1, 6-二磷酸果糖与低分子右旋糖酐协同用药的研究

中国药科大学学报Journal of China PharmaceuticalUniversity 2000, 31（2）:139-1421,6-二磷酸果糖与低分子右旋糖酐协同用药的研究刘煌 吴梧桐（中国药科大学生物制药学院，南京 210009）摘 要 ：外源性 1,6-二磷酸果糖（FDP）与低分子右旋糖酐协同用药能显著降低冠脉结扎后大鼠血清中的肌酸激酶浓度，改善冠脉结扎后的缺血状况；豚鼠离体心脏灌流实验表明两者协同用药后，能缓和 FDP 单用时的心率减少作用；对由垂体后叶素引起的大鼠心肌缺血模型有良好的治疗保护作用，1050 m g/kg 剂量组的阴性率高达 80%，相当于单用 FDP时 1500 mg/kg 的疗效。因此两者联合用药有良好的药理协同作用。关键词 ：1,6-二磷酸果糖（FDP） ；右旋糖配（D e x tra n-2 0） ；心肌缺血；协同作用1,6-二磷酸果糖（fructo-1, 6-diphosphate，FDP）是糖代谢酵解过程中的关键中间产物，在许多代谢通路中起重要调节作用。外源性 FDP 通常无法跨越细胞膜，但可作用于细胞膜，通过刺激磷酸果糖激酶之活性，聚增细胞内高能磷酸池，提高细胞内 ATP 浓度，从而有益于体克、缺氧、缺血、损伤、体外循环、输血等状态下的细胞能量代谢及对葡萄糖的利用，以促进修复，改善功能。试管实验发现 FDP 可增加红细胞韧性及对抗溶血的能力，防止白细胞产生有害的 O2 基，抵制因正定霉素及各种不良刺激作用于干细胞而造成的组胺释放作用，从而减少细胞损伤。还能对抗氯化钾对实验鼠心肌的毒性作用，并对实验犬的失血性体克及创伤性体克状态有明显的保护作用 1-3 。低分子右旋糖苷具有扩充血容量和轻度抗凝作用，能抑制血小板功能和纤维蛋白聚合，延长出血时间。由于两者都具有抗体克、防治心肌梗塞和心肌缺血作用，因此两者联合用药具有明显的药效协同作用，FDP 是通过改善细胞代谢而起作用，而低分子量右旋糖苷是通过扩充血容量和轻度抗凝及降低血液粘滞性而发挥作用，因此两者从不同水平发挥药理作用，能取得良好的药理协同性。该协同用药的研究在国内外均未见报道。1 材料FDP 样品、FDP 复合剂（FDP：Dextran-20=3:1）由中国药科大学生物制药教研室提供；FDP 标准品由意大利 Foscuma 公司出品；低分子量右旋糖苷（Dextran-20）由江苏启东制药厂生产；垂体后叶素系上海天丰制药厂产品；6511 型心电图机；SD 大鼠、豚鼠、狗均由中国药科大学动物房提供。2 实验方法2. 1 对大鼠冠脉结扎后心肌缺血的治疗作用 45 取 250-350 g 大鼠 50 只，随机分为 5 组，雌雄各半，乙醚麻醉后固定，剪断第三根肋骨根部，开胸，破心包膜，取出心脏，结扎冠状动脉根部，将心脏迅速放回胸腔，缝合，让其恢复自主呼吸，给予青霉素抗感染。松绑饲养 24 h 后，乌拉坦麻醉，固定，由股静脉给药（1050, 735, 515 m g/kg） ，于给药后 15 m in 由腹主动脉取血 1 ml，离心取血清，测其中国药科大学学报Journal of China PharmaceuticalUniversity 2000, 31（2）:139-142中乳酸激酶（CK） 、乳酸脱氢酶（LDH）浓度。2. 2 对离体心脏灌流的作用 7 取 300- 400 g 豚鼠，棒击头部，迅速开胸取出心脏，置于 4灌流液中，挤净残留血液，由主动脉插管，按 Langendorf 装置以乐氏液进行心脏灌流，正常灌流 15min 后，给予复方制剂（10 m g/kg） ，分别于给药后 1、2、5 min 记录心脏收缩频率、幅度和冠脉流量，以百分率变化计算，并作统计学处理。2. 3 对由垂体后叶素引起的大鼠心肌缺血模型的治疗作用 4 取 180220 g 健康小鼠 50 只，雌雄各半，随机分为 5 组，iP 乌拉坦麻醉，固定，记录正常 II 电图后，由股静脉以 5 0 m g/m in 速度给予 FDP 复合剂（1050, 735, 515 m g/kg） ，对照组给予等量的生理盐水，阳性对照组采用意大利 Foscum a 公司产品，给药后 2 m in，于另一侧股 iv 垂体后叶素 0. 5u/kg，注射后即刻、5,10,15, 30s 及 1,2,5 m in 分别记录 II 导心电图，以出现第一期或第二期反应为缺血性变化，记为阳性，统计各组阴性率，比较各组差异。第一期反应：注射后即刻至 30 s, T 波抬高，ST 段抬高（超过 0.1 mm） ，尤以 15 s 左右变化最为显著。第二期反应：注射后 30s 至数分钟，T 波低平，双向，倒置，心率减慢，P-R 及 Q-T间期延长。2. 4 对实验犬冠脉结扎后心肌缺血的保护作用 8 12 条健康杂种犬，雌雄不拘，体重 1116 kg, 随机分成 3 组，按文献 4, 5 方法结扎左冠脉前降支后 2 h，给予再灌注，24 h 后处死，测心肌梗塞面积，三组均从结扎后 45 m in开始用药，持续至再灌注后 1h。分别于结扎后 45 m in，给药后 30 m in 抽取血样测定 ATP ,CP 浓度 3, 4。并取心脏称重，在4 8冰冻 30- 50 m in，在心脏结扎线以下，平行冠状沟将心室横切成 5 片，置于硝基四氮唑兰（N-BT）染色 1 5 m in，按文献 6 方法测心肌梗塞范围。 （以梗塞心肌占心室重%（W t/W t）判断梗塞范围和程度） 。3 实验结果3. 