RPHPLC测定肿瘤Ⅰ号胶囊中芦荟大黄素、大黄素与大黄酚的含量

RP-HPLC测定肿瘤号胶囊中芦荟大黄素、大黄素与大黄酚的含量【摘要】目的建立肿瘤号胶囊中芦荟大黄素、大黄素与大黄酚的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法，色谱柱为KrasilDS-14.6×200,5，以甲醇-0.1%磷酸75:25为流动相，流速为1.0l/in，柱温35，检测波长为254n。结果芦荟大黄素在1.3822.1g/l浓度范围内，大黄素在1.3121.0g/l浓度范围内，大黄酚在2.2035.2g/l的范围内与峰面积呈良好的线性关系，相关系数均为0.9999。方法平均回收率分别为98.1%RSD=1.2%，98.6%RSD=0.99%和97.4%RSD=1.4%。结论方法简便，准确，重现性好，可作为肿瘤号胶囊质量控制方法之一。【关键词】肿瘤号胶囊；芦荟大黄素；大黄素；大黄酚；hplSiultaneusdeterinatinfAle-edin,EdinandhrysphanlinZhngliuapsulebyHPL【Abstrat】bjetiveTdevelpaHPLethdfrsiultaneusdeterinatinfAle-edin、EdinandhrysphanlinZhngliuapsule.ethdsTheanalysisasusedithaKrasilDS-1(4.6×200,5)lunandabilephasefethanl-0.1%phsphriaidslutin75：25.Theflrateas1.0l/inandlunteperatureas35.Thedetetinavelengthassetat254n.ResultsThealibratinurveaslinearithintherangef1.3822.1g/lfrAle-edin,1.3121.0g/lfredinand2.2035.2g/l(r=0.9999)frhrysphanl,theaveragereveriesere98.1%RSD=1.2%frAle-edin,98.6%RSD=0.99%frEdinand97.4%RSD=1.4%frhrysphanl.nlusinThisethdasnvenient,aurateandreprduiblefrdeterinatinfAle-edin,EdinandhrysphanlinZhngliuapsule.【Keyrds】Zhngliuapsule;ale-edin;edin;hrysphenl;HPL肿瘤号胶囊由莪术、丹参、大黄、淫羊藿等十余味药材提取加工制成，临床上治疗乳腺各类癌瘤、乳腺增生、乳腺炎均获得满意效果。有研究说明,大黄抗癌作用的主要成分为游离蒽醌衍生物和糖类。蒽醌类衍生物可通过抑制肿瘤细胞的呼吸和物质代谢，抑制DNA、RNA的生物合成到达抗癌作用1。本研究以大黄中芦荟大黄素、大黄素和大黄酚为检测指标成分，建立了肿瘤号胶囊中芦荟大黄素、大黄素和大黄酚的同时含量测定方法，结果说明该方法简便快速，别离度好，结果准确可靠。1仪器与试药日本岛津L-10AT型高效液相色谱仪，SPD-10A型紫外检测器；KQ-50B型超声仪。芦荟大黄素对照品、大黄素对照品和大黄酚对照品购于中国药品生物制品检定所，甲醇为色谱纯，其他试剂为分析纯，水为重蒸水。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱：KrasilDS-14.6×200，5，流动相甲醇0.1%磷酸7525；v/v，柱温35，流速1.0l/in，检测波长254n，进样量20l。在上述色谱条件下进样分析，理论塔板数按芦荟大黄素峰计算不低于2500，按大黄素峰计算不低于3000，按大黄酚计算不低于4000。芦荟大黄素、大黄素和大黄酚峰与相邻色谱峰的别离度均1.5。阴性对照对样品测定无干扰，色谱图见图1。图1HPL色谱图略2.2线性关系试验分别取芦荟大黄素、大黄素和大黄酚对照品适量，精细称定，置50l量瓶中，分别用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，制成浓度分别为0.092g/l、0.088g/l和0.088g/l的对照品储藏液，。