艾滋病梅毒丙肝检测与解释
HIV TP HCV的检验及意义 HIV实验室检测 检测样本 HIV抗体 酶免 血清 血浆 尿液 快速检测 血清 血浆 全血 唾液 CD4 抗凝全血 病载 基因型 耐药 血浆 样本保存 抗体检测 短期 1周 内进行检测的可存放于2 8 一周以上应存放于 20 以下 筛查阴性样品 建议至少保存1 2个月 筛查阳性样品 无论确证结果如何 均应将剩 余的样品保存至少10年 核酸检测 血浆4天内进行检测的可存放于4 3个月以内应存放于 20 以下 3个月以上应置 于 70 以下 CD4 室温 18 25 保存和运输 要求48小 时内染色 染色后6小时内分析 如采血后24小 时内染色 可在染色后24小时内分析 HIV抗体检测 筛查试验 酶联免疫吸附试验 ELISA 化学发光或免疫荧光试验 快速检测 RT 确证试验 免疫印迹试验 WB 条带免疫试验 放射免疫沉淀试验 RIPA 免疫荧光试验 IFA 初筛和复检流程 样品 初筛试验 筛查试剂 阳性反应阴性反应 复检试验 原有试剂 另一不同原理 或厂家 试剂或另外两种 不同原理 或厂家 试剂 均阳性反应一阴一阳均阴性反应 确证试验报告阴性 图1 HIV抗体筛查检测流程 确证流程 质量控制 试剂盒内部对照 按照试剂盒要求设置 使用室内质控品 外购 阳性对照 样本稀释 ELISA检测 20次内 即刻法质控 20次后 Levey Jennings质控图 更换试剂厂家必须重新制作质控图 同种试剂不同批号可继续使用 注明批号 发现失控 位移及时查找原因 必要时重新开始质控 快速检测 更换批号进行质量验证 注意反应时间 温度 数量控制 设备检定 维护 强检设备 酶标仪 移液器 高压锅 温度计 可自行比 对 自行维护 生物安全柜 洗板机 洗眼器 水平 梅毒 旋转仪 温度控制 冰箱 温箱 水浴箱内放置经检定 比对 的温 度计 高压灭菌放置指示卡 洗眼器定期进行维护 SOP文件 1 样品的接收 登记 处理 保存和运输 2 检测方法和步骤 3 试剂使用和保存 4 仪器的使用维护和校准 5 质量控制要求及程序 6 结果解释与报告 7 保密程序 8 实验室数据 相关文件记录与保存 9 不确定样品追踪和处理 10 实验室安全防护及实验室的清理和消毒 实验室记录 检测登记表 试验原始记录 ELISA 快速 RPR TURST 报告单 化验单 复检化验单 筛查阳性填写 信息收集完整 仪器使用 维护保养记录 质控资料 消毒记录 废弃物处理登记 冰箱温度记录 人员健康档案 体检 疫苗接种记录 化验单 体检报 告 实验室生物安全 实验室 级生物安全实验室 BSL 2 建立安全制度 S SOP 意外事故处理预 案 信息安全及保密制度 培训和管理 全员培训 标准防护原则 个人防护 防护用品与设施 健康监护 安全操作 样品采集与管理 仪器设备使 用 利器使用 消费与污物处理 梅毒实验室检测技术 梅毒螺旋体 梅毒的病 原体 分类 螺旋体目 Spirochaetales 螺旋体科 Spirochaetaceae 密螺旋体属 Treponema 苍白螺旋体种 Treponema pallidum 分几个亚种 梅毒螺旋体 TP 小而纤细的螺旋状微生物 长5 20 m 粗细4年虽已无性传播 但妊娠时仍可传染给胎儿 病期越长 传染 性越小 常用梅毒实验室检测方法 病原学检测 血清学检测 病原学检查 原理 一期 二期梅毒时 取硬下疳 扁 平湿疣 黏膜斑等皮损部位组织液或淋巴结穿 刺术得到的组织液 在暗视野显微镜下 光线 从聚光器的边缘斜射到涂片上的梅毒螺旋体而 发出亮光 从而可根据其特殊形态和运动方式 进行检测 方法 1 暗视显微镜检查 2 镀银染色法 