二妙丸浓缩丸的制备以及有效成分的提取

二妙丸浓缩丸的制备与分析学院：食品药品学院专业： 12 药剂指导老师：时维静小组成员：许咏、宋梦、杨梦钰、徐强强、章磊二妙丸浓缩丸的制备与分析引言：二妙丸系元代丹溪心法中，由黄柏、苍术两味药组成，原为散剂，世医得效方中又名苍术散，后由散剂改为水丸剂。具有清热燥湿的功效，用于湿热下注，足膝红肿热痛，下肢丹毒，阴囊湿痒。苍术为菊科植物茅苍术Atractylodes.lancea (Thun 檗.) DC.或北苍术 Atractylodes chinensis (DC.) Koidz. 的干燥根茎。味甘、苦，性温，归脾、肾、肝经。其有效成分为挥发油，具有燥湿健脾、祛风散寒、明目的功效。主要用于脘腹胀满，泄泻，食欲不振，水肿，脚气痿痹，风寒感冒，雀目夜盲等症。现代药理学研究证明，苍术具有，具有抗溃疡、 抗心率失常、 降血压、利尿、保肝、抗炎、抗菌等作用。 黄柏苦寒，为芸香科植物黄檗或者黄皮书的树皮，黄柏别名为檗皮，檗木, 黄檗，其有效成分为小檗碱，具有治湿热痢疾，泄泻，黄疸，梦遗，淋虫，带下等功效。本试验一改传统二妙丸制法改制为浓缩水丸，并从：二妙丸浓缩丸的制备工艺； 二妙丸浓缩丸的的鉴别、含量测定以及与传统二妙丸的比较； 二妙丸浓缩丸的质量检测；二妙丸浓缩丸中有效成分的提取工艺四大模块展开。一、实验材料与仪器设备1、实验试药：炒苍术（200g） 炒黄柏（200g） 、 盐酸小檗碱标准品、 乙醇（80% ） 、硫酸、稀盐酸、蒸馏水，乙醚等2、实验仪器设备：筛网（ 100目）500ml 的短颈圆底烧瓶：为水分测定管；直形冷凝管，刮板式蒸发器、玻璃棒、烧杯电炉、渗漉装置、天平、不锈钢罐、粉碎机、片剂崩解仪、移液管、紫外分光光度计、索氏提取器、过滤装置、滤纸、抽滤装置等。二、实验内容（一）二妙丸浓缩丸的制备工艺浓缩丸系指药材或者部分药材经提取的清膏或者浸膏，与其余药材粉末或者适宜的辅料，用水、蜂蜜或者蜜水为粘合剂制成的丸剂。浓缩丸的制备方法有两种， 即泛制法和塑制法， 基于本试验， 将采用泛制法制成水丸型浓缩丸，具体方法如下：1 、药材处理（1）粉碎部分：苍术。将苍术（炒）粉碎，过筛（100 目），得细粉。这部分量应占整个处方量的30%-40% ，作为起模子和吸收浸膏之用。（2）提取部分：黄柏（炒）提取方法：热浸渍法（ 80% 热乙醇）将黄柏粉碎，置有盖容器中，加入6 倍量热乙醇于常温下浸渍，放置24 小时或更长时间，滤过，药渣再加入新溶剂，如此反复24次，最后压榨药渣，滤过即可。2、提取液浓缩为浸膏：提取液浓缩成浸膏一般为薄膜蒸发和减压浓缩，浓缩至稠浸膏。相对密度在1.35-1.40之间薄膜蒸发（使液体在蒸发时形成薄膜，增加气化表面，进行蒸发的方法，薄膜具有极大的表面，热传播快而均匀。方法：（1） 使液膜快速流动加热面（液面厚度在0.20.5mm ）（2） 使药液剧烈沸腾产生大量泡沫，以泡沫内外表面为蒸发面进行蒸发。3、浸膏粉的制备将浓缩好的浸膏与留作吸收浸膏用的药粉 （占整个粉碎量的2/3 左右） 混合均匀，放减压干燥箱中60 摄氏度下干燥，然后再粉碎成细粉（大约100 目），作为泛丸用。4、起模从粉碎的药粉中留出1/3 粘性适中的药粉，用蒸馏水起模。5、泛丸在起好的模子上用浸膏粉泛丸，用蒸馏水作为粘合剂。（二）二妙丸的鉴别检查、含量测定以及与传统二妙丸的比较1、鉴别、（1）取本品，置显微镜下观察：草酸钙针晶细小，长1032m ，不规则地充塞于薄壁细胞中（苍术）。纤维束鲜黄色，周围细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维，含晶细胞壁木化增厚（黄柏）。（2）取本品 2g，研细，加乙醚 15ml，超声处理 15 分钟，滤过，滤液挥去乙醚，残渣加乙酸乙酯1ml 使溶解，作为供试品溶液。另取苍术对照药材0.25g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（2010年版药典一部附录檗）试验，吸取上述两种溶液各5l ，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（ 6090）乙酸乙酯（ 10：1）为展开剂，展开，展距4cm ，取出，晾干，再以环己烷为展开剂，展开，展距7cm ，取出，晾干，喷以5% 对二甲氨基苯甲醛的10% 硫酸乙醇溶液，在80加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。（3）取本品 0.1g ，研碎，加甲醇 5ml，加热回流 15 分钟，滤过，滤液补加甲醇使成 5ml，作为供试品溶液。另取黄柏对照药材0.1g，同法制成对照药材溶液。再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml 含 0.5mg 的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（ 2010 年版药典一部附录檗）试验，吸取上述三种溶液各 1l ，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯乙酸乙酯异丙醇甲醇浓氨试液（ 12：6：3：3：1）为展开剂，置氨蒸气预饱和的展开缸内展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm ）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点。