超高效液相色谱-串联质谱法测定不同茶叶中草甘膦、氨甲基膦酸及草铵膦的残留
超高效液相色谱-串联质谱法测定不同茶叶中草甘膦、氨甲基膦酸及草铵膦的残留诸力;陈红平;周苏娟;王川丕;刘【摘 要】建立了超高效液相色谱-串联质谱同时快速测定不同茶叶中草甘膦、氨甲基膦酸及草铵膦的方法。样品用 0.05 mol/L NaOH 提取,并以 HCl 调整 pH 值, Oasis HLB 小柱净化除杂,氯甲酸-9-芴基甲酯( FMOC-Cl)柱前衍生反响后,超高效液相色谱-串联质谱法测定。本方法在 51000g/L 浓度范围内,不同茶叶基质中草甘膦、氨甲基膦酸、草铵膦线性关系良好(R2>0.99)。在 0.1,0.4 和 4 mg/kg 添加水平下,不同茶叶(绿茶、红茶、乌龙茶、普洱茶)中 3 种化合物回收率均介于72.1%109.9%之间,相对标准偏差 RSD 在 0.5%9.8%之间(n=6),方法定量限(LOQ)在 0.030.08 mg/kg 之间(S/N=10)。本方法稳定,简便,灵敏,能够满足检测需求。%An efficient technique for the determination of multiclass pesticide residues ( glyphosate, aminomethyl phosphonic acid ( AMPA) and glufosinate) in four kinds of tea ( green tea, black tea, Oolong tea and Puer tea) was developed based on ultra performance liquid chromatography- tandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS). Samples were extracted with 0. 05 mol/L NaOH solution, regulated pH value with HCl, followed by purification by Oasis HLB column, and then precolumn-derived with 9- fluorenylmethyl chloroformate ( FMOC-CL ) in borate buffer. All pesticide residues studied showed good linearity with correlation coefficient ( R2 ) greater than 0. 99 in the concentration range of 5-1000 g/L. Limits of quantitation (LOQs) of three pesticide compounds ranged from 0. 03 to 0. 08 mg/kg (S/N=10). Tea samples spiked with 0 . 1 , 0 . 4 and 4 mg/kgshowed the recovery ranging from 72 . 1% to 109 . 9%, and RSDs from 0. 5%to 9. 8% (n=6). In addition, the validated method was applied to commercial samples, and all the detections were confirmed by acquiring transitions for each pesticide in samples.【期刊名称】分析化学【年(卷),期】2023(000)002【总页数】6 页(P271-276)【关键词】茶叶;草甘膦;氨甲基膦酸;草铵膦;超高效液相色谱-串联质谱【作 者】诸力;陈红平;周苏娟;王川丕;刘【作者单位】中国农业科学院茶叶争论所 农业部茶叶产品质量安全风险评估试验室 杭州，杭州 310008;中国农业科学院茶叶争论所 农业部茶叶产品质量安全风险评估试验室 杭州，杭州 310008;中国农业科学院茶叶争论所 农业部茶叶产品质量安全风险评估试验室 杭州，杭州 310008;中国农业科学院茶叶争论所 农业部茶叶产品质量安全风险评估试验室 杭州，杭州 310008;中国农业科学院茶叶争论所 农业部茶叶产品质量安全风险评估试验室 杭州，杭州 310008【正文语种】中 文1 引言草甘膦(Glyphosate)作为无选择类除草剂，以其高效、低毒、廉价等特性被广泛运用于全球各个农业和非农业领域1。草铵膦(Glufosinate)可以有效去除绝大局部耐草甘膦杂草，且具有环保易降解等特点而受到各界青睐。随着草甘膦、草铵膦使用频率不断上升，特别是在茶园中的运用日益剧增，其残留问题越来越受到关注，在 2023 欧盟农残标准-茶叶中规定，草甘膦和草铵膦最高残留限量(MRL)值分别为 2.0 和 0.1 mg/kg。草甘膦及其主要降解产物氨甲基膦酸(Aminomethyl phosphonic acid，AMPA)和草铵膦之间化学构造相像，都具有易溶于水，难溶于一般有机溶剂，难挥发，缺少发色和荧光基团等特性，因此运用常规方法进展检测比较困难。目前，草甘膦检测方法有色谱法(GC2、LC3，4、IC5，6)、分光光度法7、质谱法(GC-MS8、LC-MSMS9 11)及电感耦合等离子光谱法(ICP)12等，但大局部方法存在灵敏度低、操作程序繁琐、有机试剂污染严峻等缺点，也难以直接运用于茶叶农残检测领域。茶叶作为有典型基质效应的经济作物，其草甘膦和草铵膦检测文献报道甚少。