半薄切片技术介绍课件

半薄切片技术介绍,半薄切片图片,钙化骨组织切片 眼球附近组织的连续切片,半薄切片：(厚度为 0.5m 1m ),半薄切片进行光学显微镜观察的目的：,可以根据半薄切片精确定位。 了解样品包埋质量，以确定是否继续做超薄切片； 与石蜡切片、超薄切片进行对比研究,半薄切片的优点：,克服了超薄切片的盲目性和电镜视野的局限性 清晰度、分辨率远优于石蜡切片，视野也大于超薄切片，有利于获得高质量的光镜图像 也是电镜超薄切片技术中一种有效的定位方法。,电镜超薄技术中如何应用呢？,电镜是观察组织细胞超微结构的一种手段。但由于切片太小，有时难于观察到目标结构，为此需大量制备样品，造成工作量大且消耗多。为使超薄切片能精确地切到目标部位，在做超薄切片前要做半薄切片来进行定位。,应用： 胚胎学，病理学，动植物细胞学研究中一种普遍的切片方式,半薄切片主要步骤,取材 固定 漂洗、脱水 渗透、包埋 半薄切片 半薄切片染色,每一步都是关键,任何环节的疏忽都会导致制片的失败,FAA固定液,制备：福尔马林5-冰醋酸5-70%酒精90 应用：半薄/石蜡切片 适用：一般固定根、茎、叶、花药、子房组 织切片。 补充说明： 幼嫩材料用50%酒精代替70%酒精，防止材料收缩；加入5%甘油可防固定液蒸发和材料变硬。,卡诺固定液,渗透迅速，固定根尖和花药只需30-60分钟，但固定时间不能太久，一般不超过一天,Leica RM2265旋转薄切片机,Leica RM2265旋转薄切片机制作半薄切片（厚度0.25-5m）使用步骤：,1接通电源，打开主开关 2选择切片厚度 3安放包埋块于切片头中央位置，旋转固定螺丝，将样品按要求固定挟紧 4安放粘有水槽的玻璃刀，并将玻璃刀口对准样品 5选择切片模式（自动/手动），切片计数开始 6取切片的材料：捞片，置于载玻片上，加热，脱树脂处理，对材料染色，着色后冲洗、封藏、烘干,半薄切片染色,常规染色方法有： 甲苯胺兰染色法、天青美兰染色法、碱性复红法、苏木素-伊红法、HE染色法和Giemsa染色法等。 无论哪种方法都需预先做处脱树脂处理，否则染料不宜渗入，影响染色效果。,脱树脂处理：,过程将干燥切片插入氢氧化钾无水酒精饱和溶液l015 min后，无水酒精洗三次，经梯度酒精下行，水洗后染色。此过程即繁琐又费时，所以选择理想的染色剂非常重要。,染色原则：先用碱性染料染再用酸性染料染,谢谢！,