中药学本科中药药理（方剂配伍规律研究思路与实践）
余林中,方剂配伍规律研究 思路与实践,配伍是中医用药的特色和优势所在，开展方剂配伍规律的现代研究是中医药现代化研究的重要组成部分，对于继承和发展中药配伍理论、更有效地指导临床和中药新产品研创具有重要意义，近年国家自然基金曾将中药配伍规律的基础研究列为重点项目。然而，方剂配伍规律研究也是中医药现代研究的难点，其研究思路与方法尚在探索之中。,第一部分 方剂配伍规律研究思路,研究现状 存在问题 原因分析 我们的认识 研究思路 研究步骤,南方医科大学中医系药理药化教研室,研究现状,理论研究 “（药）有单行者，有相须者，有相使者，有相畏者，有相杀者，有相恶者，有相反者。凡此七情，合和视之” 神农本草经·序例 “七情合和”是中药配伍理论总纲，也是组方用药的基础。,配伍用药的规律性认识： 相须相使配伍，能够增强药效 相畏相杀配伍，可以制约毒性 相恶相反配伍，可能增毒减效,实验研究,用药理方法观察配伍与药理效应变化间关系 通过拆方研究证实方剂中各药有“七情”关系 各药在方中有“君臣佐使”不同地位 验证了方剂组成的合理性和中药配伍应用的优越性,用化学方法观察配伍与化学成分变化间关系 中药沉淀性配伍研究（黄芩甙与小檗碱） 配伍对有效成分的溶出率的影响 配伍后产生新物质（如生脉散、四逆汤）,南方医科大学中医系药理药化教研室,存在问题,用药理方法研究拆方配伍较多，从物质基 础角度研究配伍明显滞后 从方剂配伍化学成分变化药理效应 三者变化相互关系研究尚不多见,南方医科大学中医系药理药化教研室,原因分析,方剂物质基础不需知论 认为方剂是在中医药理论指导下，按君臣佐使、七情和合等配伍原则组成的，已在数千年的临床实践中证实其疗效，没必要非得让“小白鼠点头”才算数；方中各药的四气五味就是产生疗效的物质基础，并非用“皂甙、生物碱”说明才科学。 对方剂物质基础研究的意义认识不足,方剂物质基础不可知论 认为方剂的组成少则数味，多者几十味，化学成分少则几十种，多则几百种，既有无机物、小分子有机化合物，又有生物大分子物质，而且这么多的物质在炮制、制剂过程中又可能发生新的变化，产生新的物质。方剂的物质基础如此复杂，无从下手，所谓“丸丹膏散，神仙难辨”。 对方剂物质基础研究信心不足,方剂物质基础唯成分论 基于世界是物质性的哲学思想，采用还原论的研究思路和现代化学成分研究的方法与技术，引入西医生理学、病理学及药理学等理论和手段，以西医的药理作用作为评价指标，逐步提取、分离、追踪方剂的化学成分，力图最终以某种或某些“有效成分”来说明一切。这种以化合物和单体为目标的唯成分论研究方法，基本上脱离了中医理论指导，完全走上了“中药西化”的道路。 对方剂物质基础研究方法失当,方剂配伍规律研究 应以物质基础为核心？,南方医科大学中医系药理药化教研室,我们的认识,方剂物质基础研究是需要的、必然的 方剂若仍停留在仅以宏观概念表述其基本内容，既不利于继承，更不利于发展。复方制剂难以进入国际市场，其重要原因是未能在微观层次上表达其性质、功效，难以被接受、被应用。因而，开展方剂物质基础研究是继承和发展的需要，是走向现代化、产业化和国际化的需要，是时代发展的必然。,方剂物质基础研究是可行的、渐进的 方剂的物质基础是一个异常复杂的体系，想短期内完全弄清是不现实的。然而，人类认识自然是一个渐进的过程，对方剂物质基础的阐明也是渐进的、不断深入的。随着科技的进步，研究技术、手段的提高，方剂的物质基础将会不断地被揭示。