依次精细量取对照品储藏液，0.15,0.3,0.6,1.2和2.4l；0.25，0.5，1.0，2.0和4.0分别置于10l量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，制成系列浓度的混合对照品溶液。分别取上述溶液各20l按上述色谱条件进样分析。以对照品浓度X(g/l)为横坐标，峰面积Y为纵坐标，绘制标准曲线并进展回归计算，回归方程分别为芦荟大黄素：Y=0.079×104X+6.584×102r=0.9999，n=5大黄素：Y=4.788×104X+5.661×103r=0.9999，n=5大黄酚：Y=6.748×104X+5.258×102r=0.9999，n=5结果说明，芦荟大黄素在1.3822.1g/l浓度范围内，大黄素在1.3221.2g/l浓度范围内，大黄酚在2.2035.2g/l的范围内，Y与X之间具有良好的线性关系。2.3对照品溶液制备精细量取上述对照品储藏液0.6l，0.6l，1.0l置10l量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得每1l含芦荟大黄素5.52g，含大黄素5.25g，含大黄酚8.80g。2.4供试品溶液制备取样品粉末0.5g，精细称定，置具塞锥形瓶中，参加甲醇25l，回流提取30in，放冷，滤过，回收溶剂，残渣加15l8%盐酸溶液溶解，再加20l氯仿加热回流1h，放冷，置分液漏斗中，分取氯仿层，酸液继续用氯仿提取3次，每次20l，合并氯仿层，回收溶剂，残渣加甲醇溶解并转移至5l量瓶中，稀释至刻度，摇匀，微孔滤膜(0.45)过滤后取续滤液作为供试品溶液。2.5阴性对照溶液制备按处方比例称取除大黄以外的其余药味，按2.4项下“供试品溶液制备操作，制成阴性对照溶液。汲取20l进样，观察样品峰的保存时间处是否有杂质峰干扰。结果说明：样品峰保存时间处无杂质峰干扰。2.6色谱系统精细度试验取同一对照品溶液，在一样的色谱条件下连续进样6次，计算芦荟大黄素、大黄素和大黄酚色谱峰面积的RSD分别为0.69%、0.82%和1.1%n=6。2.7方法重复性试验取同一批号样品粉末5份，按“供试品溶液制备项下方法操作，平行制备5份样品，在上述色谱条件下进展分析测定，芦荟大黄素含量的相对标准偏向RSD为1.1%(n=5)；大黄素含量的相对标准偏向RSD为2.0%(n=5)，大黄酚含量的相对标准偏向RSD为1.4%(n=5)。2.8稳定性试验取同一份供试品溶液，室温下静置，分别于0，2，4，8，12，24h按上述色谱条件测定，测得芦荟大黄素、大黄素和大黄酚峰面积的RSD分别为1.1%、2.6%和1.1%，结果说明供试品溶液在24h内稳定。2.9回收率试验采用加样回收法，称取含量的供试品9份，按低、中、高浓度分别精细参加芦荟大黄素、大黄素、大黄酚对照品储藏液，每一浓度3份，按上述色谱条件测定。分析结果见表1。表1回收率试验结果(略)2.10样品测定取3批样品，每批取3份，按2.5项下的方法制得供试品溶液，按上述色谱条件测定，记录色谱峰面积，计算芦荟大黄素、大黄素和大黄酚的含量。结果见表2。表2含量测定结果略3讨论3.1色谱条件的选择为同时测定芦荟大黄素、大黄素和大黄酚的含量，参考相关文献2,3，试用甲醇0.5冰醋酸，乙腈0.1%磷酸，甲醇0.1%磷酸等流动系统，经过试验，以甲醇-0.1%磷酸为流动相，芦荟大黄素、大黄素和大黄酚与其他组分均能到达基线别离。3.2检测波长的选择分别测定芦荟大黄素、大黄素和大黄酚的紫外光谱，结果说明，三种成分均在254n附近有最大吸收，应选择254n作为测定波长。3.3提取方法的选择大黄含有游离型和结合型蒽醌成分，含量测定是检测游离型蒽醌成分总含量，故采用水解同时提取的方法。经考察，甲醇回流提取时间在0.5、1.0、1.5h范围内结果无明显差异，故提取时间为0.5h。选择乙醚、氯仿作为提取溶剂进展考察，结果说明氯仿优于乙醚，且操作相对简单。本复方制剂药味多，测定含量时干扰较大。采用本法测定，具有简便，重复性好，且稳定的特点，可作为肿瘤号胶囊质量控制方法之一。【参考文献】1姜晓峰,甄永苏.大黄逆转肿瘤细胞多药抗药性作用.药学学报,1999,34(3):164-164.2刘东平.HPL法测定大败毒胶囊中大黄素和大黄酚的含量.现代中药研究与理论,2022,19(3):35-37.3卢文彪,曾元儿.大承气汤颗粒剂质量控制研究.湖南中医药导报，2002,8(4):148-151.