过度热量限制对大鼠心肌SIRT1与SIRT3表达的影响（毕业设计-内科学专业）

题 目 过度热量限制对大鼠心肌SIRT1与SIRT3硕 士 学 位 论 文SIRT3表达的影响Influence of excessive calorie restriction on英文题目 expressions of SIRT1 and SIRT3 in rat'smyocardium姓 名 秦金金 学 号 10820062所 在学 院 医学院 导师姓名 王 伟专 业 内科学入 学日 期 2008.09 答辩日期 2011.05过度热量限制对大鼠心肌 SIRT1 与 SIRT3 表达的影响Influence of excessive calorie restrictionon expressions of SIRT1 and SIRT3 in rat'smyocardium研 究 生：秦金金专 业：内科学导 师：王 伟 主任医师中国 汕头2011. 5学位论文原创性声明本论文是我个人在导师指导下进行的工作研究及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在论文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律责任由本人承担。作者签名： 日期： 年 月 日学位论文使用授权声明本人授权汕头大学保存本学位论文的电子和纸质文档，允许论文被查阅和借阅；学校可将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存和汇编论文；学校可以向国家有关部门或机构送交论文并授权其保存、借阅或上网公布本学位论文的全部或部分内容。对于保密的论文，按照保密的有关规定和程序处理。本论文属于：保密( )，在 年解密后适用本授权声明。不保密( )。 (请在以上括号内打 “”)作者签名： 导师签名：日期： 年 月 日 日期： 年 月 日汕头大学医学院 硕士研究生学位课题承诺书本人 秦金金 ，于 2008 年 9 月 1 日 起在汕头大学医学院攻读 硕士学位研究生，类型为 科研型 。本人攻读学位期间进行了 过度热量限制对大鼠心肌 SIRT1与 SIRT3 表达的影响的研究，承担了 过度热量限制对大鼠心肌 SIRT1 与 SIRT3 表达的影响 方面的研究任务，本人承诺研究中所进行的一切工作都是我本人在导师指导下，严格按照课题“ 过度热量限制对大鼠心肌 SIRT1 与 SIRT3 表达的影响 ”设计方案实施。我保证本人所提交的所有数据都是真实可靠的，绝无虚假，并为此承担法律和道义上的一切责任。同时，我就读研究生期间所完成的学位论文以及相关结果，知识产权归属汕头大学医学院。本人在论文答辩前已将有关的研究资料和结果全部提交给了导师，离校后发表或使用学位论文或与学位论文直接相关的结果时，须征得导师及导师所在单位的同意，并承诺署名单位仍为汕头大学医学院（或导师所在单位） 。本人不擅自以本学位论文的研究成果申报研究课题。导师和导师单位可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段进行保存、汇编学位论文，可以公布（包括刊登）论文的全部或部分内容。导师及导师所在单位享有发表学位论文、申请成果和专利的权利。研究生签名：秦金金2011 年 5 月 27 日汕头大学医学院硕士学位论文中文摘要背 景热量限制（Caloric Restriction, CR)）可以延长啮齿类与灵长类动物的寿命，推迟和降低多种老龄相关疾病的发病，它同时能改善超重人群的健康水平。SIRT1 与 SIRT3 被证明参与心血管疾病发生发展的机制，热量限制可以增加 SIRT1 与 SIRT3 的表达，但是不同程度的热量限制对心肌 SIRT1 与 SIRT3 的表达的影响还未知。目 的本研究旨在通过设定不同程度的热量限制观察对大鼠心肌 SIRT1 与 SIRT3 表达的影响。方 法60 只体重 200±20g 的 8 周龄成年雄性 SD 大鼠被随机的分成四个饮食组：A 、正常对照组：自由进食标准大鼠饲料；B、75%限制饮食组：进食量为同期正常组的 75%；C、55%限制饮食组：进食量为同期正常组的 55%;D、高脂饮食组：自由进食高脂饲料（2%胆固醇 20g， 0.5%胆酸钠 5g，10% 猪油 30g，0.2%丙基硫氧嘧啶 2g，82.3%基础饲料 823g，5%白糖 50g） 。每天称重并记录进食量，以便及时调整 CR 组的给食。每两周从禁食 16小时的大鼠尾静脉抽血，血清经离心后被分离出来并存放于-20冰箱，集中测量血生化水平。在试验结束时，将大鼠麻醉后从心脏抽血，断头处死大鼠，剖开腹腔，将心脏，腹部脂肪等迅速分离并称重。通过免疫印迹法来检测心脏中 SIRT1 和 SIRT3 蛋白的表达量。结 果正常对照组与高脂饮食组大鼠体重都较实验开始时增加（p<0.001） ，两组间无明显差异，但高脂饮食组腹部脂肪、甘油三酯与低密度脂蛋白均较对照组高，高脂饮食组大鼠的心脏质量指数与左心室质量指数也较正常对照组高；75%CR 组体重无明显变化，但I汕头大学医学院硕士学位论文其腹部脂肪与血脂水平均较对照组低，其心脏质量指数与左心室质量指数与对照组无显著差异；55%CR 组体重、腹部脂肪、甘油三酯、低密度脂蛋白较其它三组是最低的，但其日常生活状态不佳，其心脏质量指数与左心室质量指数也是最低的。SIRT1 与 SIRT3在 75%CR 组心肌的表达均较对照组高，在 55%CR 组与高脂饮食组的表达均较对照组低，但其两组间无明显差异。结 论适当的热量限制能改善大鼠抵抗代谢综合征的风险，并能增加大鼠心肌组织 SIRT1 与SIRT3 的表达，而过度的热量限制能降低心肌 SIRT1 与 SIRT3 的表达。