黄柏中黄连素的提取

- 1 -黄柏中黄连素的提取摘要摘要：报道了黄柏中黄连素的提取方法，用川黄柏中的荥经6年生的优质黄柏皮 作为材料。通过乙醇回流提取、减压回收溶剂、结晶得出黄连素的粗品，重结晶 得黄连素的精品。收率7.42%,含量为98.4%。关键词：关键词：黄柏; 黄连素; 提取; 含量测定Abstract:CorkwerereportedBerberineextractionmethod,thePhellodendronofYingjingsix- year-old Huang Baipi quality as a material. By ethanol extraction and solvent recovery decompression, drawn berberine crystallization of crude goods, recrystallization in berberine excellent. Yield of 7.42%, the content of 98.4%。Key words：Cork，Berberine，Extraction，Determination1 1. 前言前言1.1 天然药用植物植物中含有很多次生代谢物，是药物天然宝库。世界有 75%的人依赖从植物中获得的药物，除化学合成之外，人类大量依赖植物次生代谢物作为药物。药用植物是中药的主要来源，我国的传统中草药已有数千年的历史，是世界上首屈一指的中草药生产和应用大国。可用于治疗疾病的药用植物有 11146 种，其中有 280 种可以通过人工栽培获得原料，其余种类全部来源于野生资源。与化学合成相比，植物药具有低毒性.天然性.成本低等特点，植物产生的药物在微生物中很少发现，且结构复杂.多样，合成难度大.耗时长。并且天然的植物药在药用等方面比较安全，比化学合成药物的副作用要小。1.2 黄柏药用价值黄柏别名黄薜、薜木、黄坡椤，为芸香科植物。据有关资料介绍，黄柏内皮性味苦寒，含有黄柏酮、甾醇类化合物，是清热解毒、燥湿泻火的良药，可治疗阴虚火旺、骨蒸盗汗、风湿性关节炎、细菌性痢疾、黄疸等疾病。我国利用黄柏皮治病已有千年的历史，因此，黄柏从古至今就为患者和医家所宠爱。距今2000余年的我国第一部医学典籍神农本草经将其列为上品，名医别录则有“根主心腹百病，安魂魄，不饥渴，久服轻身，延年通神”的说法。龙城录则称黄蘖是“神药”，能“治三虫”。- 2 -1.3 黄连素的药理4黄连素抗菌作用强，性质稳定，对脑膜炎球菌、伤寒杆菌、白喉杆菌、等有较强的抑制和杀菌作用，对流感病毒、阿米巴原虫.钩端螺旋体及某些皮肤真菌也有一定的抑制作用，可用于眼结膜炎，百日咳、肺结核(与其它抗结核药配伍)的治疗；研碎和香油外抹还可治疗化脓性中耳炎、皮肤“黄水疮”等。黄连素对多种革兰氏阳性菌和阴性菌有抑菌作用，临床上主要用于清热解毒和治疗肠道感染。近年来在其药理作用和临床研究中发现，黄连素具有多种非抗菌作用，动物实验及临床疗效观察发现，黄连素还具有抗心律失常、抗心力衰竭以及降低血压、降低血粘度的作用。1.4 黄连素化学结构式黄连素(又名小檗碱)是从黄柏等植物中提取出的一种异喹啉类生物碱，黄连素是黄色针状体，微溶于水和乙醇，较易溶于热水和热乙醇中，几乎不溶于乙醚。黄连素的结构式以较稳定的季铵碱为主，其结构式为：在自然界黄连素多以季铵盐的形式存在，其盐酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、酸盐均难溶于水，易溶于热水，且各种盐的纯化都比较容易。2.2. 材料及试剂仪器材料及试剂仪器2.1 本次实验所用原材料为；荥经 6 年生的优质黄柏皮黄连素的对照品由指导老师蒲老师提供。