2 含量测定取本品适量，研细，取约1g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醚适量，加热回流 12 小时，弃去乙醚液，残渣挥去乙醚，加甲醇适量，回流提取至提取液无色，将提取液（必要时适当浓缩）转移至50ml 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每 1ml 含 60g 的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（2010年版药典一部附录檗）试验，精密吸取供试品溶液1l 、对照品溶液 1l与 3l ，分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，以苯乙酸乙酯异丙醇甲醇浓氨试液（ 12：6：3：3：1）为展开剂，置用氨蒸气与展开剂同时预平衡 15 分钟的展开缸内展开，取出，晾干，照薄层色谱法（2010年版药典一部附录 檗薄层色谱扫描法） 进行荧光扫描， 激发波长 =365nm ，测量供试品吸光度积分值与对照品吸光度积分值，计算，即得。本品每 1g含黄柏以盐酸小檗碱（ C20H17NO4·HCl）计，不得少于 3.0mg。3、与传统二妙丸的比较（1）有效成分含量（2）服药次数与服药次数（三）、二妙丸浓缩丸的质量检测【水分】取供试品照水分测定法（附录）测定。除另有规定外 , 浓缩水丸不得过 9.0 。水分检查方法有：烘干法、甲苯法、减压干燥法和气相色谱法，本试验采用甲苯法。甲苯法：本法适用于含挥发性成分的药品。取供试品适量（约相当于含水量14ml），精密称定，置 A瓶中, 加甲苯约 200ml，必要时加入玻璃珠数粒，将仪器各部分连接，自冷凝管顶端加入甲苯，至充满檗管的狭细部分。将A瓶置电热套中或用其他适宜方法缓缓加热,待甲苯开始沸腾时，调节温度，使每秒钟馏出2 滴。待水分完全馏出，即测定管刻度部分的水量不再增加时, 将冷凝管内部先用甲苯冲洗, 再用饱蘸甲苯的长刷或其他适宜的方法，将管壁上附着的甲苯推下，继续蒸馏5 分钟，放冷至室温，拆卸装置， 如有水粘附在檗管的管壁上，可用蘸甲苯的铜丝推下， 放置，使水分与甲苯完全分离 （可加亚甲蓝粉末少量， 使水染成蓝色，以便分离观察）。检读水量，并计算成供试品中含有水分的百分数。附注：用化学纯甲苯直接测定， 甲苯须先加水少量充分振摇后放置，将水层分离弃去，经蒸馏后使用【重量差异】检查法：以 10 丸为一份（丸重 1.5g 以及 1.5g 以上的以 1 丸为一份），取供试品 10 份，分别称定重量，再与每份标示量（每丸标示量×称取丸数）相比较，（无标示量的丸剂与平均重量比较），按下表的规定，超出重量应符合重量差异限度规定，超出限度的不得多于2 份，并不得有 1 份超出限度 1 倍。标示重量（或平均重量）重量差异限度0.05g 及 0.05g 以下0.05g 以上至 0.1g 0.1g 以上至 0.3g 0.3g 以上至 1.5g 1.5g 以上至 3g 3g 以上至 6g 6g 以上至 9g 9g 以上±12% ±11% ±10 ±9% ±8% ±7% ±6% ±5% 【装量差异】取供试品10 袋（瓶），分别称定每袋（瓶）内容物的重量，每袋（瓶）装量与标示装量相比较，应符合下表规定。超出装量差异限度的不得多于 2 袋（瓶） , 并不得有 1 袋（瓶）超出装量差异限度一倍。标示重量装量差异限度0.05g 及 0.05g 以下0.05g 以上至 0.1g 0.1g 以上至 0.3g 0.3g 以上至 1.5g 1.5g 以上至 3g 3g 以上至 6g 6g 以上至 9g 9g 以上±12% ±11% ±10 ±9% ±8% ±7% ±6% ±5% 【溶散时限】除另有规定外，取供试品6 丸，选择适当孔径筛网的吊篮（丸剂直径在2.5mm以下的用直径约 0.42mm的筛网， 在 2.5mm 3.5mm之间的用直径 1.0mm的筛网，在 3.5mm以上的用直径约 2.0mm的筛网），照崩解时限检查法片剂项下的方法加档板检查。除另有规定外, 小蜜丸、水蜜丸和水丸应在1 小时内全部溶散；浓缩丸和糊丸应在2 小时内全部溶散 ; 微丸的溶散时限按所属丸剂类型的规定判定。如操作过程中丸剂粘附档板妨碍检查时, 应另取供试品 6 丸，不加档板按规定检查，在规定时间内应全部溶散。上述检查应在规定时间内全部通过筛网，如有细小颗粒状物未通过筛网，但已软化无硬芯者可作合格论。（四）二妙丸浓缩丸中有效成分的提取1、样品的预处理：取6 丸将制得的浓缩丸直接研细或粉碎，过筛，称重。均分成两等分，待用。2、有效成分的提取（1）小檗碱的提取：乙醇浸提法根据小檗碱易溶于热乙醇， 以热乙醇为溶剂（乙醇中硫酸加入量为0.25%） 。具体方法为：取一中样品一份加3 倍量的 80% 的热乙醇，使之溶解，再加入适量的稀盐酸溶液，每1.5 小时提取一次，共提取三次，即得。（2）挥发油的提取：水蒸气蒸馏法取 1 中样品一份，加 6 倍量水，直火加热蒸馏 4 小时，直到测定器中的油量不再增加，经冷凝后收集馏出液。