肝郁脾虚证模型大鼠甲状腺轴的变化及柴疏四君汤

精品论文推荐肝郁脾虚证模型大鼠甲状腺轴的变化及柴疏四君汤的作用1李艳彦 1，谢鸣 2，王洪海 3，陈禹 41.山西中医学院基础部方剂教研室，山西太原（030024）2.北京中医药大学国家重点方剂学学科，北京（100029）3.山东中医药大学伤寒教研室，山东济南（250355）4.教育部中曰友好医院营养科，北京（100029）E-mail：liyy1002163.com摘要：目的：探查中医肝郁脾虚证甲状腺轴的变化及柴胡疏肝散合四君子汤方（简称柴疏 四君汤）的作用。方法：大鼠采用慢性束缚应激过度疲劳饮食失节法建立肝郁脾虚证模型，测定造模三周、自然恢复一周及柴疏四君汤治疗一周后大鼠血清 TSH、T3、T4 的变化。结果：与正常对照组相比，造模第三周大鼠血清 TSH 显著降低(P<0.01)，T3 显著降低(P<0.05)，T4 显著升高(P<0.01)；自然恢复一周后模型大鼠血清 TSH 仍显著降低(P<0.05)，T3 和 T4 均显著降低(P<0.05 或 P<0.01)；与模型恢复组比较，柴疏四君汤组大鼠血清 TSH、T3、T4 均显著升高（P<0.05 或 P<0.01)。结论：肝郁脾虚证模型大鼠存在下丘脑垂体甲状腺轴功能的紊乱，柴疏四君汤具有纠正或调节肝郁脾虚证模型大鼠甲状腺轴功能紊乱的作用。 关键词：肝郁脾虚证；柴疏四君汤；TSH；T3；T4中医肝郁脾虚证含括了部分肝郁和脾虚的内涵。根据肝主疏泄，脾主运化的功能和临床 肝郁脾虚证所涉及到的现代疾病范围，推测中医肝郁脾虚证与神经、内分泌及物质代谢方面 的异常有关。已知柴胡疏肝散合四君子汤（简称柴疏四君汤）具有疏肝健脾的功用，对肝郁 脾虚证的治疗具有针对性。本研究在先前成功复制出肝郁脾虚证模型大鼠的基础上1，观察 了肝郁脾虚证模型大鼠造模三周及自然恢复一周后甲状腺功能的变化及柴疏四君汤对模型 相关变化的影响，以进一步探查该模型大鼠的生物学特点和疏肝健脾方的治疗作用。1. 材料和方法1.1 材料1.1.1 动物健康雄性 Wistar 大鼠 50 只，体重 220±10g，级别 SPF/VAF；许可证号：SCXK（京）2002-0003，北京维通利华实验动物中心提供。所有动物提前一周购入，分笼饲养，5 只 笼。光照节律 12L12D(6:0018:00)，室温 19±2，室内保持安静。1.1.2 模具束缚筒为有机玻璃制成的圆筒状结构，主筒长 25 厘米，筒口外径 7 厘米，内径 5 厘米； 前端置有一直径小于主筒的、可以前后调节的带有透气孔、便于大鼠头伸进的有机玻璃前罩， 后端为可调的开关闸门。1.1.3 试剂TSH-RIA 试剂盒、T3-RIA 试剂盒、T4-RIA 试剂盒，由北京华英生物技术研究所提供。1.1.4 药物1本课题得到教育部 211 项目-方剂学基础研究创新课题基金(BZY-211FJ-0402)的资助。-1-药材由北京同仁堂药业股份有限公司提供，经鉴定均为正品。柴疏四君汤为柴胡疏肝散和四君子汤的合方（组方：柴胡 4、陈皮 4、川芎 3、香附 3、枳壳 3、芍药 3、人参4、白术 3、茯苓 3、炙甘草 2）。按水煎浓缩干燥法制成颗粒剂（相当于生药材 335.7g/kg） 的剂量，灌胃浓度配制为 29.12%。1.1.5 主要仪器DDL5 型低温离心机：上海安亭科学仪器厂产；SN695B 型智能放免 测量仪：上 海核所日环光电仪器有限公司产。1.2 方法1.2.1 制模方法实验前全部动物进行预游泳，剔除游泳时间少于 10min、大于 20min 的大鼠。