家兔gh、ghr及mstn基因多态性及其与产肉性状的关系

S h a n d o n gA g r i c u l t u r a lU n i v e r s i t y D i s s e r t a t i o nf o rM a s t e rD e g r e e P o l y m o r p h i s m s o fG H , G H Ra n dM S T Na n dT h e i r R e l a t i o n s h i p sw i t hM e a t P r o d u c t i o nT r a i t s i nD o m e s t i cR a b b i t s D e p a r t m e n t ：C o l l e g eo f A n i m a lS c i e n c ea n dT e c h n o l o g y M a j o r ：A n i m a lG e n e t i c sa n d B r e e d i n g C a n d i d a t e ：Q i a oX i b o S u p e r v i s o r ：F a nX i n z h o n g ，J i a n gY u n l i a n g 2 0 1 0 0 6 1 0 r r- Y 1 7 8 帆黜 关于学位论文原创性和使用授权的声明 本人所呈交的学位论文，是在导师指导下，独立进行科 学研究所取得的成果。对在论文研究期间给予指导、帮助和 做出重要贡献的个人或集体，均在文中明确说明。本声明的 法律责任由本人承担。 本人完全了解山东农业大学有关保留和使用学位论文的 规定，同意学校保留和按要求向国家有关部门或机构送交论 文纸质本和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权山东 农业大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据 库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文 和汇编本学位论文，同时授权中国科学技术信息研究所将本 学位论文收录到中国学位论文全文数据库并向社会公众 提供信息服务。 保密论文在解密后应遵守此规定。 论文作者签名： 导师签名； 盗变邋 绥缈幺 日期：二卅_ 秽善，= o 。 参 。 英文缩略词 英文缩写英文名中文名 A P SA m m o n i u mp e r s u l f a t e过硫酸胺 b p b a s ep a i r碱基对 D N A D e o x y r i b o n u c l e i cA c i d脱氧核糖核苷酸 D N T P d e o x y r i b o n u c l e o s i d et r i p h o s p h a t脱氧核糖核苷酸三磷脂 E BE t h i d i u mb r o m i d e溴化乙锭 E D T A E t h y l e n ed i a m i n e t e t r a c e t i ea c i d已二胺四乙酸 M A IM a r k e r - a s s i s t e dI n t m g r e s s i o n标记辅助导入 M A S M a r k e r - A s s i s t e dS e l e c t i o n标记辅助选择 P A G E P o l y a c r y l a m i d eG e lE l e c t r o p h o r e s i s 聚丙烯酰胺凝胶电泳 P C R P o l y m e r a s eC h a i nR e a c t i o n聚合酶链式反应 Q T LQ u a n t i t a t i v eT r a i tL o c u s 数量性状位点 R F L PR e s t r i c t i o nf r a g m e n tl e n g t hp o l y m o 州s m 限制性片段长度多态性 S N P S i n g l eN u c l e o t i d eP o l y m o r p h i s m 单核苷酸多态性 S S C P S i n g l eS t r a n dC o n s t r u c t i o nP o l y m o r p h i s m 单链构象多态性 T B ET r i s B o r i ca c i d _ E D l Ab u f f e rT r i s 硼酸E D T A 缓冲液 T ET r i s H C lE D T A" Ir i s H C I E D T A 缓冲液 T E M E DN ，N ，N , N - t e t r a m e t h y l e t h y l e n e d i a m i n eN ，N N N - 四甲基已二胺 聪s T r i s h y d r y x y m e t h y l a m i n o m e t h a n e 三羟甲基氨基甲烷 o - 山东农业火学 目 中文摘要 A b s t r a c t l 引言 1 1 遗传标记及分子标记育种 1 1 1 遗传标记 1 1 2 分子标记育种 1 2 家兔分子遗传研究进展“ 1 3 与产肉性状相关的三个候选基因1 l 1 3 1 生长激素基因ll 1 3 2 生长激素受体基因1 3 1 3 3 肌肉生长抑制素基因。