3 核酸检测 血液标本 注 梅毒螺旋体目前体外人工培养还没有获得成功 仅能通过接种兔睾丸等部位进行有限增殖 病原学检查的临床意义 螺旋体检查是诊断早期梅 毒的最佳方法 对于患者 的早期诊断 及时治疗 预后和尽早切断传染源都 有十分重要的意义 如未见到梅毒螺旋体 并 不能排除患梅毒的可能性 梅毒血清学检测方法 1 非梅毒螺旋体抗原血清学试验 非特异性梅毒抗体 2 梅毒螺旋体抗原血清学试验 特异性梅毒抗体 两类方法 问题 问题 为什么梅毒诊断需要上述两类血清学检测方为什么梅毒诊断需要上述两类血清学检测方 法 法 非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理 梅毒螺旋体一旦感染人体 宿主可对螺旋体表面的脂 质作出免疫应答 产生抗类脂抗原的抗体 非特异性 抗体 未经治疗的病人 其血清内的非特异性抗体可长期存 在 经正规治疗后 非特异性抗体可以逐渐减少滴度 至转为阴性 问题 问题 临床上非梅毒螺旋体抗原血清学试验为什临床上非梅毒螺旋体抗原血清学试验为什 么需要做定性和定量两种检测方法 么需要做定性和定量两种检测方法 非梅毒螺旋体抗原血清学原理 方法包括 1 快速血浆反应素环状卡片试验 RPR 2 甲苯胺红不加热血清试验 TRUST 3 性病研究实验室试验 VDRL 等 基本成分是心磷脂 卵磷脂和胆固醇 抗原抗体结合形成复合物 凝集成网状沉淀颗粒 被肉眼所见 上述方法的敏感性和特异性都基本相似 非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理示意图 非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点 1 仪器 水平旋转仪 转速 转 幅 2 定性试验 n加样 吸取0 05mL血清 浆 放在卡片圈中 并均匀地涂布在整个圈内 n加抗原 将抗原轻轻摇匀 用9号针头加1滴抗原 n反应 水平旋转仪旋转8分钟 23 29 亮光下观察结果 滴 mL 1滴 ul 非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点 1 仪器 水平旋转仪 转速 转 幅 2 定性试验 n加样 吸取0 05mL血清 浆 放在卡片圈中 并均匀地涂布在整个圈内 n加抗原 将抗原轻轻摇匀 用9号针头加1滴抗原 n反应 水平旋转仪旋转8分钟 23 29 亮光下观察结果 60滴 mL 1滴 17ul 100r min 约18mm 非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点 3 定量试验 n稀释夜准备 在反应纸板圈内加入50uL生理盐水 根据需要确定圈数 勿将盐水涂开 n加样 吸取50uL血清 浆 与各圈中盐水作系列稀释 并涂布整个圈内 n 下同定性试验 1 21 41 81 16 1 321 641 2561 1281 512 定量试验结果判断 血清稀释度 结 果 1 21 41 81 16 问题 定量试验原倍血清滴度是多少 问题 定量试验原倍血清滴度是多少 问题 定量试验血清稀释需要使用试管吗 问题 定量试验血清稀释需要使用试管吗 非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点 3 定量试验 n稀释夜准备 在反应纸板圈内加入50uL生理盐水 根据需要确定圈数 勿将盐水涂开 n加样 吸取50uL血清 浆 与各圈中盐水作系列稀释 并涂布整个圈内 n 下同定性试验 1 1 1 21 41 81 16 1 321 641 2561 1281 512 