耐药相关蛋白Pgp、GSTπ、TopoⅡ在原发性肝癌中的表达及其临床意义
1耐药相关蛋白 Pgp、GST 、Topo在原发性肝癌中的表达及其临床意义作者：王高雄 李新丰 孙旭日 邱建龙 陈凌岩 叶超平 【摘要 】 目的 探讨原发性肝癌组织中的 P糖蛋白(Pglycoprotein，Pgp) 、谷胱甘肽S 转移酶(glutahioneStransferase，GST) 、DNA 拓扑异构酶(DNAtopoismerase ，Topo) 耐药基因的表达及其临床意义。方法 采用免疫组化方法检测 35 例肝癌组织、 20 例癌旁和 10 例肝硬化组织中 Pgp、GST 、Topo 的表达，并对其组织病理指标及 3 年生存率进行综合分析。结果 35 例肝癌中的Pgp、GST 、Topo 的阳性表达率分别为85.7%、71.4%、31.4%。肝癌组织中 Pgp、GST 表达显著高于癌旁组织及肝硬化组织。Pgp+GST+Topo 阳性表达率为 17.1%，Pgp+GST 、Pgp+Topo 和 GST+Topo阳性率分别为 60%、14.3%、2.8%，其中 Pgp+GST 和GST+Topo 的阳性表达具有相关性(P0.01)。Topo表达阳性者的 3 年生存率低于阴性者。结论 原发性肝癌多药耐药与其Pgp、GST 、Topo 表达有关。对肝癌患者化疗前进行耐药基因检测，对患者化疗用药具有指导意义，有助于联合用药的合理2选择，提高疗效及延长患者生存期。 【关键词】 肝肿瘤； 基因表达； P糖蛋白； 谷胱甘肽S 转移酶 ； DNA 拓扑异构酶Expression and clinical significance of multidrug resistance associatedproteins (Pgp, GST and Topo) in primary hepatocellular carcinoma WANG Gaoxiong, LI Xinfeng, SUN Xuri, QIU Jianlong, CHEN Lingyan, YE Chaoping. Department of Hepatobiliary Surgery, Second Affiliated Hospital of Fujian Medical University, Quanzhou 362000, China【Abstract】 Objective To investigate expressions and clinical significance of multidrug resistance (MDR) genes including Pglycoproein (Pgp), glutathioneStransferase (GST) and DNA topoisomerase (Topo) in tissues of primary hepatocellular carcinoma (HCC). Methods The expressions of Pgp, GST and Topo in tissues from 35 cases with HCC, adjacent tissues from 24 with HCC and tissues from 10 with posthepatitic cirrhosis were detected by 3immunohistochemical method. The histopathological parameters and 3year survival rate were comprehensively analyzed. Results (1) The positive expression rates of Pgp, GST and Topo in 35 cases with HCC were 85.7%, 71.4% and 31.4% respectively. (2) The expressions of Pgp and GST in tissues of hepatic carcinoma were significantly higher than those in adjacent tissues and posthepatitic cirrhosis tissues. (3) The positive expression rates of Pgp+GST+Topo, Pgp+GST, Pgp+Topo and GST+Topo were 17.1%, 60%, 14.3% and 2.8% respectively, of which the expression of Pgp+GST was related to that of GST+Topo (P0.01). (4) The 3year survival rate in group with positive expression of Topo was lower than that in group with negative expression of Topo. Conclusions (1) MDR in HCC is related to expressions of Pgp, GST and Topo. (2) It is of importance to detect expression of MDR gene before chemotherapy, which is helpful for selecting chemotherapy drugs reasonably so as to improve the curative effect and lengthen the survival time of cases.