2.2 实验仪器及试剂：由学校生物技术实验室提供。试剂：80%乙醇，丙酮(A. R) ，30%HCl, 1%醋酸仪器: 粉碎机、电热恒温浴锅、SHB - 3 行循环水式多用真空泵、旋转蒸发器RE- 3 -52A、紫外分光光度计、移液器、圆底烧瓶、三角瓶、电子天平等。3.3. 方法、步骤方法、步骤3.1 黄连素的提取称取50g中药黄柏切碎，研磨成粉状，放入250ml圆底烧瓶中。加入乙醇的总量为500ml，重复三次提取，每次加入的量的比例为4：3：3，每次提取时间的比例为2：2：1。第一次在装有黄柏粉末的250ml圆底烧瓶中加入80%乙醇200ml装上回流冷凝管，80热水浴加热回流2h，抽滤得滤液。第二次加入80%乙醇150ml装上回流冷凝管，80热水浴加热回流2h，抽滤得滤液。第三次加入80%乙醇150ml装上回流冷凝管，80热水浴加热回流1h，抽滤得滤液。合并三次所得滤液，在减压下情况下蒸出乙醇(回收)直到棕红色糖浆状。3.2 结晶再加入1%醋酸(约3040m1)加热溶解，抽滤以除去不溶物，然后于溶液中滴加浓盐酸至溶液浑浊为止，放置冷却，即有黄色针状体的黄连素盐酸盐析出，抽滤，结晶用冰水洗涤两次，再用丙酮洗涤一次，得粗品称重。3.3 黄连素的重结晶将黄连素粗品加蒸馏水加热煮沸至刚好溶解， 用石灰乳调节PH为8.59.8，稍冷后滤去杂质， 并继续将滤液放置冷却酸化， 即有针状晶体黄连素即析出， 过滤，将结晶体在5060下烘干。即得到黄连素的精品。3.4 工艺流程回流提取黄连粉末抽滤减压蒸馏洗涤滤渣结晶黄连素 （精品）抽滤 重结晶回流乙醇- 4 -3.5 黄连素的鉴定反应9取所得黄连素约50mg，加蒸馏水5ml，缓慢加热使之溶解，加NaOH溶液2滴，显橙色，溶液经放冷后，过滤，滤液中加丙酮数滴，即产生黄色的浑浊或沉淀。与对照品相同。取所得黄连素少许，加硫酸2ml温热至溶解，再加漂白粉少许，振荡后即产生樱桃红色。与对照品相同。于所得黄连素的水溶液中，滴加浓硝酸数滴，溶液产生黄绿色硝酸小蘖碱沉淀。与对照品相同。3.6 黄连素含量的测定3.6.1 黄连素标准溶液的配制8精密称取黄连素对照品20.00mg于10Oml容量瓶中，加量无水乙醇在水浴上加热溶解。放冷至室温，用无水乙醇定容至刻度再精密吸取1.OOmL上述溶液加入10mL容量瓶中用无水乙醇定容至刻度。摇匀，备用。其溶液浓度为0.020mg/mL。3.6.2 标准曲线的绘制 分别精密量取浓度为0.020mg/mL的黄连素标准溶液1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL，置于5个10mL容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，混匀标准溶液的浓度分别为2.0、4.0、6.0、8.0、l0.0 X 10-3mg/mL，以乙醇为空白，用紫外可见分光光度计进行扫描，测得在350nm为最大吸光度。以吸光度对浓度进行回归计算，得回归方程(y=0.055x+0.096， r=0.9987)测定结果见表一,黄连素标准曲线图如图1示。表一表一 黄连素对照品浓度 吸光度对照表编号 浓度（1 X 10-3mgml）（n=2） 吸光度1 0 0.0002 2 0.1263 4 0.2254 6 0.327滤液- 5 -5 8 0.4386 10 0.5513.6.3 样品溶液的配制样品溶液的浓度配制同标准溶液的配制一样，浓度为0.020mg/ml。测得样品的吸光度见表二。根据样品的吸光度和直线回归方程得出样品的含量。