化妆品中己脒定二（羟乙基磺酸）盐等7种组分检验方法2021

化妆品中己脒定二（羟乙基磺酸）盐等7种组分检验方法Hexamidine Diisethionate and other 6 kinds of components1 范围本方法规定了高效液相色谱法测定化妆品中己脒定二（羟乙基磺酸）盐等7种组分的含量。本方法适用于水剂类、膏霜类、乳液类、凝胶类、油剂类、粉类和蜡基类化妆品中己脒定二（羟乙基磺酸）盐等7种组分含量的测定。本方法所指的7种组分包括己脒定二（羟乙基磺酸）盐、氯己定、十二烷基三甲基溴化铵、十二烷基二甲基苄基氯化铵、苄索氯铵、十四烷基二甲基苄基氯化铵、十六烷基二甲基苄基氯化铵。2 方法提要样品经提取溶剂提取后，经高效液相色谱仪分离，二极管阵列检测器检测，采用保留时间和紫外光图谱定性，峰面积定量，以标准曲线法计算含量。本方法中各组分的检出限、定量下限和取样量为1 g时的检出浓度，最低定量浓度见表1。表1 7种组分的检出限、定量下限、检出浓度和最低定量浓度序号组分名称检出限（ng）定量下限（ng）检出浓度（g/g）最低定量浓度（g/g）1己脒定二（羟乙基磺酸）盐102010202氯己定103010303十二烷基三甲基溴化铵1504001504004十二烷基二甲基苄基氯化铵40100401005苄索氯铵40100401006十四烷基二甲基苄基氯化铵40100401007十六烷基二甲基苄基氯化铵40100401003 试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。3.1 甲醇，色谱纯。3.2 乙腈，色谱纯。3.3 甲酸，色谱纯。3.4 三氟乙酸，色谱纯。3.5乙二胺四乙酸二钠（EDTA-2Na），分析纯。3.6 正己烷，色谱纯。3.7 二甲亚砜，色谱纯。3.8三氟乙酸溶液（0.1 %）：量取三氟乙酸（3.4）1 mL，准确称取乙二胺四乙酸二钠（3.5）0.0067 g，用水稀释并定容至1000 mL，摇匀。3.9二甲亚砜乙腈溶液：量取二甲亚砜（3.7）20 mL，加乙腈定容至100 mL，摇匀，即得。3.10甲酸溶液（1 %）：量取甲酸（3.3）10 mL，用水定容至1000 mL，摇匀。3.11提取溶剂：准确量取1 %甲酸溶液（3.10）500 mL，准确加入500 mL甲醇（3.1），摇匀，即得。3.12混合标准储备溶液：精密称取7种组分标准品适量（精确至0.0001 g），用甲醇溶解制得混合标准储备溶液，各组分浓度见表2。表2 己脒定二（羟乙基磺酸）盐等7种组分混合标准储备溶液浓度序号中文名混合标准储备溶液浓度（g/L）1己脒定二（羟乙基磺酸）盐0.402氯己定0.603十二烷基三甲基溴化铵8.04十二烷基二甲基苄基氯化铵2.05苄索氯铵2.06十四烷基二甲基苄基氯化铵2.07十六烷基二甲基苄基氯化铵2.04 仪器和设备4.1高效液相色谱仪，二极管阵列检测器。4.2超声波清洗器。4.3 0.22 m滤膜。4.4离心机。4.5涡旋振荡器。4.6 天平。5 分析步骤5.1混合标准系列溶液的制备取混合标准储备溶液（3.12），用提取溶剂（3.11）稀释得混合标准系列溶液。各组分浓度见表3。混合标准系列溶液现用现配。表3 己脒定二（羟乙基磺酸）盐等7种组分混合标准系列溶液浓度名称混合标准系列溶液浓度（g/mL）己脒定二（羟乙基磺酸）盐（以己脒定计）2.05.010204080氯己定3.07.5153060120十二烷基三甲基溴化铵401002004008001600十二烷基二甲基苄基氯化铵102550100200400苄索氯铵102550100200400十四烷基二甲基苄基氯化铵102550100200400十六烷基二甲基苄基氯化铵102550100200400注：实验室可根据实际情况调整合适的标准系列溶液浓度范围。5.2样品处理准确称取样品1.0 g，精确至0.001 g，置于具塞比色管中，加入提取溶剂（3.11）8 mL，涡旋振荡30 s，使试样与提取溶剂（3.11）充分混匀，超声提取30 min（工作频率2043 KHz，200 W），用提取溶剂（3.11）定容至10 mL，摇匀，再加入正己烷（3.6）2 mL，涡旋振荡60 s，以10000 r/min离心5 min。弃去上层正己烷层，取下层溶液经0.22 m滤膜过滤，滤液作为待测溶液。粉类基质样品先加入1 mL水，蜡基样品先加12 mL四氢呋喃，使样品均匀分散，再加入提取溶剂（3.11）超声提取。5.3参考色谱条件色谱柱： C18柱（5 m，4.6250 mm），或等效色谱柱。流动相：溶液A：三氟乙酸溶液（3.8）；溶液B：乙腈（3.2）；梯度洗脱程序见表4： 表4 梯度洗脱程序时间（min）A(%)B(%)0.00901040.0109043.0109043.1901048.09010流速：1.0 mL/min；柱温：30 ；进样量：10 L；检测波长：210 nm；己脒定二（羟乙基磺酸）盐、氯己定可采用270 nm。