QPCR实时荧光定量核酸扩增检测系统
QPCR实时荧光定量核酸扩增检测系统英文全名是Real-time Quantitative PCR Detecting System。即实时荧光定量核酸扩增检测系统,也叫实时定量基因扩增荧光检测系统,简称QPCR。底物(substrate) : dATP,dGTP,dCTP,dTTP;聚合酶 (polymerase) : 依赖DNA的DNA聚合酶; 模板 (template) : 解开成单链的DNA母链; 引物 (primer) : 一小段RNA; 其他的酶和蛋白质因子荧光定量PCR在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法荧光基团通过不同的原理(Taqman or SYBR)与DNA产物结合,荧光信号的增加与DNA产物即PCR产物的增加完全同步实时检测理想的PCR反应: X=X0*2n非理想的PCR反应: X=X0 (1+Ex)nTaqMan-水解型杂交探针 5端报告基团(Reporter, R) 3端荧光淬灭基团(Quencher, Q) 探针完整,R所发射的荧光能量被Q基团吸收 ,无荧光, R与Q分开,发荧光。Taq酶有 53外切核酸酶活性,可水解探针 每产生一条DNA链,就切断一条探针;每切断一条探针,就产生一个单位信号;信号强度与结合探针的DNA分子数成正比