复旦大学药物分析课件07苯乙胺类拟肾上腺素药物的分析

第七章第七章 苯苯乙胺类拟肾上腺素药物的分析乙胺类拟肾上腺素药物的分析 1 第一节 结构与性质 2 具有烃胺侧链，属于芳烃胺类药物。多数在苯环上有12个羟基取代基。 代表药物 3 肾上腺素 盐酸麻黄碱 盐酸克伦特罗 盐酸多巴胺 性质： 1.酚羟基特性 邻苯二酚或苯酚结构，可与重金属离子络合呈色；易被氧化呈色。 4 3. 具有旋光性 具有手性碳原子，具有光学活性。 4. 紫外特征吸收 2. 弱碱性 具有烃胺侧链（仲氨），显弱碱性。能与酸成盐。 第二节 鉴别试验 1、与铁盐的反应(酚羟基)： 在0.1mol/L盐酸中与Fe3+显翠绿色，加氨试液后，显紫色或紫红色 2、甲醛-硫酸反应 本类药物与甲醛硫酸反应生成具有醌式结构的有色物质 5 3、还原性反应 4、双缩脲反应：氨基醇结构与硫酸铜的反应 盐酸麻黄碱+硫酸铜蓝紫色+乙醚 )(222or 棕色聚合聚合物放置肾上腺素红肾上腺素OIOH极微红色无色同样条件下去甲肾上腺素反应速度极慢or 5、与亚硝基铁氰化钠的反应（Rimini试验） 脂肪伯氨+丙酮碳酸氢钠亚硝基铁氰化钠 6、吸收光谱特征 红紫色 第三节、特殊杂质与检查 310nmA2.0mg/mlHCl 0.05mol/L测的溶液溶液样品一、酮体杂质的检查 二、光学纯度的检查二、光学纯度的检查 方法：HPLC或HPCE 以高压电场作为驱动力，以毛细管为分离通道，依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离的一种液相分离技术。是经典电泳技术和现代微柱分离技术相结合的产物。 三、有关物质的检查三、有关物质的检查 方法：HPLC法 第四节、含量测定 一、非水溶液滴定法 非水溶剂中进行的酸碱滴定法。主要用来测定有机碱及其氢卤酸盐、磷酸盐、硫酸盐、有机酸盐等。 非水溶剂：酸性溶剂-测定有机弱碱，冰醋酸 碱性溶剂-测定有机弱酸，DMF 两性溶剂-兼测酸、碱，甲醇 惰性溶剂-甲苯、丙酮等 ( (一一) ) 基本原理基本原理： 在水中碱性较弱，不能顺利地进行中和滴定。在酸性非水介质中（如HAc中），则能显示出较强的碱性，滴定突跃增大，可以顺利地进行中和滴定。 当HA酸性较强时，反应不能定量完成，必须除去或降低HA的酸性，使反应顺利地完成。 BH+ A- + HClO4 BH+ ClO4 + HA 游离碱类盐 被置换出的弱酸 因此，要根据不同情况采用相应测定条件。因此，要根据不同情况采用相应测定条件。 ( (二二) ) 一般方法一般方法 供供试试品品 + + 冰冰醋醋酸酸+醋醋酐酐 结结 果果 高氯酸滴定液滴定高氯酸滴定液滴定 以空白以空白试验校试验校正正 溶剂：冰醋酸醋酐； 指示剂：结晶紫或电位法； 滴定剂：高氯酸 注意：氢卤酸盐药物若用结晶紫指示终点需用醋酸汞消除干扰；含氨基的药物如果需加入醋酐，应在加入冰HAc溶解放冷后再加醋酐，防止氨基被乙酰化。 1.1.适用范围：适用范围： 主要用于Kb10-8的有机碱盐的含量测定。 对碱性较弱的杂环类药物，只要选择合适的溶剂、滴定剂和终点指示的方法，可使pKb为813的弱碱性药物采用本法滴定。 Kb为10-810-10时，宜选冰醋酸作为溶剂； 药物的 Kb为10-1010-12时，宜选冰醋酸与醋酐的混合溶液； Kb10-12时，应用醋酐作为溶剂。 另外，在冰醋酸中加入不同量的甲酸，也能使滴定突跃显著增 大，使一些碱性极弱的杂环类药物获得满意的测定结果。 ( (三三) ) 问题讨论问题讨论 2.2.酸根的影响：酸根的影响： 无机酸类，在醋酸介质中的酸性以下列排序递减： 高氯酸氢溴酸硫酸盐酸硝酸 （1）氢卤酸盐的测定： 消除HX干扰的方法：加Hg(Ac)2；或者采用醋酐作 溶剂，电位法指示终点。 2B HX + Hg(Ac)2 2B HAc + HgX2 过量(13倍)不影响测定结果 （2）硫酸盐类药物测定 硫酸是二元酸，在水溶液中能完成二级解离，生 成SO42-，但在非水介质中，只显示一元酸解离为HSO4， 即只供给一个H+，所以硫酸盐类药物在冰醋酸中，只 能滴定至硫酸氢盐，因此可以用高氯酸滴定液直接滴 定。 N C H ( O H ) N C H 3 O C H C H 2 H N C H ( O H ) N C H 3 O C H C H 2 H + + S O 4 2 - . NCH(OH)NCH3OCHCH2HH+.ClO4.HSO4+-NCH(OH)NCH3OCHCH2HH+.ClO4+-.ClO4+3HClO4 + (C(C2020H H2424N N2 2 H H+ +) )2 2SOSO4 4 + 3HClO+ 3HClO4 4 (C (C2020H H2424N N2 2 2H2H+ +) ) 2ClO2ClO4 4- - + (C+ (C2020H H2424N N2 2 2H2H+ +) ) HSOHSO4 4- - ClOClO4 4- - （3）硝酸盐的测定 硝酸在冰醋酸介质中酸性不强，滴定反应可以进行完全。 但是硝酸具有氧化性可以破坏指示剂使其变色，使指示剂无法指示终点。