各种培养基的配置及注意事1
9页1、各种培养基的配置及注意事项6-BA 配置:配置时要加入少量稀酸或 97%酒精,再加入蒸馏水,可适当加热。IBA 配置:配置时要加入少量稀碱,再加入蒸馏水。注意:配这两种溶液时,若直接加蒸馏水,则不溶。 (注:溶解生长素时,可用少量0.51N 的 NaOH 或 95%酒精溶解;溶解分裂素类用 0.51N 的 HCl 加热溶解,如再加蒸馏水,易产生白色沉淀,此时再加热水。 )母液配置:母液 配置量 药品名称 称取量 倍数母液 1 250ml NH4NO3KH2PO441.5g4.25g100母液 1 250ml KNO3CaCl2.2H2O47.5g11g100母液 1 250ml MgSO4.7H2O 9.25g 100母液 2 500mlMnSO4.H2OZnSO4.7H2OCaCl2.6H2OCuSO4.5H2ONa2MoO4KIH3BO3535mg215mg0.625mg0.625mg6.25mg20.75mg155mg500母液 3 250ml Na2.EDTAFeSO4.7H2O932.5mg695mg100母液 4 500ml烟酸VB6VB1肌醇甘氨酸12.5mg12.5mg
2、2.5mg2.5g50mg1000MS 固体培养基:以配 1LMS 固体培养基为准:MS 固体干粉 41.5g蒸馏水 1L2g/l 的 6-BA 2.5ml2g/l 的 IBA 0.25ml注意:待溶液配好后,用 pH 计将溶液的 pH 值调到 5.8 6.0,煮沸至均匀无沉淀后,分装 20 小瓶(即 50mL/瓶) ,灭菌之前盖子不要拧太紧,出锅后再拧紧盖子。MS 液体培养基:以配 1LMS 液体培养基为准:母液 1 5ml母液 1 10ml母液 1 5ml母液 2 1ml母液 3 5ml母液 4 1ml2g/l 的 6-BA 0.5ml2g/l 的 IBA 0.1ml蔗糖 30g注意:待溶液在烧杯中混匀之后,转移到 1000ml 的容量瓶中定容。LB 液体培养基:以配 1LLB 液体培养基为准:蛋白胨(TRYPTONE) 10g酵母提取液(YEASTExTrACT ) 5gNaCl 10g 注意:粉末在烧杯中溶解完全之后,转移到 1000ml 的容量瓶中定容。待灭菌结束后,温度降至 55左右(不烫手)时,加入 Kana(50mg/L)1000Ul(在超净台内进行)。LB 固体培养基
3、:以配 1LLB 固体培养基为准:蛋白胨(TRYPTONE) 10g酵母提取液(YEASTExTrACT ) 5gNaCl 10g琼脂粉 15g注意:粉末在烧杯中溶解完全之后,转移到 1000ml 的容量瓶中定容。待灭菌结束后,温度降至 55左右(不烫手)时,加入 Kana(50mg/L)1000Ul(在超净台内进行)。 在进行到平板。组织培养体系的建立外植体获得具体操作:1将外植体(用镊子)夹到其中一个空培养罐中2倒入 75%的酒精消毒 30S,重复三次。3倒入升汞消毒 4min,一次。4倒入蒸馏水清洗,重复三次。5盖上盖子,备用。6点燃酒精灯,在另一只空的培养罐中倒入些 75%的酒精(用于铁制仪器消毒)。7将铁架子在酒精灯上进行消毒,镊子和手术刀浸入培养罐中,然后放在酒精灯上灼烧,起杀菌作用。8用镊子夹住一培养皿在酒精灯上稍微烫下,灭菌。9在培养皿中倒入少量的蒸馏水。10 用经冷却的镊子将外植体夹到带少量蒸馏水的培养皿中,用刀切取其腋芽,将腋芽外的壳小心剥去,再在腋芽的尖端切一刀,使其暴露生长点。11 打开培养基瓶子之前在酒精灯上稍微烫下,打开瓶盖后,瓶口在酒精灯上灼烧下,以防污染
4、。12 用镊子将腋芽植入培养基中,瓶口灼烧下,旋紧盖子。注意:镊子和手术刀要经常灼烧,必要时可将镊子和刀柄进行高压灭菌,以防污染。1) 组织培养诱导芽再生具体操作:1. 点燃酒精灯,从装有酒精的培养罐中拿出刀和镊子在酒精灯上灼烧。2. 用镊子夹住一培养皿在酒精灯上稍微烫下,灭菌。3. 待刀和镊子冷却后,从一培养瓶中取出芽丛放在准备好的培养皿上。4. 用刀切取其嫩芽,并把老芽切短。5. 将嫩芽植入培养基中,通常是每瓶培养瓶中接 6 颗老芽或 7 颗嫩芽。注意点同上。2) 组织培养诱导根再生具体操作和注意点同上,不同是此过程只需要用到健壮的幼芽。3) 植物移栽、驯化具体操作:1. 从瓶中取出竹苗,洗净培养基,2. 寄栽于育苗箱的基质上(珍珠岩砂壤土=11),浇足定根水,定期喷洒营养液(MS 培养液) ,3. 用塑料膜调节温度、湿度和光照,4. 统计成活率及竹苗生长状况,待新发健壮根系后移往大棚。转基因体系的建立农杆菌培养具体操作:1. 挑取携带植物表达载体质粒的农杆菌单菌落。2. 接种在 50mg/LKana 的 LB 液体培养基中,28,160rpm 振荡培养过夜。3. 活化过夜的农杆菌
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