生意破产 、不合格产品的回收、劳动力损失、法 律索赔等等的形式造成实际的经济损失 。 最主要的危害来自于生物性污染 目前在所有国家中食源性疾病的发病率 都有上升趋势 1.经济全球化趋势，人员交往频繁，物资交流大幅度增长，交通发达，旅游业发展，使世界变小了，传播 更为迅速。如全球国际航线旅客从1950年100万人次/年，至 2000年达到1300万人次/年。同期农产品货物贸易也 增长了五倍。 食源性疾病增长的原因每每 个人都面临患食源性疾病的危险个人都面临患食源性疾病的危险食源性疾病大多数是可以预防的。食源性疾病增长的原因2.经济发展都市化进程加快，大量农村人口拥向城市， 尤其是在城市城乡结合部和小城镇由于供水、排污、 住房及有关公共卫生设施严重超负荷，环境污染严重 ，自净作用缺失，犹如人体“肠梗阻”，容易造成各 种疾病的传播与暴发。食源性疾病增长的原因3.农副产品生产和食品加工的规模化和销售供应的商 品化，如果其中某种食品被污染,其涉及面和受感 染人群的范围，可远远超出过去一家一户或某一局 部地区的食源性疾病的传播扩散的范围。食源性疾病增长的原因4.人口老龄化，因器官移殖，免疫抑制剂使用和侵袭性 操作大量应用及抗生素滥用，免疫受损人群和医院内 感染也不断增加。5.人们生活方式、行为方式的变化。如冰箱的普及，使 单抗细胞增生李斯特菌等嗜冷菌的感染容易发生。食源性疾病增长的原因我省是自然灾害较多的省份，经济发展和工业化、都市化及人口老龄化是国内各省市中最快的省份之一。所以上述因素对浙江的影响，必须有充分的估计和防范,尤其是突发重大疫情的防范应有充分的准备。食源性疾病的分类食物中毒（急性）食源性肠道传染病食源性寄生虫病变态反应性疾病（食物过敏）暴饮暴食引起的急性胃肠炎等一次大量或长期低剂量摄入某些有毒、有害物 质引起的以慢性毒害为主要特征的疾病，食物营养不平衡所造成的某些慢性疾病等 食物中毒应急处理与现场调查为了及时准确掌握食物中毒发生原因，积极采取有效防 范措施，在食物 中毒调查时，要按照一定程序开展工作 。 食物中毒事故处理办法 卫生部1999 食品卫生监督程序 卫生部1997年 突发公共卫生事件应急条例 国务院2003年5月7日 相关法律法规食物中毒应急处理组织与职责食物中毒应急处理涉及卫生行政部门卫生监督机构疾病预防控制机构医疗救治机构其他有关部门食物中毒报告、信息管理制度1.食物中毒一般报告制度2.食物中毒紧急报告制度食物中毒应急处理准备一、应急处理准备原则要求 “预防为主、常备不懈” 二、重大食物中毒应急处理准备与支援 （一）食物中毒监测与预警 （二）资金储备 （三）食物中毒物资准备三、食物中毒应急处理演练四、预防和控制食物中毒的宣传和公众教育食物中毒应急物资准备1.食物中毒事故应急处理专用车辆2.采样用物品3.音像取证工具4.现场快速检验、测量设备5.法律文书：6.参考资料7.其它有关物品：病因初步判断症状体征微生物食物中毒大多为急性弧菌中毒表现为呕吐、泻水、 脱水、体温下降等；沙门菌胃肠炎症状。如霍乱、志贺菌中毒表现为腹痛、 腹泻、发热等；变形杆菌中毒以上腹部刀绞样疼痛及急性胃肠炎症状为主； 葡萄球菌肠毒素引起胃肠炎，神经系统症状（肉毒毒素、真菌毒素、化学毒 物）；呼吸道症状（链球菌等）.初步病因判断潜伏期平均潜伏期意义：是确诊标准之一；用于估计 事故发生发展态势；决定调查起点餐次；确定采 取防治措施的时间范围，并考核防治措施效果。病因初步判断4类食物中毒的潜伏期一般是： 5 L液体食品 致病菌或毒物分析 可疑食物>200ml固体食品 致病菌或毒物分析 可疑食物>200g呕吐物 致病菌或毒物分析 >50g(ml)洗胃液 致病菌或毒物分析 >200ml腹泻物 致病菌或毒物分析 >50g(ml)血液 病原分离、抗体分析 >5ml脑脊液 病原分离 >2ml皮损分泌物 病原分析 灭菌生理盐水浸泡棉签涂取采多少所有标本在采集时立即分装，一式 N 份(不同检验项目、重复实验、其它实验室复核、留样) 采什么样 对 照内对照外对照暴发性食源性疾病多途径传播疾病（大肠杆菌O157:H7 ）潜伏期长的疾病（伤寒、李斯特菌等）非消化道症状的疾病水源性传播疾病需注意什么时间采 采样时间血清：如怀疑是沙门菌、变形杆菌、致泻大肠艾希菌食物 中毒时，应分别在患者急性期（3天以内）和恢复期（2周 左右）各采取血液23毫升，待凝固时分离血清，做抗体 滴度测定。如做血液细菌培养时，应将采取的血液直接注 入含有玻璃株的无菌小烧瓶中进行振摇，然后加入相应培 养基或直接将血液注入培养基中。如怀疑副溶血性弧菌食 物中毒时，应分别在患者中毒12天和1周时采取血液做抗 体滴度测定。 （因1周后抗体就降低或消失）。病毒分离标本最好在发病初期（1-2天）采样 品 采 集怎么采不同检验目的的样品细菌分离 病毒分离抗原-抗体检测化学毒物检测无菌部位基因检测木制的棉拭子 ？食物中毒事件怎么采 粪便可直接采取或采便管插入直肠采集；呕吐物可注入灭菌试管 内，由于胃酸能使样品为酸性，不利于细菌的存活，所以应在采集的 呕吐物内加入10苏打予以中和，以保持细菌的活性。咽喉涂抹样可 用棉签涂擦咽喉部采取洗胃液直接抽取注入灭菌容器内。血液血样的采集应尽早抽取患者的血液，在中毒患者急性期必要时 可作血样培养，但主要是用来检测患者血液中的抗体。一般需采血二 次以上，第一次在发病初期(3天以内)，第二次是在恢复期(2周左右) ，若患者血中抗体呈明显上升趋势，即可证实其受到过相应致病菌的 感染。方法是从肘静脉采取血液23ml，注入干热灭菌试管内，使成 斜面，待凝固后，分出血清送检。如做血液细菌培养，可直接注入灭 菌并带有玻璃珠的三角瓶中，立即振摇数分钟，以防凝固，然后送检 。食物中毒事件怎么采(3)对可疑中毒患者在解剖前不要将尸体用福尔马林、酒精等化学物 处理，解剖台要冲洗干净，所用的解剖器具、手套要预先冲洗干净、 晾干备用，不要沾染消毒药液（如来苏、酒精、升汞溶液等）以免污 染了检材。例如在解剖时使用了升汞溶液浸泡过的手套，手套上的升 汞就可能对样本污染，会干扰了病因的判定。在尸体周围不要喷洒农 药灭蚊蝇，以免污染可能用于毒物分析的检材。尸体解剖检样可采取胃肠内容物、脏器、肠系膜淋巴结及血液等。内 容物用灭菌注射器或灭菌器械采取，置入灭菌瓶内；脏器应先用烙铁 烧灼消毒表面，再用解剖刀剪和镊子取内部检样1020克，置于灭菌 容器内送检。血液及体液用灭菌注射器直接抽取或用灭菌棉签蘸取。对死亡患者一般从心腔内采集血液，也可采集腋下静脉、颈静脉、股静脉血 液，心腔内血液和周围血中毒物浓度不同。怎么采 样品采集程序采样用物品准备 采样程序方法 采样纪录样品编号样品保存使用卫生部统一制定的采样记录文书，经有关责任人员签字后送检；注意样 品 采 集影响采样的主要因素缺乏及时性： 由于一些消费者对食品卫生法观念淡薄，缺乏自我保护意识，食源 性疾病发生后他们不是首先及时向卫生监督部门报告疫情，而是自己先与 经营者交涉，在不能如愿的情况下才向卫生监督部门举报，因此造成一是经 营者在得知发生食源性疾病的情况后，首先处理掉一切可疑剩余食品，对 加工经营现场、工具、容器作了相应的处理；二是延误了报告的时间，从而 影响了对可疑食品和病人排泄物的采集。采样缺乏代表性： 由于食源性疾病多是突发性的，如细菌性食物中毒都有特定的潜伏期 ，最短1h 3h，一般5h 10h ，但当卫生监督部门接到疫情到达现场后 ，往往时间周期间隔较长，可疑食物已清理，即使采到几份剩余食物，也可 能不是当日餐桌上剩余菜肴，因此，常常出现食品中检出的细菌与病人排泄 物中检出的细菌不相符，影响了结果的分析。影响采样的主要因素食品加工制作现场各环节的采样往往能提供一些线索，但常常见到现场已被 清扫，食具和用具已清洗干净，同样也影响了食品加工工具、容器、场所的 采样和检验。 采样缺乏典型性：中毒病人发病后，患者一般开始时白行用抗菌毒，严重时才去当地医院治疗 ，由于一些医务人员对食源性疾病报告制度意识不强，导致了只管用药治 疗，忽视了对病人呕吐物和排泄物的留取，大量的抗菌素抑制了致病菌繁殖 ，从而影响了致病菌的检出率。 采样缺乏完整性：一般中毒病人发病期的血液能采集到，但是采集恢复期的血液，由于病人的 不配合或外出经常采不全也影响了检验结果的全面分析。 样品的处理(1)固体食物如系大块鱼肉、组织脏器等，先用烙铁烧灼表 面，或在沸水中烫35秒钟，然后再取内部检样510克， 按无菌要求，剪碎后置无菌乳钵内，加人适量灭菌海沙研 细，再加人无菌生理盐水作1：5稀释，混匀沉淀后，取上 清液进行接种和涂片染色镜检。(2)液体食物可将液体食物直接接种培养基，或离心(每分 钟3000转以上)半小时后，采取沉淀物进行细菌培养。(3)罐头食品如罐头尚未打开，先用温水洗净表面，并以95 酒精燃烧消毒，然后用灭菌开口刀将罐头打开，以无菌 操作将检样取出进行细菌检验。如罐头为空盒，可用肉汤 培养基冲洗盒内壁，以洗液做细菌培养。样品的处理(4)粪便和呕吐物以无菌生理盐水，充分搅拌混匀、静 置，待其中粗块下沉后，取上清液进行接种及涂片染 色镜检。(5)洗胃液用无菌试管低速离心后，取沉淀物进行检验 。(6)血液检样用做细菌培养的抗凝血，以灭菌吸管吸取 ，注人肉汤或其他培养基内增菌。用于测定患者血清 效价的血样，可用离心沉淀法或自