食品安全国家标准-食品中农药最大残留限量 GB2763-2023 规定，茶叶中草甘膦指定检测方法 SN/T 1923-2023 最低定量限为 0.1mg/kg，而草铵膦并未指定相应检测标准。本试验通过“碱提酸沉”pH 值调控及 Oasis HLB 小柱净化后 FMOC-Cl 衍生前处理，承受可编程多反响监测(Scheduled MRM)，建立了一种超高效液相色谱-串联质谱测定不同茶叶(绿茶、红茶、乌龙茶、普洱茶)中草甘膦、氨甲基膦酸及草铵膦的方法。本方法稳定、简便、灵敏，可满足各类茶叶检测需求。2 试验局部2.1 仪器与试剂API 3200 型串联三重四极杆质谱(美国 AB 公司);Waters ACQUITY 超高效液相色谱仪(Waters 公司);Mill-Q 去离子水发生器(美国 Millipore 公司);Sigma 3-16L 离心机(德国 Sigma 公司);Oasis HLB 固相萃取柱(3 mL/60 mg，Waters 公司)。草甘膦、草铵膦、氨甲基膦酸标准样品(纯度98.0%，德国 Dr.Ehrenstorfer 公 司);氯甲酸-9-芴基甲酯(FMOC-Cl，不低于 98.0%，百灵威公司);甲醇、乙腈(色谱纯，百灵威公司);甲酸铵(99.9%，德国 Sigma 公司);甲酸(95%，德国 Sigma 公司);KOH(分析纯，杭州萧山化学试剂厂);HCl(36% 38%，优级纯，江苏永华精细化学品);硼酸钠(Na2B4O7·10H2O，99.5%，太仓美达试剂有限公 司);5%(V/V)硼酸盐缓冲溶液(pH=9)。茶叶样品来源于浙江省各茶叶市场及各大超市。2.2 色谱和质谱条件色谱柱:Waters ACQUITY HSS T3 (100 mm × 2.1 mm，1.8 m);流淌相:含 0.1% 甲酸-1 mmol/L 甲酸铵溶液(流淌相 A)和甲醇溶液(流淌相 B);梯度洗脱程序:0 1 min，10% B;1 6 min，10% 100% B;6 6.1 min，100% 10% B;6.1 7.0 min，10% B。流速:0.3 mL/min;进样量:10.0 L;柱温:40 ;运行时间:7 min。离子源:电喷雾离子源(ESI)，温度 500 ，电压 5500 V;扫描方式:正离子模式;雾化气 GS1 压力:50 psi;雾化气 GS2 压力:50 psi;定性与定量离子对、去簇电压(DP)、碰撞能量(CE)等参数见表 1。表 1 草甘膦、草铵膦及氨甲基膦酸衍生物质谱条件参数 Table 1 MS conditions for derivatizations of glyphosate，glufosinate and aminomethyl phosphonic acid (AMPA)FMOC:9-Fluorenylmethyl chloroformate;* : 定量离子对(Quantitative ion pair) 。化合物 Compound 保存时间 Retention time(min) 离子对 Ion pair(m/z)去簇电压 Declustering potential(V)碰撞能量 Collosionenergy(eV)14 氨甲基膦酸衍生物 AMPA-FMOC5.5334/179.1* ，334/112.122， 3024，19 草铵膦衍生物 Glufosinate-FMOC5.6404/136.1* ，404/208.230，2729，16 草甘膦衍生物 Glyphosate -FMOC5.3392/87.9* ，392/214.127，2728，2.3 样品制备提取:称取 2.0 g 茶叶试样于 50mL 离心管，参加 0.05 mol/L KOH 溶液 15 mL，摇匀静置 20 min。经 5000 r/min 离心 10 min，过滤，取滤液 2 mL 至 5 mL 离心管，参加 5 mol/L HCl 溶液 20 L，振荡均匀后经 5000 r/min 离心 10 min， 得到上清液。净化:取 1 mL 上清液至 Oasis HLB(3 mL/60 mg)小柱(小柱活化:先加 2 mL 甲醇淋洗，再加 2 mL 水活化)，经过柱后，用 5 mL 离心管接取净化流出液。衍生:净化液中参加 0.2 mL 硼酸钠缓冲溶液，摇匀后再参加 0.1 mL 10 g/L FMOC-Cl 衍生试剂，振荡均匀后静置 2 h。将衍生后液体试样 10000 r/min 离心10 min，经 0.22 m 水系滤膜，供液相色谱-串联质谱分析。2.4 标准曲线制作分别称取 3 种标准品各 0.05 g，用水溶解并定容至 50 mL 塑料容量瓶，分别配制成 1000 mg/L 标准溶液，4 下保存待用。标准曲线的配制:承受空白茶叶(绿茶、红茶、乌龙茶、普洱茶)，经 2.3 节提取净化， 分别配制成 6 个不同浓度浓度(5 1000 g/L)的基质标样，现配现用。2.5 标准参加回收试验称取不同茶叶空白样 2 g，分别添加当量为 0.1、0.4 和 4.0 mg/kg 混合标准溶液， 每个浓度水平重复 6 次，经 2.3 节提取净化处理，承受各茶叶基质标准曲线进展外标法定量，计算回收率、相对标准偏差和定量限。3 结果与争论3.1 质谱和色谱条件优化分别取草甘膦、草铵膦及氨甲基膦酸浓度为 8 mg/L 标样进展衍生，用于衍生化合物质谱条件优化。本争论承受 ESI+模式，选择各准分子离子M +H+作为母离子，进展二级质谱优化，参数包括电喷雾电压、碰撞电压(CE)、去簇电压(DP)、电离温度等，优化结果见表 1。承受可编程多反响监测(Sched-uled MRM， SMRM)，该模式可以不分时间段同时进展多种残留农药检测，极大提高了 MRM检测通量，有效改善峰形，提高重现性13。争论说明，3 种衍生化合物在 HSS T3
