山东大学分子生物学章节习题及参考答案11常用分子生物学技术的原理及其应用

第十一章   常用分子生物学技术的原理及其应用一 选择题 【A型题】 1用于核酸杂交的探针应是A双链DNA       B蛋白质C单链DNA或RNA D双股多肽链 E双链RNA2可用于基因组DNA分析的方法是ASouthern blotting  BNorthern blotting CWestern blotting   D斑点杂交E免疫印迹技术3若在Southern blotting操作中省略变性过程，会造成A转移失败   B固定失败C杂交失败   D非特异性杂交E放射自显影本底过高4关于Southern Blotting的叙述,正确的是ARNA转移到NC膜,以DNA做探针杂交BDNA转移到NC膜,以DNA做探针杂交CDNA转移到NC膜,以蛋白质做探针杂交DRNA转移到NC膜,以RNA做探针杂交E蛋白质转移到NC膜,以RNA做探针杂交5能与Southern blotting探针杂交的片段是A完全相同的DNA片段B任何含有相同序列的DNA片段C任何含有互补序列的DNA片段D限制性内切酶切割过的DNA片段E任何含有互补序列的RNA片段6Southern blotting的正确操作步骤是a转移   b琼脂糖凝胶电泳  c固定   d杂交   e限制性内切酶消化    f放射自显影     g变性AacbefgdBbacedfgCbeacdfgDebacgdfEebgacdf7以标记探针检测NC膜上RNA的方法称为ASouthern Blotting BNorthern BlottingC原位杂交D蛋白分子杂交E免疫印迹杂交8关于RNA印迹技术正确的是A变性RNA转移效率低B电泳前不需限制性内切酶处理C将DNA转移到膜上，以RNA探针检测D将mRNA转移到膜上，以抗体探针检测E检测mRNA表达水平的敏感性较PCR高9在蛋白质印迹分析中，正确的是A用琼脂糖凝胶电泳分离蛋白质B被标记的是第一抗体C被标记的是第二抗体D检测杂交区带只能用加入底物显色法E被标记的是第三抗体10Western blotting指的是ADNA与探针结合  BDNA与抗体结合CRNA与抗体结合  D蛋白质与抗体结合E免疫分子与DNA的结合11只能采用电转移的是ASouthern blotting  BNorthern blottingCWestern blotting   D原位杂交E斑点杂交12Western blotting的正确操作步骤是a加入二抗  b加入底物显色  c电转移d加入一抗  e变性聚丙烯酰胺凝胶电泳f封闭无关位点AceafdbBecfdabCecadfbDcefdabEfecdab13关于原位杂交的叙述，正确的是A在DNA芯片上进行杂交B直接在组织切片或细胞涂片上杂交C将核酸点在NC膜上直接进行杂交D即DNA点阵法E在凝胶中进行杂交14关于印迹技术的叙述，错误的是ARNA印迹可用于比较同一基因在不同细胞的表达情况BSouthern blotting可用于基因工程中重组体的筛选CDNA点阵技术用于检测细胞中的核酸种类D蛋白质印迹不能用化学发光检测杂交带E蛋白质印迹可用同位素标记第二抗体15关于PCR的叙述，错误的是A需要模板         B需要一对引物C扩增模板的一条链 D扩增模板的两条链E需要耐热性DNA聚合酶16 关于实时PCR技术，错误的是A是一种定量技术B可以计算产物的量C不可以计算样品中原有模板的量D反应系统含有两对引物E探针引物采用荧光分子标记17 关于RT-PCR，错误的是A可用于从组织或细胞中获得目的基因B可对已知序列的RNA进行定量分析C可对已知序列的RNA进行定性分析D以RNA为模板扩增目的基因E以cDNA为模板扩增目的基因18关于PCR的叙述，错误的是A中文全称为聚合酶链反应B是一种DNA的体外扩增方法C基本原理是依据DNA的半保留复制D一般采用的变性温度为72E循环次数一般为2530次  【X型题】19以核酸分子杂交为基础的分子生物学技术有ASouthern blottingBNorthern blotting CWestern blottingD基因芯片   E斑点印迹20 Southern blotting的操作包括A探针与膜上的DNA杂交 B琼脂糖凝胶电泳C转移样品到膜上D加热使DNA固定与膜上E凝胶中的DNA分子变性21 PCR获得目的基因的方式有A利用特异引物以cDNA/基因组DNA为模板获得已知目的基因B利用简并引物从cDNA/基因组文库获得同源片段C利用随机引物从cDNA/基因组文库中克隆基因D利用随机引物直接从组织和细胞获得目的基因E利用RT-PCR直接从组织和细胞获得目的基因22PCR反应体系的基本成分有A模板DNA  B特异性引物C耐热性DNA聚合酶   DdNTPE含Mg2+的缓冲液印迹技术涉及生23PCR的主要步骤有A退火   B变性   C进位D延伸   E转位24cDNA文库A以cDNA形式贮存信息B克隆数不少于106C贮存某一组织细胞的全部基因组信息D贮存某一组织细胞的全部基因表达信息E贮存某一组织细胞的全部mRNA表达信息二 名词解释1. Southern blotting2. Western blotting3. 