,方剂物质基础研究的原则 以中医药理论为指导 最大限度运用现代相关技术 以揭示方剂作用原理、配伍内涵为导向 以提高临床疗效、指导新药研创为目的,南方医科大学中医系药理药化教研室,研究思路,一个核心：以方剂物质基础研究为核心 两个结合：方剂配伍理论交互作用理论 物质基础分析药理效应观察 三个层次：单味药有效部分化学成分 四个水平：整体动物器官组织细胞亚 细胞分子,南方医科大学中医系药理药化教研室,研究步骤,第一步 选方 遵循中医药理论组方 按理法方药配伍精当 相关现代研究较充分 疗效上具有明显优势,第二步 单味药层次研究 根据方剂的主治病证，针对其主要病因病机设计药理指标，重点在整体水平上观察药理作用，分析其配伍规律。,第三步 有效部分层次研究 根据现代研究结果，结合该方君臣佐使组成原则，有目的地分离出若干有效部分，对各有效部分进行“四个水平”的药理作用及作用机理研究，在有效部分层次探讨其配伍规律。,第四步 化学成分层次研究 在上述研究基础上，对有效部分再分离成若干单一化学成分，对化学成分进行“四个水平”的药理作用及作用机理分析，在化学成分层次探讨其配伍规律。,第五步 综合分析 根据以上结果，综合分析该方产生疗效的物质基础，探讨物质基础的变化与配伍、药理效应间的内在关系,第二部分 方剂配伍规律研究实践,葛根芩连汤配伍规律研究 （国家自然科学基金资助项目编号39970886）,选方依据 假说 研究目标 技术路线 研究结果,南方医科大学中医系药理药化教研室,选方依据,仲景名方，疗效卓著 配伍具有较强的代表性 “ 七情”之中相须、相使配伍最为多见 含多个药对，均为相须相使配伍，其中，黄连 黄芩、黄连 黄芩甘草配伍在伤寒论含黄 连方中分别占58.33%和25%； 甘草在各类方中使用频率最高 现代相关研究充分,南方医科大学中医系药理药化教研室,假说,“七情合和”的实质在于“化学成分合和” 性能功效相似的成分在数量上产生变化(量变)，功效上产生协同； 产生与全方功效相一致的新的有效成分(质变)； 各成分在归经上相互诱导，使全方作用定位、定向(归经)上趋向一致，从而获得对主治证的最佳综 合治疗效应。,南方医科大学中医系药理药化教研室,研究目标,以中药配伍理论为指导，用现代分析手段，观察配伍对葛根芩连汤化学成分数、量及“归经”的影响，综合分析配伍化学成分变化药理效应三者之间的联系，阐明其配伍内涵，为更有效地指导临床和新药研究提供依据，为广泛开展方剂配伍规律研究探索新途径。,(1)葛根芩连汤正交设计组方(15种),(2)各组方煎液,(3)四类化学成分定性 定量 (量变、质变),(5)药效学实验,(6)药代动力学实验,抑菌实验,抗病毒实验,(4)协热下利模型,菌痢模型,含药血清,药理效应观察,组织器官,血清,(3)化学成分分析 (量变、质变),(3)化学成分分析,(7)归经变化研究,(8)综合分析,新组方,(9)临床药 理研究,课题总结,技术路线,(1)葛根;(2)黄芩;(3)黄连;(4)甘草;(5)葛根、黄芩;(6)葛根、黄连; (7)葛根、甘草;(8)黄芩、黄连;(9)黄芩、甘草;(10)黄连、甘草; (11)葛根、黄芩、黄连;(12)葛根、黄连、甘草;(13)葛根、黄芩、 甘草;(14)黄芩、黄连、甘草;(15)葛根、黄芩、黄连、甘草,(1) 对葛根芩连汤正交设计分组,按L16(215)正交表具体分为如下15种配伍组合：,(2) 葛根芩连汤及各配伍组合煎剂制备,(3) 葛根芩连汤的化学成分分析(煎液、人血清、兔血清),四种成分的含量测定 (指标成分) 在药材中煎液中血清中的转移率 (量变) 新的化学成分的发现 (配伍前后指纹图谱对比寻 找新成分)(质变) 煎液中新的化合物 (其中包括复合物、盐等) 血清中新的化合物 (次生、代谢产物如甘草次酸、 黄芩 素等),(4) 建立家兔葛根芩连汤证“协热下利” 证及急性 菌痢病理模型,“协热下利”证模型依据： 伤寒论,葛根芩连汤,风寒刺激 白细胞致热源(iv) 生大黄水煎液,止泻、退热,泄泻发热,(5) 葛根芩连汤化学成分变化(化学成分合和)与 药效的关系,家兔“协热下利”证模型 家兔急性菌痢病理模型 体外抗菌 体外抗病毒实验,(6) 葛根芩连汤(指标成分)人体药代动力学研究,通过血清药时曲线的测定，考察各种配伍对主要成分体内吸收、分布、代谢的影响,通过药效实验结果，反证配伍药物进入药效指标相关的经络 (肺、脾、肠)与单味药的药效结果、归经比较，证实诱导归经的假说。 通过药物 3H 指标成分在组织器官的分布，以直接证明配伍对诱导归经定向、定位的影响 通过人体药代动力学研究、指标成分吸收、分布代谢参数，佐证诱导归经。,(7) 葛根芩连汤归经变化研究(诱导归经),(8) 葛根芩连汤配伍分析和规律的阐述,对正交实验设计结果采用多元回归综合分析方法，确定葛根芩连汤的最佳配伍组合；通过对药理效应与相应煎液和血清中多种化学成分变化（量变、质变及归经变化）的相关研究，揭示葛根芩连汤 “相须、相使”的配伍内涵，阐明“七情合和”的实质在于“化学成分合和” 。,(9) 比较优选方与葛根芩连汤原方对“协热下利” 证病人的疗效,各30例病人，随机对照盲法观察。,南方医科大学中医系药理药化教研室,研究结果,方法：HPLC、HPCD法 结果： 黄芩苷、小檗碱、甘草酸含量以各单味药煎液含量最高，全方的含量分别占单煎液67%、59%、70%。 各配伍的葛根素含量变化无显著性差异。 葛根、黄连对黄芩苷，葛根、黄芩、甘草对小檗碱 ，黄连对甘草酸的含量均有降低作用。 含黄连、黄芩的配伍煎液中产生的沉淀中含有大量 的黄芩苷。,配伍对葛根芩连汤主要成分含量影响,配伍对葛根芩连汤药理作用影响,配伍对葛根芩连汤体外抑菌作用影响,方法：试管二倍稀释法、平皿打孔法。 结果： 各配伍组合中，以黄连的体外抑菌活性最强，不同的菌株强度有差异，其次是黄芩，炙甘草对金黄葡萄球菌与志贺氏有弱的抑菌活性，葛根对金黄色葡萄球菌有弱的抑菌活性。 在与黄连配伍中，其余三药均能起拮抗作用。,配伍对葛根芩连汤抗腹泻作用影响,方法：小鼠番泻叶致泻试验，小鼠小肠推进试验。 结果： 在抗腹泻药效中，其最佳组合为黄连炙甘草。 葛根与黄芩能拮抗黄连作用，炙甘草增强黄连作用。,配伍对葛根芩连汤解热作用影响,方法：大鼠皮下注射埃希氏大肠杆菌悬浮液致 发热试验 。 结果： 黄芩有明显的解热作用。 黄连、炙甘草对其黄芩有明显的拮抗作用。 葛根对黄芩有增强的作用 。,方法：家兔福氏2a志贺氏菌实验性菌痢模型 。 结果： 黄连、黄芩均能明显减少结肠内容物和结肠组织内细菌定量计数，葛根与甘草则作用不明显。 炙甘草则可以明显降低结肠炎指数，而葛根 、黄芩、黄连则作用不明显，它们对炙甘草的作用也无明显影响。,配伍对葛根芩连汤抗实验性菌痢的影响,综合分析,葛根与黄芩配伍中均具有解热作用的葛根素、黄芩苷的含量分别为最高和次高，两药具有协同作用，在各配伍组中解热效果最佳； 黄连单煎液的小檗碱含量比其他配伍组均高，在抑菌指标上作用最强；,黄连与甘草配伍，小檗碱、甘草酸含量仅比单煎液低，而抗腹泻作用、体内抑菌、降低结肠炎指数方面仍以黄连甘草为主。 就单一指标来说，全方均非最佳，但同时具有良好的解热、抑菌、抗腹泻等作用，又是各单味药及其他配伍组所不及的，所以从治疗“协热下利”证来说，全方四味药组合最佳。,谢谢！,
