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sCD40L及17AAG逆传上皮性卵巢癌细胞对顺铂耐药的研究

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sCD40L及17AAG逆传上皮性卵巢癌细胞对顺铂耐药的研究

河北医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 本学位论文在导师( 或指导小组) 的指导下,由本人独立完成。本学 位论文研究所获得的研究成果,其知识产权归河北医科大学所有。河北医 科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要 内容相关的论文,第一署名为单位河北医科大学,试验材料、原始数据、 申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则 啾躲印砸翩龋多姆二级学篙 河北医科大学研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果,除了文中 特别加以标注和致谢等内容外,文中不包含其他人已经发表或撰写的研究 成果,指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写,文责自负。 研究生签名:饰痧善 目录 中文摘要1 英文摘要4 研究论文s C D 4 0 L 及1 7 A A G 逆转上皮性卵巢癌细胞对顺铂耐药的研究 引言8引舌芍 第一部分s C D 4 0 L 逆转上皮性卵巢癌细胞对顺铂耐药的研究 前言9月I J 吾 材料与方法9 结果1 5 附图1 8 附表2 4 讨论2 7 小结3 0 参考文献3 l 第二部分1 7 A A G 逆转上皮性卵巢癌细胞对顺铂耐药的研究 前言1 “ O 3 3月U 吾j 3 材料与方法3 3 结果3 5 附图3 7 附表4 2 讨论4 5 小结4 7 参考文献。4 7 结论5 0 综述改善卵巢癌耐药性的相关研究5 l 致谢6 0 个人简历6 l 中文摘要 s C D 4 0 L 及17 - A A G 逆转上皮性卵巢癌细胞对顺铂耐药的研究 摘要 目的:卵巢癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一,已成为首要死亡原因。 由于在疾病早期,症状较隐匿,多数病人确诊时已进入晚期阶段。且由于 在I 临床治疗过程中,对化疗药物的耐药更使得卵巢癌患者预后差、死亡率 高。因此,探讨改善卵巢癌细胞的耐药以及增强化疗药物敏感性成为亟待 解决的问题。研究表明,在存在C D 4 0 表达的肿瘤细胞中,s C D 4 0 L ( 可 溶性C D 4 0 配体) 可抑制细胞的增殖,具有调节肿瘤细胞生长及诱导凋亡 的作用。格尔德霉素衍生物1 7 A A G ( 1 7 烯丙胺基一1 7 一脱甲氧基格尔 德霉素) 是一种H s p 9 0 抑制剂,有较强的抗肿瘤作用。1 7 A A G 已在乳癌、 白血病、前列腺癌等研究中表现出抗肿瘤活性,其主要通过抑制肿瘤侵袭、 降低耐药性及诱导凋亡而发挥作用。关于s C D 4 0 L 及1 7 A A G 抑制卵巢癌 细胞生长的作用机制报道较少。本实验的相关前期研究发现:s C D 4 0 L 及 1 7 A A G 对卵巢癌细胞的增殖均有抑制作用,且随药物浓度的增加抑制率 增高。s C D 4 0 L 联合顺铂作用于S K O V 3 细胞可能通过下调s u r v i v i nm R N A 、 上调c a s p a s e 3m R N A 及c a s p a s e 9m R N A 而诱导细胞凋亡。s C D 4 0 L 联合 顺铂作用于S K O V 3 D D P 细胞可能通过下调M D R lm R N A 、L R Pm R N A 、 G S T - xm R N A 及s u r v i v i nm R N A 而逆转耐药。s C D 4 0 L 作用于两种细胞, 抑制作用无显著差异。17 - A A G 的增殖抑制作用在S K O V 3 D D P 细胞中明 显强于S K O V 3 细胞。s C D 4 0 L 及1 7 A A G 分别联合顺铂作用于卵巢癌细 胞后均可逆转耐药性。本实验旨在检测s C D 4 0 L 及1 7 A A G 作用于卵巢癌 细胞后相关耐药蛋白及凋亡抑制蛋白的表达情况、探讨可能的作用机制。 方法: 1 M T T 法检测不同浓度的s C D 4 0 L 、顺铂及两者联合应用对卵巢癌 细胞S K O V 3 及S K O V 3 D D P 的增殖抑制作用,并计算药物作用细胞后4 8 小时的I C 5 0 值及逆转倍数。 2 W e s t e r n b l o t 法检测顺铂、s C D 4 0 L 及s C D 4 0 L 联合顺铂处理卵巢 癌细胞S K O V 3 及S K O V 3 D D P 前后细胞内G S T - 兀,L R P ,P 5 3 ,B c l 2 及s u r v i v i n 蛋白的表达情况。 3 M T T 法检测不同浓度的1 7 A A G 、顺铂及两者联合应用对卵巢癌 中文摘要 细胞S K O V 3 及S K O V 3 D D P 的增殖抑制作用,并计算药物作用细胞后4 8 小时的I C 5 0 值及逆转倍数。 