表二 四个样品的吸光度样品 吸光度 含量1 0.308 93.4%2 0.324 95.8%3 0.336 97.2%4 0.357 98.4%00.10.20.30.40.50.6024681012浓度吸光度图 1 黄连素标准曲线图4 4 结果与分析讨论结果与分析讨论4.1 结果经过提取后的粗品称重有4.34克。经过精制后有3.71克。其黄柏中的黄连素的收率7.42%,含量为98.4%4.2 分析讨论4.2.1 原料的选择3- 6 -中国药典2005年版第一部“黄柏”含量测定项下规定，按干燥品计算。含小檗碱以盐酸小檗碱(C20HISCIN04)计，不得少于3.O。不同产地、生长环境及生长年限均是影响黄柏主要成分含量的因素。根据徐敏 万德光所发表的不同产地和生长年限川黄柏中小檗碱的含量测定所记载：荥经产的黄柏中小檗碱含量明高于其他产地黄柏中的含量，荥经独特的地理环境和气候以及药农丰富的种植经验，形成了荥经川黄柏的“肉厚色深”优良品质和独特的道地性。传统采收一般选用15年以上的黄柏剥皮作药用。不同生长年限黄柏小檗碱含量的差异较大，普遍认为采集6至8年生黄柏人药，小檗碱含量既完全符合中国药典的规定又可以大大缩短药材的采收周期。民间一般采用砍树剥皮的方式采收，为了保护药用植物资源，建议采用局部剥皮法逐年轮换更替。故本次实验所用材料为：荥经6年生的优质黄柏皮，大概含量为8%4.2.2 方法的选择提取黄连素常用的方法有酸提法、碱提取法、醇提法，还有目前研究较多的超声提取法等。选用酸提法从黄柏中提取黄连素，制备时滤液体积较大，需加人大量的固体工业食盐处理。选用碱提取法从黄柏中提取黄连素，也和酸提法有同样的问题，虽操作不用加热回流，比酸提法简单，但结果不及酸提法。而选用醇提法从黄柏中提取黄连素，方法简单可行，虽然试剂用量较大但是乙醇便于回收。适合工业化生产。超声提取法虽能明显缩短时间，但需特殊设备。从生产成本、提取方法的可操作性等方面考虑，我们选择传统乙醇提取法的从黄柏中提取黄连素，并对其工艺进行了优化。故本次实验所用方法为：乙醇提取法5 利用及未来展望利用黄柏提取的黄连素是一种纯天然的药物。是各大制药厂生产盐酸黄连素片，复方黄连素片、硫酸黄连素针剂等中成药的主要原料，由于黄连素成品药的抗菌消炎效果好，无副作用，是当前和今后任何一种抗菌消炎药不可代替的中成药。目前国内许多制药厂对黄连素原料的需求量很大，仅河南、云南、成都、重庆、太原、广汉、绵阳等十多家制药厂每年需求量就在100T以上，我省生产企业的产量还不能满足省内制药厂的需求。由于我省是川黄柏的主要产地，尤其是遵义地区的湄潭、凤岗、余庆、正安、绥阳- 7 -和黔东南州的凯里、三都等市县近年来利用省、地的各种优惠政策和地理气候等条件大搞非耕地开发。种植了上千万平方米的黄柏药材、现都已长成商品药材林，每年可收购的黄柏皮就有近千吨，如何能解决黄柏皮的加工、储存、运输、销售等一系列困难，使资源优势转化为产品优势，经济优势，培育新的财政税源，增加农民收人，使非耕地开发与地方经济的发展齐头并进，这是一个非常重要的问题，因此，立足于我省的资源优势，以市场为导向，将黄柏皮进一步深加工。开发生产盐酸黄连素无疑是解决这一问题的一个途径。- 8 -参考文献参考文献1 冀春茹，王浴铭中药化学实验技术与实验郑州：河南科技出版社 2 游永亮常用小化工产品生产技术广州：广东科技出版社 3 中华人民共和国药典编写组中华人民共和国药典北京：中国医药出版社 4 耿东升，刘发，刘学彬，等硫酸黄连素对免疫系统的影响中国药理学通报，1996，12(6)： 536539 5 杨云，冯卫生中药化学成分提取分离手册M北京：中国中医药出版社，1998300 6 张学兰，张兆旺，徐霞，等黄柏SBE法与WE法的成分比较J中国中药杂志，1999，24(1o)： 6006O1 7 刘圣，唐丽琴，陈礼明，等正交试验优选黄柏中小檗碱提取工