5.4 测定在“5.3”参考色谱条件下，取混合标准系列溶液（5.1）分别进样，进行色谱分析，以标准系列溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。取“5.2”项下的待测溶液进样，进行色谱分析，根据保留时间和紫外光图谱定性，测得峰面积，根据标准曲线得到待测溶液中各测定组分的浓度，按“6”计算样品中各测定组分的含量。6分析结果的表述6.1计算式中：样品中己脒定二（羟乙基磺酸）盐等7种组分的含量，g/g；试样溶液中己脒定二（羟乙基磺酸）盐等7种组分的浓度，g/mL；V样品定容体积，mL；m样品取样量，g。D稀释倍数（如未稀释则为1）。在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过算术平均值的10 %。6.2 回收率和精密度多家实验室验证在定量下限浓度附近回收率为84.7%118.2%，相对标准偏差小于等于5.4%；其他浓度回收率为83.3%115.0%，相对标准偏差小于等于5.3%。7 图谱图1 标准溶液HPLC参考色谱图（1.己脒定二（羟乙基磺酸）盐，2. 氯己定，3. 十二烷基三甲基溴化铵，4. 十二烷基二甲基苄基氯化铵，5. 苄索氯铵，6. 十四烷基二甲基苄基氯化铵，7. 十六烷基二甲基苄基氯化铵）附录 A （规范性附录） 己脒定二（羟乙基磺酸）盐等7种组分信息表序号标准品相对分子质量纯度/%CAS分子式1己脒定二（羟乙基磺酸）盐1606.7195659-40-5 C22H32N4O6S2氯己定2505.459855-56-1C22H30Cl2N103十二烷基三甲基溴化铵3308.34951119-94-4C15H34NBr4十二烷基二甲基苄基氯化铵339.9995139-07-1C21H38NCl5苄索氯铵448.0897121-54-0C27H42ClNO26十四烷基二甲基苄基氯化铵368.0495139-08-2C23H42NCl7十六烷基二甲基苄基氯化铵396.0995122-18-9C25H46NCl注：（1）己脒定与己脒定二（羟乙基磺酸）盐、己脒定对羟基苯甲酸盐保留时间一致，测定结果应根据相对分子质量进行换算。（2）氯己定与氯己定及其二葡萄糖酸盐、二醋酸盐保留时间一致，测得结果均以氯己定计。（3）如样品中为十二烷基三甲基氯化铵，测定结果应根据相对分子质量进行换算。附录B（资料性附录）己脒定二（羟乙基磺酸）盐等7种组分的结果确证如高效液相方法中检出结果存在不确定因素，可采用液相色谱-质谱法进行确证。在相同的试验条件下，如样品中检出的色谱峰的保留时间与标准溶液中对应成分一致，所选择的监测离子对的相对丰度比与相当浓度标准溶液的离子对相对丰度比的偏差不超过表1规定范围，则可判断样品中存在对应的待测成分。表1 结果确证时相对离子丰度比的最大允许偏差相对离子丰度（K）K50%50%K20%20%K10%K10%允许的最大偏差20%25%30%50%B.1参考色谱条件色谱柱：C18柱（2.7 m，4.6100 mm），或等效色谱柱；流动相：测定己脒定和氯己定：溶液A：0.1 %三氟乙酸水溶液；溶液B：乙腈； 测定其他5种组分：溶液A：5 mmol/L乙酸铵-水溶液；溶液B：5 mmol/L乙酸铵-甲醇溶液；表2 梯度洗脱程序时间（min）A(%)B(%)0.00 9551.00 9553.00 40606.00 59512.00 59512.10 95515.00 955流速：0.45 mL/min；柱温：30 ；进样量：2 L。B.2参考质谱条件离子源：电喷雾离子源（ESI）；监测模式： 正离子多反应监测模式；监测离子对及相关电压参数设定见表3；气帘气流速：10 L/min；碰撞气流速：12 L/min；离子源气1流速：50 L/min；离子源气2流速：50 L/min；离子源加热温度：500 ；离子化电压： 5500 V。表3 质谱监测离子对及相关电压参数设定表序号组分名称母离子（m/z）子离子（m/z）DP（V）CE（eV）1十二烷基二甲基苄基氯化铵24890.98048156.180252苄索氯铵412.43201103791.1110753十四烷基二甲基苄基氯化铵33291.110059240.2100304十六烷基二甲基苄基氯化铵360911006358.1100635己脒定*355.2120.210055137.2100406氯己定505.3336.410027170.1100517十二烷基三甲基溴化铵228.360.21002757.210038注：己脒定为己脒定二（羟乙基磺酸）盐的游离态；当采用不同质谱仪器时，仪器参数可能存在差异，测定前应将质谱参数优化到最佳。