关键词 SIRT1；SIRT3；热量限制；心血管疾病II汕头大学医学院硕士学位论文ABSTRACTBackgroudCaloric restriction (CR) extends lifespan and increases resistance to age-related diseases inrodents and monkeys, and improves the health of overweight humans. Sirtuin1 (Sirt1) andsirtuin3 (Sirt3) have been reported to play a protective effect on cardiovascular disease. CR canincrease the expression of both SIRT1 and SIRT3. However, the relationship between extent ofCR and the level of SIRT expression is still unknown.ObjectiveTo investigate the influence of calorie restriction on expression of SIRT1 and SIRT3 in rat'smyocardium under different levels.MethodsSixty Sprague-Dawley rats, eight-weeks old, with an average body weight of 200±20g, wererandomly divided into four diet treatment groups: normal control (NC) group fed with standardrodent chow; 75% calorie restriction (CR) group fed with 75% of the food intake from the NCgroup； 55% calorie restriction (CR) group fed with 55% of the food intake from the NC group；high-fat (HFa) group fed with a high-fat diet containing 2% cholesterol 20g, 0.5% sodiumcholate 5g，10% lard 100g, 0.2% propylthiouracil 2g，82.3% standard rodent chow 823g and5% white sugar 50%. Food intake and body weight of rats were recorded everyday, and thefood supply of the CR group was adjusted accordingly. Blood samples were collected from tailveins every two weeks after fasting for 16h. Sera were immediately isolated from bloodsamples by centrifugation and then stored at -20 °C until analyzed for blood lipid. At the end ofstudy， blood was collected by heart puncture after anesthetization and the animal was sacrificedby decapitation. The hearts and viscera fat were harvested and weighed immediately.Expressions of SIRT1 and SIRT3 proteins in myocardium was analyzed by Western blotting.III汕头大学医学院硕士学位论文ResultsThe body weight of the NC and HF group both increased, but there is no significant differencebetween them, however, both the viscera fat and blood lipid levels were higher than NC group;the heart mass index and left ventricle mass index also were higher than NC group. The weightof 75% CR group had no significant change, but the viscera fat and blood lipid levels weredecreased compared with NC group, the heart mass index and left ventricle mass index weresimilar to NC group. The body weight, the viscera fat, the TRIG and LDL levels of the 55%CRwere the lowest, but their daily behavior were not so energetic, there heart mass index and leftventricle mass index were also the lowest. Treated with the 75% CR diet increased theexpressi