铵态氮实验步骤

6.1.3 土壤中铵态氮的测定土壤中铵态氮的测定 6.1.3.1 靛酚蓝比色法靛酚蓝比色法 1.方法选择方法选择 测定土壤铵态氮，主要有直接蒸馏法、浸提后测定法和扩散吸收法等。直接蒸馏法是 在氧化镁存在下直接蒸馏土壤，但此法在弱碱蒸馏时仍可能使一些简单的有机氮微弱水解 成氨气蒸出，易使结果偏高。浸提后测定法多采用中性盐(硫酸钾、氯化钾、氯化钠等)浸 提土壤，土壤溶液中的 NH4+，可选用蒸馏、比色、或氨电极法测定。浸提蒸馏法的操作简 便，易于控制条件，适合于 NH4+含量较多的土壤。氨气敏电极法测定土壤中的 NH4+，操 作简便，快速，灵敏度高，重复性和测定范围后很好，但仪器的质量必须可靠。在这里我 们详细介绍浸提比色法和扩散吸收法。比色法有多种，这里介绍靛酚蓝比色法。靛酚蓝比 色法的灵敏度和准确度高，适用于大批样品自动化分析（本法测定范围 0.050.5mg·L-1铵 态氮） 。扩散吸收法利用氧化镁水悬液的弱碱性，交换吸附在土壤胶体上的铵态氮，不致破 坏土壤矿质部分。此法适用于各种类型土壤样品的测定，特别是对于还原性强的沼泽土和 潜育土，可省去消除还原性物质的手续，同时，由于扩散吸收法不须蒸馏装置，设备简单， 适用于大批样品的分析（本法测定范围 50300µg 铵态氮） 。 2.基本原理基本原理土壤浸出液中的 NH4+在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚作用，生成水溶性染料靛酚蓝， 溶液的蓝色很稳定，在 NH4+浓度为 0.050.5mg·L-1范围内，其深浅与 NH4+含量成正比。3.主要仪器及试剂主要仪器及试剂 主要仪器：振荡机；分光光度计。 主要试剂： （1）2mol·L-1KCl 溶液：称取 149.1g 氯化钾（KCl，化学纯）溶于水中，稀释至 1L。 （2）苯酚溶液：称取 10g 苯酚（C6H5OH，化学纯）和 100mg 硝基铁氰化钠（硝普钠） Na2Fe（CN）5NO·2H2O稀释至 1L【1】。此试剂不稳定，须贮于棕色瓶中，在 4冰箱中 保存。 （3）次氯酸钠碱性溶液：称取 10g 氢氧化钠（NaOH，化学纯），7.06g 磷酸氢二钠 （Na2HPO4·7H2O，化学纯），31.8g 磷酸钠（Na3PO4·12H2O，化学纯）和 52.5g·L-1次氯 酸钠（NaOCl，化学纯，即含 5%有效氯的漂白粉溶液）10mL 溶于水中，稀释至 1L，贮于 棕色瓶中，在 4冰箱中保存。 （4）掩蔽剂：将 400g·L-1的酒石酸钾钠（KNaC4H4O6·4H2O，化学纯）与 100g·L-1的 EDTA 二钠盐（C10H14O8N2Na2，化学纯）溶液等体积混合。每 100mL 混合液中加入 0.5mL 10 mol·L-1氢氧化钠，即得清亮的掩蔽剂溶液。 （5）5µg·mL-1铵态氮（NH4+-N）标准溶液：称取 0.4717g 干燥的硫酸铵(NH4)2SO4，分析 纯溶于水中，定容至 1L，制备成含铵态氮（N）100µg·mL 1的贮存溶液；使用前将其加水稀释 20 倍，即配制成含铵态氮（N）5µg·mL 1的标准溶液备用。 4.操作步骤操作步骤 （1）NH4+浸提【2】：称取 10.00g 新鲜土样（若是风干土，过 10 号筛）准确到 0.01g【3】，置于 200mL 三 角瓶中，加入 2mol·L-1氯化钾溶液 100mL，塞紧塞子，在振荡机上振荡 1h。取出静置过滤， 待土壤氯化钾悬浊液澄清后，吸取一定量上层清液进行分析。如果不能在 24h 内进行， 用滤纸过滤悬浊液，将滤液储存在冰箱中备用。同时测定土壤水分含量。 （2）比色： 吸取土壤浸出液 2mL10mL（含 NH4+-N 2µg25µg）放入 50mL 容量瓶中，用氯化钾 溶液补充至 10mL，用水稀释至 30mL，然后依次加入苯酚溶液 5mL 和次氯酸钠碱性溶液 5mL，摇匀。在室温（20左右【4】）下放置 1h 后【5】，加掩蔽剂 1mL 以溶解可能产 生的沉淀物，然后用水定容至刻度。2h 后，用 1cm 比色槽在 625nm 波长处进行比色，读 取吸光度。同时做两个试剂空白试验。 （3）工作曲线的绘制：分别吸取 0，0.5，1，2，3，4，5mL NH4+-N 标准液于 50mL 容量 瓶中，各加 10mL 氯化钠溶液，同（2）步骤进行比色测定。得到浓度为 0，0.05，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5 mg·L-1 NH4+-N 溶液。 5.结果计算结果计算W（N）2KmtsVc 式中： W（N）土壤中 NH4+-N 的含量，mg·kg-1； c显色液铵态氮的质量浓度，µg·mL 1； V显色液的体积，mL；ts分取倍数，ts； 102100 mLmL）（测定时吸取待测液体积）待测液体积（m样品质量，g； K2土样换算为烘干土样的水分换算系数。 6.注意事项注意事项【1】硝普钠是显色反应的催化剂，能加速显色，并增强蓝色及颜色的稳定性，但硝普钠是 剧毒药品，使用时应注意安全。【2】靛酚蓝比色法测定 NH4+，也可用测定 NO3-时的土壤浸出液，从而节省操作步骤，测 定结果可能稍有差异。【3】土样经风干或烘干后可能引起 NH4+含量的变化，所以，称样以新鲜土样为好。若以 干土计算，应同时测定含水量后换算。【4】显色后在 20左右放置 1h，再加入掩蔽剂。过早加入会使显色反应很慢，蓝色偏弱； 加入过晚，则生成的氢氧化物沉淀可能老化而不易溶解。【5】显色过程中，掩蔽剂应在显色后加入。如加入过早，会使显色反应很慢，蓝色偏低； 加入过晚，则生成的氢氧化物沉淀可能老化而不以溶解。在 20放置 1h，即可加入掩蔽剂。