1 对大鼠冠脉结扎后心肌缺血的治疗作用结果 结果见表 1Tab 1 .Effects of FDP combined with Dextran-20 on myocardial is chemia after ligation in ratsGroup Dose（mg/kg） CK（U/L） LDH（U/L）ControlFDPFDP+Dextran-20（1:3）FDP+Dextran-20（1:3）FDP+Dextran-20（1:3）/10501050735515868.57±143.69613.76±75.29*551.67±87.50*715.00±238.47*818.57±226.31*1131.43±243.55752.56±125.30*586.67±243.12*603.33±323.03*592.86±286.98*p > 0. 05, *p 0.05 vs FDP group3.2.2 对心率的影响Tab 3. Effects of FDP combined with Dextran on heart rate in the isolated rabbit heartHeart rate increase（%）Group Dose（mg/ml）1min 2min 5minOriginalFDPFDP+Dextran/1010018.9±5.4*19.6±8.2*023.5±7.8*25.1±8.3*020.5±8.4*23.2±9.2*p> 0. 05 vs FDP group3.2.3 对灌流量的影响Tab 4. Effects of FDP combined with Dextran on perfusion flow in the isolated rabbit heartIncrease（%）Group Dose（mg/kg）1min 2min 5minOriginal / 0 0 0FDP 10 14.18±12.53 14.16±13.28 19.92±16.33FDP+Dextran 10 35.39±11.23* 34.83±13.25* 38.79±11.55*p0. 05,*p0. 05 vs FDP groupTab 6. Effects of FDP combined with Dextran on ATP,CP*p> 0. 05,*p 0. 05 vs FDP group结果显示，FDP 复合剂能显著提高心肌梗塞心肌的 ATP 浓度，表明 FDP 可以为缺血心肌提供能量物质，延长其坏死进程，对 CP 浓度有提高趋势，但无显著性差异。3.4.2 对心肌梗塞范围的影响结果Tab 7. Effects of FDP combined with Dextran on myocardialinfarction rangeGroup Dose（mg/kg） Myocardial infarction rangea（%）Control / 22.7±3.2FDP 450 9.2±2.7*FDP+Dextran-20 450 7.5±4.1*p<0. 01 vs control group, p<0. 05 vs FDP group结果显示，FDP 复合剂能显著缩小心肌梗塞范围。4 讨论ATP（umol/g） CP（umol/g）Group After administer30 minBefore Tie upAfter tie up45minAfter administer30 minBeforeTie upAfter tie up45minControl 5.3±1.8 2.5±1.1 2.6±1.0 13.5±1.8 10.3±2.1 10.8±3.0FDP 5.4±1.2* 3.0±1.2* 4.8±1.2* 12.5±1.0* 11.9±4.0* 13.0±2.3*FDP+Dextran-20 5.5±1.6* 3.2±1.5* 5.0±1.3* 13.0±1.2* 12.3±3.0* 13.5±3.0*中国药科大学学报Journal of China PharmaceuticalUniversity 2000, 31（2）:139-1421,6-二磷酸果糖主要是通过刺激磷酸果糖激酶的活性聚增细胞内高能磷酸池，提高细胞内 ATP 浓度，回复细胞极化状态，从而有益于体克、缺氧、缺血损伤。低分子右旋糖苷因其具有扩充血容量，降低血液粘滞性，改善微循环等作用，可防止体克后期弥散性血管内凝血，防止心肌梗塞。通过实验证明，两药合用能显著降低 CK 含量，改善冠脉结扎后的缺血状况;能明显地提高离体兔心的冠脉流量 ;对由垂体后叶素引起的大鼠心肌缺血模型有明显的治疗保护作用，也能显著减少冠脉结扎狗的心肌梗塞面积，较单用 FDP 都有明显的改善。因此，两药合用系从不同分子水平上发挥药理作用，对心肌缺血、心肌梗塞具有良好的协同作用。参考文献1 M arkov AK, Chilliard N, Lehan P, et al. Fructose 1，6-diphosphate, An agent for protection of acutely ischem is myocardium. Circ, 1978, 58（ 11）:982 M arkov AK, Oglethorpe NC, Blake TM，et a 1. H em odynam is electrocardiographic and metabolic effect of fructose 1，6-diphosphate on acute myocardial ischem ia. Am ea rt J，1980,11: 6393 Marmo E, Filippelli A, Marfella A, et al. Fructose-1，6- diphosphate（FDP） ，hem odynam ics and heart metabolism:Proliminary Experimental Studies. J Med, 1982, 13: 4114 中国卫生部药政司新药临床前指导原则汇编 1993， 615 徐叔云，卞