抗foc4放线菌的筛选及菌株da07405、da07408的分类鉴定与发酵优化

海南大学 硕士学位论文 抗FOC4放线菌的筛选及菌株DA07405、DA07408的分类鉴定与发 酵优化 姓名：邱炜 申请学位级别：硕士 专业：微生物 指导教师：鲍时翔 20080601 内容提要 本论文从海南省高坡岭、尖峰岭原始森林、尖峰香蕉地、中沙、儋州植物园采集 土壤样品，从广东省雷州市流沙镇采集新鲜海绵样品，用高氏一号合成培养基作为放 线菌分离培养基，共分离到放线菌4 2 6 株，以古巴尖孢镰刀菌4 号小种( F O C 4 ) 作为 指示茵，经筛选获得9 株活性菌株，其中分离于海南儋州植物园土壤的菌株D A 0 7 4 0 5 和D A 0 7 4 0 8 活性最强。 结合培养特征与生理生化特征、1 6 Sr D N A 序列分析，初步将菌株D A 0 7 4 0 5 鉴定 为勋印幻矾) ，c 嚣s p D A 0 7 4 0 5 ，有待于D N A D N A 杂交进一步鉴定。菌株D A 0 7 4 0 8 鉴 定为橄榄产色链霉菌勋印幻叼，c 嚣D Z 加如加m D 彤，l 嚣。 通过发酵工艺优化，确定菌株D A 0 7 4 0 5 最佳培养基配方及发酵条件为：葡萄糖 1 O ，蔗糖0 5 ，玉米粉0 5 ，大豆粉O 7 5 ，K 2 肿0 40 0 5 ，初始p H 值7 O ，种 龄4 8 h ，接种量1 2 ，2 0 0 r m i l l 培养5 d ，培养温度2 8 ，2 5 0 m L 三角瓶装液量7 5 m L 。 确定菌株D A 0 7 4 0 8 的最佳培养基配方及发酵条件为：葡萄糖1 O ，甘油1 5 ，玉米 粉0 7 5 ，大豆粉0 7 5 K 2 H P 0 40 0 5 ，初始p H 值7 0 ，种龄4 8 h ，接种量1 0 ， 2 0 0 r m i n 发酵5 d ，培养温度2 8 ，2 5 0 m L 三角瓶装液量7 5 m L 。经过优化，菌株 D A 0 7 4 0 5 粗提物抑菌圈直径从优化前的1 5 O n m 提高到2 2 O m m ，D A 0 7 4 0 8 抑菌圈直 径从1 4 o n 趣提高到2 1 O m m 。 对菌株D A 0 7 4 0 5 和D A 0 7 4 0 8 所产抗菌活性物质的稳定性做了初步研究，结果表 明，两菌株所产的抗菌活性物质具有较好的热稳定性、日光稳定性和紫外光稳定性。 菌株D A 0 7 4 0 5 所产抗菌活性物质在p H l O 9 0 条件下，抑菌活性变化不大，但在p H > 9 O 时不稳定。菌株D A 0 7 4 0 8 所产抗菌活性物质在p H 2 O 8 0 条件下，抑菌活性变化不 大，但在p H 8 0 时不稳定。 主题词：古巴尖孢镰刀菌放线菌分离筛选鉴定发酵 A b s t r a c t ht 1 1 i sp a p e r ，4 2 6s 打a i l l so fa c t i l l o m y c e t e sw e r ei s 0 1 a t e d 舶ms o i ls a m p l e sC o U e c t e d 6 _ o mG a o p oM 0 1 m t a j n ，J i a n f 缸gM o u n t a i n ，J i a n f - 吼gb a n a n ao r c h a r d ，压o n g S h a ，D a n Z h o u 曲o r e t u m 跹d 丘mm 妇eS p o n g es p e c 血e n t Sc 0 1 1 e 酏e d 舶mL i u S h 乱A m o n gt 1 1 e m9 s t r 血1 ss h o w e dg 的n ga 砸、，i t i e sa g a i n s tF O C 4a n ds 仃a i l l sD A 0 7 4 0 5a n dD A 0 7 4 0 8i s 0 1 a t e d j 6 f D mD a n 吐o u 缸b o r 蛔p o s s e s s e dp r o m i n e n tb i o 枷访t y B ys t u d y i I l gt 1 1 em o 叩h o l o g y ，p h y S i o l o 西c a l 锄db i o c h e m i c a lp r o p e r t i e s ，16 Sr D N A a n dp h y l o g e n 舐c 仃e e ，t 1 1 er e s u l t ss h o w e dm a ts 心血D A 0 7 4 0 5a s 勋印幼砂c 嚣 s p D A 0 7 4 0 5 ，a n dm o r e r e s e a r c hs h o u l db ec a 而e do u tb yD N A - D N A h y b r i d i z 撕o n ； S 仃a i nD A 0 7 4 0 8w a sp r o p o s e d 嬲，印幻叼，c 船D m 协幽加m 9 弘聆钌 1 1 1 eo p t i m a ll i q u i d 触l e n 切缸0 nm e ( 1 i u mc o m p o n e n t sa n df I 锄e n t a t i o nc o n d i t i o n so f D A 0 7 4 0 5 趾dD A 0 7 4 0 8w e r eo b t a i l l e d T h eo p t 妇u mc u l t u 】陀m e d i u m 唧o n e n t so f D A 0 7 4 0 5c o n t a i n e dg l u c o s e1 0 ，s u c r o s e0 5 ，C 0 mp o w d e r0 5 ，s o y b e a np o w d e r O 7 5 ，K 2 H P 0 