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用教程一、 打开一个质粒图谱文件，在 选择 如下界面：显示质粒图谱的酶切位点。右侧箭头可显示不同厂家出售的酶。显示质粒图谱的开放阅读框及转录方向。点击其显示的箭头可显示该片段大小、等一些信息。显示片段名称。给非编码序列命名：如多克隆位点。先找到质粒图谱中的多克隆位点的第一个酶切位点和最后一个酶切位点。点击左侧 ，找到两个酶切位点之间的序列。到如下界面：显示编码的氨基酸序列，有缩写和全写两种。到如下界面：到如下界面：显示各个已命名片段的一些特点。二、 击其中一个箭头，按 出以下窗口：该片段命名。择该片段的类型，右侧箭头代表阅读方向。择颜色。2. 给非编码序列命名：如多克隆位点。先找到质粒图谱中的多克隆位点的第一个酶切位点和最后一个酶切位点。点击左侧 ，找到两个酶切位点之间的序列。3. 给质粒图谱增加引物序列：按 入引物序列，找到质粒序列对应位置，点击dd 出该界面：按上下游引物选择 是 可给该引物命名，随后即可显示该引物在图谱 的位置。三、 创建新 打开 击 出以下窗口：在 口下输入 列，并对该文件命名，点击 是点击 入 某序列的 击 此时弹出如下窗口：击 该序列进行命名注释。创建质粒图谱文件方法相同。四、列文件，色箭头代表的是上面一条链编码序列，绿色箭头代表的是下面一条链编码序列。击 右侧箭头，选择 得到编码序列的所有情况，其中 代表的是终止密码子。据内含子的位置，点击 入内含子碱基位置。点击 到如下图：紫色粗带为外显子，虚线为内含子部分。五、引物、物绘制：在多克隆位点处找到合适的两个酶切位点。如 目的基因两侧截取 15列，点击 dd 择 图：给该引物命名，然后点击 该引物上添加之前选择好的酶切位点序列，如图选择了 解 然后在该序列 5端上添加数个碱基作为保护碱基。点击完成。下游引物设计相同，不再赘述。目的基因上截取一小段包含要突变位点的序列，点击dd 该引物命名，在 5序列突变位点的三个碱基画黑，如图：点击 择突变成的氨基酸，点击 可获得该突变引物，点击 获得反向引物。六、择合适的两个酶切位点，如 图：点击 击 盘 +击 of 选择插入的目的片段来源。点击上述同样的酶，给该重组质粒命名，点击 、 模拟融合克隆1. 打开一个需要插入片段质粒图谱，点击 出以下窗口：2. 点击 到想要发生替换的位点。3. 点击 选择替换片段的另外一个质粒图谱。此时弹出另外一个质粒图谱图样。4. 点击用于替换的片段，观察该片段阅读方向与被替换质粒位点的方向是否一致，如不一致，点击 更换方向。5. 选择后，点击 击 时即形成融合后的质粒图谱。击 择保存。