荧光定量pcr中基线、阈值、ct值
荧光定量荧光定量 PCRPCR 中基线、阈值、中基线、阈值、CtCt 值值荧光定量 PCR 中基线、阈值、Ct 值、扩增曲线、熔解曲线等基本概念基线（基线（BaselineBaseline）：是指在 PCR 扩增反应的最初数个循环里，荧光信号变化不大。接近一条直线，这样的直线直线即是基线。荧光域值（荧光域值（thresholdthreshold）的设定：一般将 PCR 反应前 15 个循环的荧光信号作为荧光本底信号，荧光域值是 PCR315 个循环荧光信号标准差的 10 倍，荧光域值设定在 PCR 扩增的指数期。CTCT 值值：表示每个 PCR 反应管内荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数循环数。研究表明，各模板的 CT 值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系，起始拷贝数越多，CT 值越小。反之亦然。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，其中横坐标代表起始拷贝数的对数。纵坐标代表 CT 值。因此，只要获得未知样品的 CT 值，即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。扩增曲线扩增曲线PCR 过程中，以循环数为横坐标，以反应过程中实时荧光强度为纵坐标所做的曲线判断扩增曲线是否良好的指标主要有几个方面：1、曲线拐点清楚，特别是低浓度样本指数期明显，扩增曲线整体平行性好，基线平而无上扬现象，低浓度样本扩增曲线指数期明显。2、曲线指数期斜率与扩增效率成正比，斜率越大扩增效率越高。3、标准的基线平直或略微下降，无明显的上扬趋势。4、各管的扩增曲线平行性好，表明各反应管的扩增效率相近。熔解曲线熔解曲线对 PCR 产物加热，随着温度的升高，双链扩增产物逐渐解链，导致荧光强度下降，到达某一温度时，会导致大量的产物解链，荧光急剧下降。利用该特点以及不同 PCR 产物其 Tm值的不同，因此使其荧光信号发生迅速下降的温度也不同，可通过此对 PCR 的特异性进行鉴定。