反转录PCR（Reverse transcription PCR, RTPCR）4. 基因芯片（gene chip）三 问答题 1简述PCR反应的基本原理及体系的组成分。22简述PCR的基本反应步骤及主要用途。3简述Southern blot 的操作步骤。若在实验过程中省略了变性一步，将会出现什么结果？4举例说明定位克隆策略克隆治病相关基因的过程。参考答案一 选择题1C   2A   3C   4B   5C   6D   7B    8B   9C   10D   11C  12B   13B  14D   15C  16C   17D   18D  19.ABDE     20.ABCDE    21ABCE       22ABCDE   23ABD   24ABCE 二. 名词解释       1.Southern blotting  又称为DNA印迹术。是将基因组DNA经限制性内切酶消化后进行琼脂糖凝胶电泳,再利用毛细作用将胶中的DNA分子转移到NC膜上进行杂交反应的技术。主要用于基因组DNA的定性和定量分析，亦可分析重组质粒和噬菌体。2.Western blotting  又称蛋白质印迹术或免疫印迹技术，指蛋白质在经聚丙烯酰胺电泳分离之后转移到膜上,再与溶液中的其它抗体探针相互结合的技术。用于检测样品中特异性蛋白质的存在、细胞中特异蛋白质的半定量分析以及蛋白分子间的相互作用研究等。3.反转录PCR  是将RNA的反转录反应和PCR反应联合应用的一种技术。即首先以RNA为模板，在反转录酶的作用下合成cDNA，再以cDNA为模板通过PCR反应来扩增目的基因。该技术是目前从组织或细胞中获得目的基因以及对已知序列的RNA进行定性定量分析的最有效方法之一。4.基因芯片  基因芯片包括DNA芯片和cDNA芯片，是指将许多特定的DNA片段或cDNA片段作为探针，有规律的紧密排列固定于单位面积的支持物上，然后与待测的荧光标记样品进行杂交，杂交后用激光共聚焦荧光检测系统等对芯片进行扫描，通过计算机系统对每一探针位点的荧光信号作出检测、比较和分析，从而迅速得出定性和定量结果的技术。用于基因信息的大规模检测。三 问答题  1答：PCR（polymerase chain reaction）技术即聚合酶链反应。其基本工作原理是以待扩增的DNA分子为模板，以一对分别与模板5末端和3末端互补的寡核苷酸片段为引物，在DNA聚合酶的作用下，按照半保留复制的机制沿着模板链延伸至完成新的DNA合成，重复这一过程，即可使目的DNA片段得到扩增，应用这一技术可以使微量的目的DNA片段在体外扩增100万倍以上。PCR反应体系的基本成分包括：模板DNA、特异性引物、耐热性DNA聚合酶、dNTP、含Mg2+的缓冲液。2答：PCR的基本反应步骤包括：变性，将反应系统加热至95，使模板DNA完全变性成单链，同时引物自身和引物之间存在的局部双链也得以消除；退火，将温度下降至适宜温度（一般较Tm值低5），使引物与DNA模板退火结合；延伸，将温度升至72，DNA聚合酶以dNTP为底物催化DNA的合成反应。上述三个步骤称为一个循环，新合成的DNA分子继续作为下一轮合成的模板，经多次循环（2530次）后即可达到扩增DNA片段的目的。    PCR技术的主要用途包括：目的基因的克隆；基因的体外突变；DNA和RNA的微量分析；DNA测序；基因突变分析。3答：Southern blotting的操作步骤：限制性内切酶消化基因组DNA；酶切片断的琼脂糖凝胶电泳；将含有DNA区带的凝胶放入变性溶液进行变性；将NC膜放在胶上，盘中的转移缓冲液将逐渐为胶和膜上覆盖的滤纸吸收，从而将胶中的变性DNA分子带到膜上；转移完成后，加热使DNA固定到膜上，用于杂交反应；膜上的DNA分子与探针杂交；经放射自显影或其他检测技术显现出杂交区带。若在实验过程中省略变性这一步，则凝胶中的DNA分子将以双链形式转移到膜上，由于核酸分子杂交必须在两条单链分子之间进行，因而导致杂交失败，经放射自显影后，会发现胶片上一片空白。4答：定位克隆是克隆治病相关基因的一种策略，是指从一种致病基因的染色体定位出发逐步缩小范围，最后克隆该基因。系统的定位克隆工作包含遗传学分析和分子生物学分析两部分。遗传学分析方法包括交换分析和连锁不平衡分析以确定致病基因的染色体定位。分子生物学分析包括染色体异常（缺失、易位等）分析和基因文库的筛选和克隆。一种致病基因的定位，往往需要多种技术的结合。如杜氏肌营养不良致病基因的克隆就是一个定位克隆的过程。该过程分两阶段进行。首先，通过遗传学的家族连锁分析确定了致病基因位于Xp21，从而完成了该基因的染色体定位。接着利用一个Xp21区带缺失的病例采用扣除杂交实验进行了基因克隆，即将此病人的DNA与正常人的DNA进行杂交，从而减掉了相同的基因序列，最后剩余的序列即为病人缺失的基因，该基因的产物被命名为肌营养不良蛋白。