荧光pcr定量技术与遗传病诊断
2页1、荧光 PCR 定量技术与遗传病诊断与遗传病诊断1 荧光 PCR 基因定位技术的原理 荧光 PCR 定量技术的主要原理为:在 PCR 前,通过化学方法在引物的 5端通过共价方 式连接一个荧光分子。由于在进行 PCR 时,引物和待扩增模板 5端的碱基不需要完全匹配, 荧光 PCR 引物和普通 PCR 引物一样,能够对待测模板进行指数扩增。扩增完成后,根据 PCR 的产量,将荧光 PCR 产物直接或按一定比例稀释后,和内标、载样缓冲液混合,在自 动测序仪上进行电泳。在自动测序仪内激光的激发下,PCR 产物上的荧光分子发出固定波 长的激发光,被仪器内的光电管捕获。根据 PCR 产物从开始电泳到经过光电管的时间,测 序仪自动计算出相应产物的实际碱基数。不同泳道之间电泳速度的差别,通过各产物内混 合的内标校正。同时,测序仪也自动标出相应产物的荧光强度,该数值就是荧光 PCR 定量 技术对模板进行定量与定位的基础。与非定量 PCR 分析方法不同,荧光 PCR 的操作程序 有助于评估污染的情况,即测出污染的程度,即使阴性对照产生了正的信号,只要这些信 号比实验样品的低得多,依据这样的结果,至少可以推测
2、出实验中所得出的信号是真实的 4-6。在一定程度上,荧光 PCR 消除了普通 PCR 过于敏感、假阳性率高的缺点。荧光 PCR 常用于研究发病机制、估计病毒的负荷量、监测临床治疗进展或用于诊断遗传缺陷等。 通过对靶基因量的检测,将其与疾病的临床表现、临床分型以及各种标志酶的值联系起来, 为疾病的诊断和药物治疗监测提供科学的依据。目前,该技术已广泛应用于多种遗传病的 诊断和产前筛查,如地中海贫血、儿童型脊肌萎缩症、杜氏/贝氏肌营养不良、胖骨肌萎缩 症和各种染色体病等。 2 荧光 PCR 基因定位技术在遗传病诊断中的应用 (1) 在 地中海贫血中的诊断作用 1988 年,Chehab 用两对引物同时扩增 珠蛋白和 珠蛋白基因,并在这两对引物上分 别标记上罗丹明和荧光素。在紫外线的照射下,罗丹明产生红色荧光而荧光素产生绿色荧 光。在同一循环条件下 PCR 完成后,通过离心将扩增产物和游离引物分离,根据扩增后产 物颜色直接判断基因的缺失情况7。如产物为桔红色,则说明 和 珠蛋白基因都得了扩 增。如果产物为绿色,说明 珠蛋白基因缺失,只有显绿色荧光的 珠蛋白基因得到了扩 增。 (2) 在 DMD
《荧光pcr定量技术与遗传病诊断》由会员wt****50分享,可在线阅读,更多相关《荧光pcr定量技术与遗传病诊断》请在金锄头文库上搜索。
高电压技术 第一章第四节 起始电压与气压的关系
风湿免疫病的新认识与新进展
频数分布表与频数分布直方图1
青岛版九上1.1《平行四边形及其性质》(1)
集团整体业务群的战略安排
金钱_共同面对的话题71171
重要有机物的制备
重性精神疾病的防治培训
酵母醇脱氢酶的提取及专一性测定
高二选修(溶液的酸碱性)2010hy
高二生物必修3《生态系统的物质循环》课件
高一数学集合的基本关系
陈-从梯子的倾斜程度谈起(2)
阿卡宁衍生物合成产物中乙酰胆碱酯酶抑制剂的筛选 -
课题1 海带中碘元素的分离及检验
说不尽的桥课件1
语法--英语词性分类及用法
记忆与知识的储存
解读“引起近视的其它原因”
计算机算法设计与分析(第3版)第2章
2023-08-15 5页
2023-07-18 2页
2023-04-07 5页
2023-04-06 4页
2023-04-06 3页
2023-04-06 4页
2023-04-06 3页
2023-04-06 3页
2023-04-06 2页
2023-04-06 2页