1 5 1 4 本研究的目的、意义17 2 材料与方法1 9 2 1 实验材料及其仪器、试剂1 9 2 1 1 实验样品的来源及采样方法1 9 2 1 2 主要仪器设备2 l 2 2 实验方法2 4 2 2 1 耳组织D N A 的提取。2 4 2 2 2D N A 的模板检测2 5 2 2 3P C R 扩增与检测。2 6 2 2 4 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳2 8 2 2 5P C R 产物的回收及克隆测序3 0 2 3 统计分析方法3 4 3 结果与分析3 5 3 1 不同品种家兔基因组的提取3 5 3 2P C R 扩增产物的琼脂糖凝胶检测结果3 5 3 3P C R 扩增产物的聚丙烯酰胺凝胶检测结果3 6 家兔G H 、G H R 及M S T N 基因多态性及其与产肉性状的关系 3 4P C R 扩增片段的克隆测序结果3 7 3 5 突变位点对产肉性状的影响效应分析4 0 3 5 1G H 基因C l l1 T 突变对产肉性状的关联分析4 0 3 5 2G H R 基因T 1 7 9 7 C 突变对产肉性状的关联分析4 2 3 5 3G H R 基因C 2 0 6 7 T 突变对产肉性状的关联分析4 3 3 5 4M S T N 基因T 4 7 6 C 突变对产肉性状的关联分析4 5 4 讨论4 8 4 1 实验群体的选择4 8 4 2P C R - S S C P 分析4 8 4 3G H 基因多态性及其与产肉性状的关系：4 9 4 4G H R 基因多态性及其与产肉性状的关系5 0 4 5M S T N 基因多态性及其与产肉性状的关系5 l 4 6 统计方法的选择及结果分析。5 2 4 7 分子标记技术的应用5 2 5 结论5 4 6 参考文献5 5 7 致谢6 5 8 攻读学位期间发表论文情况6 6 I l 叁 4 I ： ； j 书 山东农业大学硕士学位论文 中文摘要 生长激素( G 基因、生长激素受体( G H R ) 基因和肌肉生长抑制素 ( M S T N ) 基因是与动物肉用性状有关的三个重要基因。本试验以9 个肉兔 纯系及其3 7 个杂交组合为实验材料，采用测序和单链构象多态( S S C P ) 的 分析方法，对础、G H R 和M S T N 基因进行S N P s 扫描和多态性分析，找 到与家兔产肉性状有关的分子标记，为优质、高产家兔品种的选育提供一 条分子育种途径，同时也为我国家兔品种的合理保护及科学利用提供可靠 的理论依据。 G H 基因：本研究对G H 基因的全部核苷酸序列进行了扩增测序。 P C R S S C P 分析及测序结果表明该基因5 个外显子和4 个内含子序列都相 当保守，仅在5 U T R 区发现一处S N P s ( C 11 l T ) 。应用S A S 软件对家兔群 体不同基因型间的生长，屠宰及肉质性状值进行最小二乘一般线性模型 ( G L M ) 分析。发现该突变对家兔胴体重、背腰重、后腿重和皮重等屠宰性 状及肌肉系水率、烹饪损失、熟肉率、肌内干物质含量和蛋白质含量等肉 质性状都有显著性影响( P < 0 0 5 ) 。其中突变型个体的胴体重显著高于野生 型和杂合型个体( P < 0 0 5 ) ，但背腰重显著低于二者( P < 0 0 5 ) 。而后腿重这 一性状上，杂合型个体的最小二乘均值最低，明显低于野生型和突变型。 G H R 基因：本研究在G H R 基因外显子1 0 上发现两个突变位点，分 别为1 7 9 7 ( T C ) 和2 0 6 7 ( C T ) 。对1 7 9 7 ( T C ) 位点不同基因型肉用性状之间 进行最小二乘分析结果显示，不同基因型个体间差异不显著O 0 5 ) 。 2 0 6 7 ( C T ) 突变位点在3 5 日龄体重、7 0 日龄体重、胴体重、肝重、前腿重、 背腰重、后腿重和皮重等屠宰性状及肌内干物质含量和蛋白质含量等肉质 性状的最d - 乘均值杂合型M N 型个体显著优于N N 型和M M 型个体和 ( P < 0 0 5 ) 。 M S T N 基因：本研究探讨了M S T N 基因的全部3 个外显子区及部分 5 U T R 区的遗传多态性，发现在5 q J T R 区4 7 6 位点存在l 处T C