类风湿性关节炎动物模型制备与发病机理的探讨
C l a s s i f i e dI n d e x ： U D C ： D i s s e r t a t i o nf o rt h eD o c t o r a lD e g r e e i nA g r i c u l t u r e T H EP R E P A R A T I O NO FR H E U M A T O I D A R T H R I T I SD I S E A S EM O D E L A N D R E S E A R C HO N I T SP A T H O P O I E S E S M E C H A N I S M C a n d i d a t e S u p e r v i s o r A c a d e m i cD e g r e eA p p l i e df o r S p e c i a l i t y D a t eo fO r a lE x a m i n a t i o n U n i v e r s i t y W a n gG u i x i a P r o f Z h a n gX i u y i n g D o c t o ro fA g r i c u l t u r e B a s i cV e t e r i n a r yS c i e n c e M a y , 2 0 1 0 N o r t h e a s tA g r i c u l t u r a lU n i v e r s i t y 1 1 类风湿性关节炎动物模型的研究进展1 1 1 1 单纯诱导性R A 动物模型1 1 1 2 病证结合的K A 动物模型4 1 1 3 转基因R A 动物模型5 1 1 4I I 型胶原抗体诱导的R A 动物模型6 1 2 类风性关节炎主要病因- 6 1 2 1 感染因素6 1 2 2 遗传因素8 1 3 类风湿性关节炎发病机理的研究进展9 1 3 1 细胞水平9 1 3 2 分子水平l l 1 4 几1 7 与R A 疾病：1 3 1 4 1 ，1 7 结构与成员1 4 1 4 2 ，1 7 受体1 4 1 4 3 作用机制15 1 4 4 生物学作用。1 5 1 5 多聚蛋白聚糖酶与R A 疾病17 1 5 1 结构1 7 1 5 2 在R A 关节炎中作用一18 1 5 3 调节机制1 9 1 6 软骨细胞的培养概况1 9 1 7 蛋白质免疫印迹技术研究进展2 1 1 8 实时定量P C R 技术研究进展2 2 1 8 1 原理2 2 1 8 2 在医学研究中的应用一2 4 1 9 本研究的目的与意义2 6 2 材料2 9 2 1 制备R A 动物模型的主要试剂2 9 2 2E L I S A 定量检测主要试剂2 9 2 3 软骨细胞培养主要试剂2 9 2 4 蛋白质免疫印迹主要试剂3 0 舢川删 5 3 5 、 、 ， ， 东北农业大学农学博十学位论文 2 5 实时定量P C R 主要试剂3l 2 6 主要仪器与设备3 1 2 7 试验动物3 2 2 8 引物合成3 2 3 ：E i 法3 z I 3 1 类风湿性关节炎动物模型的制备3 4 3 1 1 造模方法。3 4 3 1 2 血清、踝关节组织的采集3 4 3 1 3 关节炎指数的判定标准与发病率3 4 3 1 4 抗I I 型胶原抗体的检测3 5 3 1 5I L - 1 1 3 的E L I S A 定量检测一3 5 3 1 6I L 一1 7 、T N F a 的E L I S A 定量检测3 6 3 1 7 踝关节组织病理切片的制作。3 6 3 1 8 影像学检查3 7 3 1 9 数据分析：3 7 3 2 软骨细胞的培养j 3 7 3 2 1 原代细胞的分离培养3 7 3 2 2 传代培养3 7 3 2 3 冻存与复苏3 8 3 31 L - 1 7 诱导软骨细胞3 8 3 4 W e s t e r n b l o t 检测软骨细胞A D A M T S - 4 的蛋白质表达3 9 3 4 1 蛋白样品的制备：3 9 3 4 2S D S P A G E 分离A D A M T S - 4 基因表达产物3 9 3 4 3A D 州T S _ 4 的半干式电转移4 0 3 4 4A D J 蝴T S _ 4 的免疫学反应4 0 3 4 5 化学发光检测A D A M T S - 4 的表达4 0 3 5 实时定量P C R 检测软骨细胞A D A l 、仃S _ 4 的转录水平4 1 3 5 1 软骨细胞总R N A 提取和质量鉴定4 1 3 5 2 软骨细胞A D J 蝴T S - 4 基因c D N A 的制备4 1 3 5 3 软骨细胞A D A M T S - 4 基因的P C R 扩增4 l 3 5 4 实时定量P C R 体系确定4 2 3 5 5 软骨细胞A D A M T s 4m R N A 表达的实时定量P C R 检测4 3 3 5 6 数据分析4 3 4 结果4 4 4 1R A 动物模型制备结果4 4 4 1 1 R A 动物模型的临床症状4 4 4 1 2R A 大鼠的体重变化4 4 4 1 3 发病率4 4 渗 _ 目录 4 1 4 关节炎指数结果4 5 4 1 5 抗C 抗体的检测结果4 6 4 1 6 ，1 B 、T N F - a 和，1 7 的水平4 6 4 1 7 踝关节组织病理学检查结果4 7 4 1 8 踝关节影象学检查结果4 7 4 2 软骨细胞培养结果4 8 4 2 1 原代软骨细胞培养结果4 8 4 2 2 传代软骨细胞培养结果4 8 4 2 3 软骨细胞冻存复苏结果4 8 4 3A D A M T S - 4 免疫印迹分析结果4 9 4 3 1 软骨细胞上清液蛋白浓度4 9 4 3 2A D A M T S - 4 蛋白S D S P A G E 电泳结果4 9 4 3 3A D 川T s 4 免疫分析结果：4 9 4 4 软骨细胞的A D A M T S - 4 的实时定量P C R 结果5 1 4 4 1 软骨细胞R N A 提取质量鉴定结果5 1 4 4 2 软骨细胞A D A M T S 4P C R 扩增片段鉴定