4 W e s t e r n b l o t 法检测顺铂、1 7 A A G 及1 7 A A G 联合顺铂处理卵巢 癌细胞S K O V 3 及S K O V 3 D D P 前后细胞内G S T - ,L R P ,P 5 3 ,B c l 2 及s u r v i v i n 蛋白的表达情况。 结果: 1M T T 法结果显示:不同浓度的s C D 4 0 L 对卵巢癌细胞S K O V 3 及 S K O V 3 D D P 细胞的增殖均具有抑制作用。随药物浓度的增加及作用时间 延长,对S K O V 3 及S K O V 3 D D P 细胞的增殖抑制作用均增强,呈时间一 剂量依赖关系。s C D 4 0 L 作用于S K O V 3 细胞及S K O V 3 D D P 细胞4 8 小时 的I C 5 0 值分别是2 2 6 t g m l 、2 3 3 9 9 m l 。不同浓度的顺铂对两种细胞有增 殖抑制作用,也呈时间一剂量依赖关系。顺铂对S K O V 3 细胞及 S K O V 3 D D P 细胞4 8 小时的I C 5 0 值分别是7 3 4 1 x g m l 、2 7 0 6 x g m l 。 S K O V 3 D D P 细胞的耐药指数为3 6 9 。s C D 4 0 L 联合顺铂对S K O V 3 及 S K O V 3 D D P 细胞均有明显的增殖抑制作用,且呈一定的时间一剂量依赖 关系。l l x g m l 及2 p g m ls C D 4 0 L 联合顺铂作用于S K O V 3 细胞的I C 5 0 值 分别是1 4 0 l x g m l 、1 0 5 t g m l ,增敏倍数分别为5 2 4 、6 9 9 。l l x g m l 及2 9 9 m l s C D 4 0 L 联合顺铂作用于S K O V 3 D D P 细胞的I C 5 0 值分别是6 1l r t g m l 、 2 9 5 ¨g m l ,逆转倍数分别为4 4 3 、9 1 7 。l I - t g m ls C D 4 0 L 联合顺铂作用于 S K O V 3 细胞及S K O V 3 D D P 细胞的g 值分别为O 9 2 、1 0 1 。2 1 上g m ls C D 4 0 L 联合顺铂作用于S K O V 3 及S K O V 3 D D P 细胞的g 值分别为0 9 7 、1 0 2 。 各组计算均得0 8 5 匀冬1 1 5 ,说明s C D 4 0 L 与顺铂两药联用发挥相加作用。 2 W e s t e r n b l o t 法检测结果示:经顺铂单药、s C D 4 0 L 单药、s C D 4 0 L 联合顺铂处理S K O V 3 及S K O V 3 D D P 细胞4 8 小时后,s u r v i v i n 、b c l 2 蛋 白表达量各组间两两比较,均无显著差异( 胗O 0 5 ) 。在S K O V 3 细胞中 s u r v i v i n 、b c l 2 蛋白的表达量明显高于S K O V 3 D D P 细胞( P n05had n os i R n l h c a n ta l n e r e n c ec o m p a r e dW l U at h ec o n t r 0 1 ) 一B x p r e s s l o n sI , ) o fs u r v i v i na n db c l - 2p r o t e i ni nS K O V 3c e l l sw e r es i g n i f i c a n t l yh i g h e rt h a n t 1 1 a to fS K O V 3 D D Pc e l l s 俨 D 0 5 ) I nt h eg r o u po f2l ag m l s C D 4 0 Lc o m b i n e d w i t hc i s p l a t i n ,t h ee x p r e s s i o n so fG S T - 兀,L R Pa n dp 5 3p r o t e i ns i g n i f i c a n t l y d e c r e a s e d c o m p a r e d w i t ht h ec o n t r o la n dD D Pa l o n e ,s C D 4 0 La l o n e g r o u p ( ' 0 0 5 ) 。p 5 3 蛋白表达水平在两种 细胞间无显著性差异( 胗O 0 5 ) 。 p 盏5 0 g4 0 召3 0 ·r 1 暑2 0 量l o O 一·一2 4 h S K O V 3 研究论文 附图 0 1 2 50 2 50 5l24 n C D 4 0 L ( 向1 ) 8 0 6 0 4 0 2 0 0 一一鹊h 0 1 2 5 吼2 50 5l24 n C D 4 0 L ( p g m 1 ) F i g 1 T h ei n h i b i t o r yr a t e so fS K O V 3a n dS K O V 3 D D Pc e l l st r e a t e dw i t h s C D 4 0 Lw e r ed e t e c t e

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