操作规程——小鼠组织收集
一、目的一、目的 小鼠是应用于流感病毒研究的常用动物模型。而, 实验,是动物实验操作的基本方法。本规程为规范实验操作、保证样本质量、操 作安全而制定。 二、范围二、范围 适用于中国国家流感中心所有技术研究人员从事小鼠动物实验。 三、程序三、程序 (一)生物安全要求(一)生物安全要求 根据所使用病毒的生物安全条件在 ABSL-2、 ABSL-3、 ABSL-4 条件下操作。 (二)材料(二)材料 1离心管、冻存管 2Hanks 液:Gibco(Cat.24020-117) 3无菌细胞培养平皿:BD Falcon (Cat.353003) 4留滞针头:临床儿童用 5眼科剪、眼科镊 (三)实验步骤(三)实验步骤 1将小鼠以颈椎脱臼法处死,仰卧,固定四肢。 2依次用碘酒及 75%酒精消毒腹部,以镊子提取腹壁,剪去一小块皮肤, 暴露腹膜,用镊子撕去皮毛至颈部,将小鼠置于无菌平皿内。 3从颈部暴露气管,在气管上部插入塑料软管留滞针(7#),以手术线固 定,用 1mL PBS 反复 35 次冲洗呼吸道,收集灌洗液,离心后保留上清。 如需呼吸道细胞,可反复 35 次 1mL PBS 冲洗,1500rpm,10min,收集 细胞。 4暴露腹腔脏器,用无菌眼科剪采集肝、脾、肾标本,放入置于干冰上的 操作规程操作规程小鼠组织收集小鼠组织收集 离心管或冻存管内,液氮长期保存, 或分别放在 5mL Hanks 液处理。 5用眼科剪剪断肋骨,暴露肺部,用眼科剪剪取肺及气管,放入置于干冰 上的离心管或冻存管内,液氮长期保存,或放在 5mL Hanks 液处理。 6用眼科剪剪开头颅骨,用镊子摘取脑组织,放入置于干冰上的离心管或 冻存管内,液氮长期保存,或放在 5mLHanks 液处理。 7用眼科剪剪开鼻部皮肤,从上腭剪取鼻部,放入置于干冰上的离心管或 冻存管内,液氮长期保存, 或分别放在 5mL Hanks 液处理。