仍采用慢 性束缚应激过度疲劳饮食失节法1造模。合格造模大鼠于每天上午 8:00 置于束缚盒中 限制 3h，下午 2:00 置于盛有温水(22±1)的大塑料桶中游泳 10min。隔日喂食(隔日禁食， 隔日足量给食)，连续 3w。第 4 w 停止造模，自然恢复 1 w。1.2.2 分组处理将大鼠 50 只随机分为正常对照组（20 只）和模型组（30 只）。模型组按上述方法制模， 正常对照组动物不施加任何刺激，自然饲养。第 3w 末停止造模，造模组动物随机分成肝郁 脾虚（GYPX，20 只）和柴疏四君汤（CSD，10 只）两组。柴疏四君汤组按相当于药材 8.53g/kg 体重给予灌胃，连续 7d，每日 1 次。模型组和对照组分别给予等量蒸馏水。分别于造模第 21d 和自然恢复第 8d 上午 8 点（禁食 12h），各组大鼠 10水合氯醛麻醉 后，腹主动脉取血 2ml，室温放置，2500 rpm 15min 离心，取血清，置冰箱20保存，待 测 TSH、T3、T4。1.2.3 指标测定血清 TSH、T3、T4：采用放免法，按试剂盒说明操作。1.2.4 数据统计学处理各组所得数据均以 x±S 表示，用 SPSS 11.5 软件统计处理。单因素方差分析（one-wayANOVA）后，行多组间比较，采用 Student-Newman-Keuls 检验。2. 结果2.1 造模三周肝郁脾虚证模型大鼠甲状腺轴的变化结果见表 1。从表 1 可以看出，与正常对照组相比，造模三周的模型组大鼠血清 TSH、T3 均显著降低(P<0.01 或 P<0.05)，T4 显著升高(P<0.01)。表 1 造模三周肝郁脾虚模型大鼠甲状腺轴的变化（ x±S）groupNTSH(ulU/ml)T3(ng/ml)T4(ng/ml)norm1012.72±2.900.98±0.1531.65±8.38GYPX109.86±1.060.87±0.0943.61±8.77P<0.05,P<0.01,compared with the norm group of the 3rd week2.2 肝郁脾虚模型大鼠恢复一周的甲状腺轴的变化及柴疏四君汤的作用结果见表 2。从表 2 可以看出，与正常对照组相比，模型组大鼠血清 TSH、T3、T4 均 显著降低 (P<0.05 或 P<0.01)；与模型组相比，柴疏四君汤组大鼠血清 TSH、T3、T4 均显著 升高(P<0.05 或 P<0.01)。表 2 肝郁脾虚模型恢复一周大鼠甲状腺轴的变化及柴疏四君汤的作用（ x±S）groupNTSH(ulU/ml)T3(ng/ml)T4(ng/ml)norm1011.32±1.310.83±0.1351.17±5.60GYPX109.77±1.420.66±0.1040.50±7.65CSD1011.40±1.240.90±0.2149.45±7.97P<0.05,P<0.01, compared with the norm group of the 4th week; P<0.05,P<0.01, compared with theGYPX group of the 4th week3. 讨论本研究根据中医“情怀不畅，肝失疏泄”、“饮食劳倦伤脾”的理论，运用束缚+疲劳+饮食 失调因素复制中医肝郁脾虚证模型，该模型涉及到现代情绪心理和躯体疲劳应激。曾有研究 发现束缚应激状态下的大鼠血浆中 T3、T4 明显下降2，脾虚时下丘脑、垂体、甲状腺合成、 分泌及调控功能低下3。提示中医“肝主疏泄”和“脾主运化”与现代神经、内分泌及体内物质 代谢功能有关。