因此采用非水溶液滴定法测定硝酸盐时，一般不用指示剂法而用电位法指示终点电位法指示终点。 3 3. . 滴定剂的稳定性滴定剂的稳定性 水的膨胀系数是0.2110-3/C HAc膨胀系数是1.110-3/C，较大，体积随温度变化较大，且还具有挥发性。 测定样品与标定标准溶液时温度不同，应对浓度进行校正。 )(0011.010101ttNN配制时，根据HAc和HClO4含水量，加入计算量的醋酐 4 4、终点指示方法终点指示方法 最常用的指示剂是结晶紫，少量电位法 紫 蓝 蓝绿 绿 黄绿 黄 （碱性区）（酸性区） 终点的颜色应用电位法校准。 二、溴量法 1）原理： Br2+2KI2KBr + I2 I2 + 2Na2S2O3 2NaI + Na2S4O6 2)操作要点 游离溴及碘极易挥散，操作过程中防逸失 不能加入太过量的溴液，以防酚羟基氧化或溴化。 平行条件作空白，校正操作中溴及碘挥发。 CHCH2NHCH3OHOH+ 3 Br2CHCH2NHCH3OHOHBrBr+ 3HBr20 三三、亚硝酸钠法亚硝酸钠法 具有芳伯氨基药物，在酸性条件下与NaNO2反应生成重氮盐，根据消耗NaNO2量，计算出含量。盐酸克伦特罗分子结构中含有芳伯胺基，可用此法测定含量。 21 四、紫外分光光度法与比色法 五、高效液相色谱法 六、体内药物分析 22 盐酸克伦特罗的测定： 液质联用仪由以下几部分组成 数据及供电系统 进样系统 离子源 质量分析器 检测器 真空系统 LC/MS 系统构成 + + 样品与溶剂 脱离及电离 EI ESI APCI LC/MS 接口 离子源 质量分析器 检测离子 HPLC 数据系统 质谱 离子识别 Quadrapole Time of Flight Fourier Transform + + + + + + + 离子检测 + + - + + + + + + - + + + 2017/5/23 25 毛细管2-4kV 离子从液滴表面 蒸发出来 - - + + + - + + + + + - 含各种离子的液滴 - - + + + + - - - - - + + + - - + + + + - - - - - + + + - 随着液滴的挥发,电荷密度增 大, 离子集中到液滴表面 + + - + - + + + - + + - + - + + + - 适合液相色谱的软离子化方法适合液相色谱的软离子化方法-电喷雾电离电喷雾电离( (ESI):ESI): 电喷雾离子化分为三个过程电喷雾离子化分为三个过程: : 1. 形成带电液滴 2. 溶剂蒸发和液滴碎裂 3. 形成气相离子 2017/5/23 26 大气压化学电离 (APCI) 大气压化学电离可分为以下两个步骤大气压化学电离可分为以下两个步骤: : 快速蒸发快速蒸发 气相化学电离气相化学电离( (电晕放电电晕放电) ) x x xH + M 1) 离子化过程优先生成溶剂离子 x x xH + M 2) 溶剂离子与样品分子反应生成离子簇 电晕放电针 X = 溶剂分子 x x M M=样品 MH + x x x x XH + x xH + MH + 3)离子传送到质量分析器并实现离子分离 毛细管 2017/5/23 四极杆质谱仪四极杆质谱仪 三级三级( (重）四极杆质谱仪重）四极杆质谱仪 液液相色谱串联质相色谱串联质谱快速谱快速测定猪肝中测定猪肝中的的- -受体受体激动剂激动剂残留残留 29 专属性 猪肉中克伦特罗、沙丁胺醇、土霉素、四猪肉中克伦特罗、沙丁胺醇、土霉素、四环素残留量的环素残留量的HPLCHPLC同时测定方法研究同时测定方法研究 32 样品的提取与净化：准确称取10.0g 绞碎的猪肉样品于50mL 离心管中，加入5.0mL 0.01 mol/L EDTA-2Na 和5.0 mL 0.3%磷酸溶液，混匀2 min，超声提取15 min 后加1.0 mL高氯酸（1:1），混均1 min，于4000r/min 离心15 min，收集上清液。残渣中再加入5.0mL 0.01 mol/L EDTA-2Na、5.0 mL 0.3%磷酸溶液、1.0 mL 高氯酸（1:1），混匀1 min，超声提取10 min，于4000r/min 离心10 min，合并上清液备用。 分别用10mL甲醇、10mL 蒸馏水先后淋洗C18柱，流速为1.0 mL/min。将上述提取液全部过C18柱，流速0.1mL/min 富集，先用6mL 蒸馏水淋洗柱，流速0.2mL/min，再用甲醇洗脱，流速0.2 mL/min，收集洗脱液15mL 于离心管中，于40水浴中氮气吹干，用0.1mL 0.01 mol/L盐酸溶解残渣，混匀30s，4000 r/min离心10min，上清液供液相色谱测定。 34 色谱条件： 流动相：乙腈0.02mol/L KH2PO4+30mol/L EDTA- 2Na(pH=3.5) 梯度洗脱，0min（1288）6min（2278）； 流速：1.0 mL/min；柱温：40； DAD 检测器波长编 程：196nm (02.8min)，360nm (2.88.5min)，210nm (8.515min)；进样量：10L