【Key words】 Liver tumors; Gene expression; 4Pglycoprotein; GlutathioneStransferase; DNAtopoismerase原发性肝癌是我国常见的恶性肿瘤。化疗为肝癌综合治疗的重要组成部分。目前多采用联合方案，凭临床医师的主观判断用药，疗效不理想。近年研究发现肿瘤细胞产生多药耐药是重要原因。P 糖蛋白(Pglycoprotein ，Pgp) 、谷胱甘肽S 转移酶(glutahioneStransferase，GST) 、DNA 拓扑异构酶(DNAtopoismerase ，Topo) 等是恶性肿瘤产生多药耐药的物质基础1-2 。据此，笔者取化疗前肝癌组织行肿瘤细胞的耐药性检测，探讨耐药相关机制，以期为防止多种耐药性的诱导提供一定的临床病理依据。1 材料与方法1.1 临床资料收集我院 1999-2003 年 35 例术前未行化疗的肝癌患者手术切除或肝穿的新鲜癌组织、20 例癌旁组织及 10 例肝炎后肝硬化活体肝组织标本。所有标本均经病理学检查确诊,其中肝细胞癌 34 例，胆管细胞癌 1 例。病理分级：高分化 8 例，中分化 22 例，低分化5 例。男 27 例，女 8 例；年龄 2671 岁，平均 48.5 岁。31 例行5肝癌切除术，1 例行术中射频消融治疗， 3 例行射频消融+ 经皮酒精局部注射治疗。按 UICC TNM 分期，期 20 例，期 5 例，A期 9 例，B 期 1 例。除 1 例围手术期死亡外余 34 例术后均获得随访，随访率 100%，随访时间 660 个月。1.2 免疫组织化学染色1.2.1 免疫组化试剂及方法：鼠抗人 Pgp 单抗JSB1、GST 、Topo单抗及 SP 试剂试剂盒购自福州迈新公司，操作步骤按试剂盒说明进行。1.2.2 结果判断：阳性细胞显棕褐色颗粒，Pgp 定位于细胞膜或细胞质上(图 1)，GST 定位于细胞质和部分细胞核(图 2)，Topo定位于细胞核内(图 3)。根据肿瘤细胞的阳性数及其染色反应的深浅进行判定。用高倍视野随机计数 500 个肿瘤细胞，按其中的阳性细胞所占的比例定为 4 级：阳性细胞数 5%为阴性(-)，6%25%为弱阳性(+)，26%50%为中度阳性() ，51%为强阳性() ，阳性对照由公司提供。1.3 统计学分析率的比较采用较正 2 检验，生存期限比较采用秩和检验。62 结果2.1 Pgp、GST 、Topo在各组织中的表达Pgp、GST 、Topo在肝癌中的阳性率分别为85.7%(30/35)、71.4%(25/35)、31.4%(11/35)，在癌旁肝组织中的阳性率为 40%(8/20)、35%(7/20)、35%(7/20) ，在肝硬化组织中阳性率为 20%(2/10)、10%(1/10)、30%(3/10) 。其中Pgp、GST 在肝癌中表达显著高于癌旁肝组织及肝硬化组织(P 0.05)，而 Topo在肝癌及癌旁组织、肝硬化组织中表达比较差异无统计学意义(P0.05) 。Pgp+GST 与GST+Topo 、Topo+Pgp 及 Pgp+GST+Topo 的阳性表达具有相关性(P0.01) 。见表 1。表 1 Pgp、GST 、Topo 基因表达的相互关系2.2 Pgp、 GST、 Topo表达与临床病理指标的关系 Pgp、GST 与肿瘤大小、肿瘤数目、门脉癌栓、肿瘤分期、病理分级、肝硬化无明显相关性。Topo表达与门脉癌栓相关，而与其余病理指标无明显相关性。见表 2。2.3 肝癌组织中 Pgp、GST 、Topo阳性表达与年龄关系3 种耐药基因在 3060 岁年龄段阳性表达率较高。见表 3。 表 3 7肝癌组织中 Pgp、GST 、Topo 的表达与年龄关系 耐药基因的阳性例数年龄2.4 Pgp、GST 、Topo表达与预后关系在随访的 34 例肝癌患者中，生存期3 年者的Pgp、GST 、Topo 阳性表达率分别为 66.7%(12/18)、61.2%(11/18)、16.7%(3/18) ，生存期3 年者分别为87.5%(14/16)、75.0%(12/16)、43.7%(7/16)。Pgp 、GST 阳性表达率在生存期3 年者与生存期<3 年者中比较差异无统计学意义，Topo 阳性表达率两者比较差异有统计学意义(P0.01)。3 讨论化疗是原发性肝癌综合治疗中的重要手段，而多药耐药的产生是化疗失败的主要原因之一。许多研究证明肿瘤细胞产生耐药是多种耐药机制共同作用结果，耐药相关蛋白 Pgp、GST 、Topo表达可能在肿瘤细胞多药耐药性的产生中具有重要作用，它们有着相关的耐药机制3 。Pgp 是存在于耐药细胞表面一种相对分子质量为 170×103 的膜糖蛋白，是细胞产生多药耐药的分子基础。其耐药机制是将肿瘤8细胞内化疗药物泵出细胞外，使肿瘤细胞内化疗药物浓度降低，导致耐药4 。本组肝癌患者 Pgp 阳性表达率高达 85.7%，表明大部分肝癌细胞在化疗前具有 Pgp 表达，是肝癌患者原发耐药的主要因素之一，提示肝癌细胞对由 Pgp 所介导的主要抗癌药物如阿霉素等产生耐药倾向，在联合化疗时对于阿霉素类药物的选择要慎重考虑。GST 主要表达于细胞质，是一种多功能药物代谢酶，具有解毒功能。它能使肿瘤细胞对某些化疗药物的抗性升高，并且还可抑制烷化剂等化疗药物引起的癌细胞 DNA 交联，从而造成癌细胞耐药，导致化疗失败5 。本组资