机体存在着对甲状腺功能精密的调节机制，主要通过下丘脑室旁核 TRH 的神经元释放 TRH 来调节垂体促甲状腺激素(TSH)，进一步影响甲状腺分泌功能以维持血中 T3、T4。血 液甲状腺激素浓度变化又可反馈调节下丘脑 TRH 和垂体 TSH 的分泌，从而构成所谓的下丘 脑一垂体一甲状腺轴（HPTA）的自动控制环路，以维持机体内 TRH、TSH 和甲状腺激素三 者水平的相对恒定。体内甲状腺外池中的全部 T4 和 30%的 T3 由甲状腺分泌，70%的 T3 由 T4 在 5脱碘酶的作用下转化而来，它们在血循环中绝大部分与血浆蛋白结合，仅少数处 于游离状态(FT3、FT4) 而发挥生理作用。由于血中 T3 代谢快，其相对活性为 T4 的 34 倍， 因此其浓度的变化较之于 T4 更为重要4。本实验观察到，造模第三周模型大鼠血清 TSH 和 T3 显著降低，T4 显著升高。结果表 明，模型大鼠呈现甲状腺分泌 T4 功能亢进，大量 T4 不能转化为 T3，血中升高的 T4 通过 其负反馈作用使下丘脑 TSH 的分泌抑制。模型大鼠自然恢复一周后，其血清 TSH、T3 不仅 未能及时恢复，且升高的 T4 也出现了显著降低，表明在甲状腺分泌功能减弱的同时，下丘 脑 TSH 分泌抑制并没有因血中 T3 及 T4 降低而解除。提示肝郁脾虚证可能存在 HPTA 功能 减退以及 HPTA 的上位（垂体或下丘脑）的失调。该模型中 HPTA 轴的受抑及甲状腺功能减 低可直接引起体内物质吸收和能量代谢功能的减退，这可能是模型大鼠出现食少便溏、活动 减少，体重降低、神疲喜睡等表现的重要原因。肝脏是甲状腺素代谢、灭活和排泄的重要脏器，是 T4 向 T3 转化的场所，在影响甲状 腺内分泌中占重要地位5,6。先前的研究曾发现该肝郁脾虚模型伴有一定程度的肝细胞水肿 及气球样变的病理改变，推测 T4 转化受阻可能是肝脏病变及其功能减低的结果。目前了解 到，许多细胞因子参与甲状腺轴功能的调节，有研究发现 IL-1 可刺激垂体分泌 TSH7，生 长抑素（SS）则抑制 TSH 的合成和释放，IL-2 抑制甲状腺功能8，曾发现该模型大鼠血清 IL-1，IL-2、SS 出现显著升高1,9,10，推测 HPTA 轴的受抑可能与其多环节的参与作用有关。本实验还观察到，柴疏四君汤灌胃一周可使模型大鼠降低的血清 TSH、T3、T4 升高并 使其接近正常，表明其有促进模型大鼠 HPTA 轴调节功能恢复的作用，推测柴疏四君汤可能 是通过解除下丘脑 TSH 分泌抑制来恢复 HPT 轴的正常功能，至于其作用的确切部位（垂体 或下丘脑）及机制，有待于进一步研究。参考文献1 李艳彦，谢鸣，陈禹等一种运用复合病因造模法复制大鼠肝郁脾虚证模型的研究J中国中医基础 医学杂志，2006，12（6）：4394422 刘振秀，王秀荣促甲状腺激素释放激素对抗大鼠束缚应激的作用J中国医学科学院学报，1992，14（2）：1183 夏天，李刚，王宗仁，等脾虚大鼠下丘脑垂体甲状腺轴功能的变化J安徽中医学院学报，2001，20（4）：424 曾民德，萧树东主编肝脏与内分泌M北京：人民卫生出版社，1995，9499 5 罗振麟肝脏与甲状腺J临床肝胆病杂志，1986，2（2）：796 钟永亮，唐容德肝主疏泄与甲亢病机的关系初探J湖南中医学院学报，1994，14（3）：147 龚守良，赵勇，刘淑春IL-1 对垂体促性腺细胞及甲状腺轴分泌功能的短期效应J白求恩医科大学 学报，1997，23（1）：78 王世鄂，周瑞祥，陈奕权，等白细胞介素 2 对大鼠垂体-甲状腺轴的影响J中国免疫学杂志，1998，14：190