定量试验结果判断 血清稀释度 结 果 1 11 21 41 81 16 1 1 1 2 1 8 TRUST 1 16 非梅毒螺旋体抗原血清学试验结果判断 RPR 1 256 1 11 21 41 81 16 1 11 21 41 81 16 1 321 641 1281 2561 512 1 321 641 1281 2561 512 非梅毒螺旋体抗原血清学试验临床意义 早期梅毒 一期 二期 经足量规则抗梅毒治疗 后 一期梅毒1年后转为阴性 二期梅毒2年后转为阴性 晚期梅毒 治疗后血清滴度下降缓慢 2年后 约50 病人血清反应仍为阳性 非梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义 非梅毒螺旋体抗原血清试验方 法简单 快速 敏感性和特异 性较好 适用于大量人群的筛 查 因治疗后血清滴度可下降并阴 性 故可作为疗效观察 判愈 复发或再感染的指征 梅毒 病期 敏感性 特异性 一期 86 77 99 二期100 隐性98 95 100 一般滴度 1 8 但不排除95 补充试 验阳性 b 所有筛查试验阳性标本 均进行RIBA 或先 作HCV RNA检测 阴性标本再测RIBA 补充实验 免疫印迹试验 HCV RNA检测 HCV抗体的检测方法 筛查试验 酶联免疫吸附试验 胶体金快速试验 化学发光试验 免疫荧光试验 临床诊断相关的监测策略和结果报告 1 筛查试验 初筛试验呈阳性反应 不能出具阳性 报告 必须进入复检程序 用原有试剂双 孔或原有试剂加另一种不同原理 或厂家 试剂进行复检 筛查试剂 样品 阴性反应 初筛试验 阳性反应 复检试验 均阴性反应一阴一阳均阳性反应 补充试验 原有试剂双孔或原有试剂加另 一种不同原理 或厂家 试剂 报告阴性 HCV临床诊断筛查检测流程 样品 初筛试验 筛查试剂 阳性反应阴性反应 复检试验 原有试剂 另一不同原理 或厂家 试剂或另外两种 不同原理 或厂家 试剂 均阳性反应一阴一阳均阴性反应 确证试验报告阴性 HIV抗体筛查检测流程 复检阳性反应样品 阳性反应 免疫印迹试验 阴性反应 报告 阴性 HCV补充试验检测流程 1 3 不确定 核酸检测 阳性反应阴性反应 报告 不确定 报告 阳性 2 复检呈阳性反应的样品 进行补充试验 临床诊断补充试验检测流程 2 仅限于检测方法 试剂给出了特定 的阈值 与免疫 印迹法比较 其 阳性预测值不低 于95 时使用 一般采用S CO 比值 说明书中 会给出此值 检测结果的解释 1 检测结果的解释 2 Se Sp PPV NPV 漏检率 误诊率 不做 补充试验 85 6988 5792 4579 4914 0411 43 做 补充实验 96 4910093 2293 943 510 补充试验策略检测指标的价值 为了出具真实可靠的临床诊断报告 补充实验还是非常有必 要进行的 关于HCV抗原 HCV抗原检测是近几年快速发展起来的一种新 的检测HCV指标 与HCV RNA检测相平行 定 量检测可用于疗效评价与预后判断 HCV感染窗口期 免疫功能受损或缺陷的群体未发生HCV血清阳 转 如HIV感染者 长期透析的肾病患者 器官移植患者或先天性免 疫功能缺陷患者 注意 由于血清中HCV抗原含量很低 用常规 的ELISA等方法很难检出低滴度的样品 阴性的 结果并不能排除HCV现症感染的可能 HCV抗原检测并没有进入临床实验室成为常规 检测项目 现阶段怎么办 l加强与临床沟通 交流HCV检测技术特点 l利用备注栏 做好解释 如 复检 建议 病毒核酸 检测 l关注标本状况 排除干扰因素 l了解历史记录 或与其他检验结果核对 l了解病人临床情况 THE END