40 0 5 ；T h eo p t i m u mf e 皿e n t a t i o nc o n d i t i o n so fD A 0 7 4 0 5w e r ci n i t i a l p H 7 0 ，s e e da g e4 8 h ，12 i I l o c u l 撕o na m o u 鸲t 1 1 es i z e7 5 m L i 1 12 5 0 m LE d 锄e y e rf l a s k a t2 0 0r ，m i I la n d2 8 f o r5 d A n dm eo p t i m u mc u d t u r em 础u mc o m p o n e n t so fD A 0 7 4 0 8 c o n t a 证e d 酉u c o s e1 0 ，西y c e r 0 11 5 ，C o mp o w d e r0 7 5 ，s o y = b e a np o w d e r0 7 5 ， K 2 H P 0 4O 0 5 ；n eo p t 洫啪硒e n 测o nc o n d i t i o n so fD A 0 7 4 0 8w e r ei n i t i a lp H 7 0 ， s e e da g e4 8 h ，1 0 i n o c u l a l i o n 锄o u 媳m es i z e7 5 m Li n2 5 0 m LE r l 锄e y e rn 破a t2 0 0 咖l i l la n d2 8 f o r5 d T h es t a b i l i t i e so f 也ea n t i b a 酏e r i a lC o m p 0 1 l I l d so fs 仃a i nD A 0 7 4 0 5a n dD A 0 7 4 0 8w e r e s t u d i e d ，t 1 1 er e s u l t ss h o w e dt 1 1 eb i o a c _ t i v es u b s t a n c eo fD A 0 7 4 0 5a n dD A 0 7 4 0 8h 嬲h e a t ， l i g h ta n du 1 1 强v i o l e tr a d i 撕o ns t a b i l i 吼a n d 也eb i o a c t i V es u b s t a n c eo fD A 0 7 4 0 5w a Ss t a b l e 丘o m1 Ot o9 0o fp H ，b u tn o ts t a b l ea ta 墩a l i0 H > 9 O ) D A 0 7 4 0 8w a Ss t a b l e 台D m2 Ot 0 8 0o f p H ，b u tn o tb es t a b l ea ts 仃o n ga c i d i t y0 H 8 O ) c o n d i t i o n K e yW o r d s ：A 姆口力“聊D 础珑S p ，侧6 翻s 2A 曲n o m y c e t e s I S 0 1 撕o n S c r e e n i n g I d e r l 廿f i c a t i o nF e n n e n t a t i o n 缩略词 缩略词 全称 中文名称 F O C 凡堪口一“mD 砂驴D 删mf S p c 曲P 以s P古巴尖孢镰刀菌 b pB a s e p a i r I A 砌b o n u c l e i ca c i d 碱基对 脱氧核糖核苷酸 P c R P o l y m e r a s ec h a i l lr e a c t i o n 聚合酶链式反应 D N A D e s o x y 曲o n u d e i ca c i d 核糖核昔酸 啊s ( h y d r o x 芦e m y l ) 锄i I l o m 劬a I l e 3 ( 羟甲基) 氨基甲烷 S D S S o d i u md o d e c y ls u l f - a t e十二烷基磺酸钠 N c B IN a t i o n a lC e l l t e ro f B i o l o 百c a lI n s t i t I l t i o n美国国立生物技术信息中心 B L A S TB a s i cL o c o lA l i 割1 1 I l e I l tS e 盯c hT 0 0 1基本局部相似性比对搜索工具 r m i n R e 、，0 1 u t i o n sp e rm i n u t e每分钟转速 海南大学学位论文原创- 性声明和使用授权说明 原创性声明 本人郑重声明： 所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取 得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写 过的作品或成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。 本声明的法律结果由本人承担。 论文作者签名： 蹶谛6 具产 学位论文版权使用授权说明 本人完全了解海南大学关于收集、保存、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向 国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权海南大 学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫 描等复制手段保存和汇编本学位论文。本人在导师指导下完成的论文成果，知识产权归属海 研曼硼巾 鲤嘲4 ：瑚年6 月q 本人已经认真阅读“C A I J S 高校学位论文全文数据库发布章程”，同意将本人的学位论 文提交“C A I 工s 高校学位论文全文数据库”中